豆渣DNA及其酶解物的體內(nèi)抗氧化作用

董和亮，柴菜建，邵美麗，*

（1.黑龍江省墾區(qū)質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢驗檢測中心，黑龍江哈爾濱150090；2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江哈爾濱150030）

豆渣DNA及其酶解物的體內(nèi)抗氧化作用

董和亮1，柴菜建2，邵美麗2，*

（1.黑龍江省墾區(qū)質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢驗檢測中心，黑龍江哈爾濱150090；2.東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，黑龍江哈爾濱150030）

研究豆渣DNA及其酶解物對正常小鼠的體內(nèi)抗氧化作用。將80只昆明小鼠隨機分為8組，每天分別灌胃VE（30mg/kg）、生理鹽水（NS）、不同劑量的DNA（30、60、120mg/kg）及DNA酶解物（30、60、120mg/kg）。30天后，取血、肝臟和腦，測定其中SOD、CAT、GSH-Px的活性及MDA含量。試驗結(jié)果表明豆渣DNA及其酶解物均可以提高正常小鼠血清、肝臟和腦中SOD、CAT及GSH-Px活性，降低MDA含量，尤以DNA酶解物組效果為佳。此說明豆渣DNA及其酶解物均具有一定的抗氧化能力，且豆渣DNA酶解物的抗氧化能力強于豆渣DNA。

豆渣；DNA；酶解物；抗氧化

核酸（DNA和RNA）是構(gòu)成生物細胞最重要的物質(zhì)基礎(chǔ)[1]，它與人類生命的延續(xù)、疾病的預(yù)防與治療、生物細胞的衰老、蛋白質(zhì)的合成等有著密切的聯(lián)系[2]，在國外醫(yī)學(xué)營養(yǎng)學(xué)中已將核酸列為第七種必需營養(yǎng)素[3]。近幾年，DNA的抗氧化功能已成為國內(nèi)外的研究熱點[4-6]。劉潤芝等[7]研究發(fā)現(xiàn)，鯉魚精巢DNA對機體自由基有明顯的清除作用；唐孝禮[8]研究發(fā)現(xiàn)鯉魚精巢DNA可以明顯提高自然衰老小鼠體內(nèi)的抗氧化酶活性；Ames等[9]研究證明核酸及其衍生物可作為內(nèi)源性自由基清除劑和抗氧化劑。食用性DNA主要從海產(chǎn)品和花粉等核酸含量較高的材料中獲得[10]，資源有限。有研究表明，豆渣中含有1%左右的核酸，是一種十分理想的核酸源[11]，且國內(nèi)外對于植物性DNA的抗氧化功效研究甚少[12-13]，更未有過對DNA酶解前、后抗氧化功能的比較。故本研究以實驗室前期制備的豆渣DNA及其酶解物為對象，進行了小鼠的體內(nèi)抗氧化試驗，比較了DNA酶解前后的抗氧化性，旨為豆渣DNA的藥用價值和功能性食品開發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與設(shè)備

豆渣DNA、DNA酶解物：均由東北農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院食品科學(xué)實驗室制備、保存；昆明小鼠：哈藥試驗動物中心；丙二醛（MDA）試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）試劑盒、超氧化物歧化酶（SOD）試劑盒、過氧化氫酶（CAT）試劑盒：南京建成生物研究生生產(chǎn)；其余試劑：均為分析純。

AL-104型精密電子天平：上海精密科學(xué)儀器有限公司；TDL-40B低速離心機：上海安亭科學(xué)儀器廠；UVmini1240紫外可見分光光度計：日本島津公司；HH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋：常州國華電器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 試驗動物的分組及飼喂

選取健康昆明小白鼠80只，體重（20.0±2.0）g，雌雄各半。用全價顆粒飼料預(yù)飼一周后，進入正式試驗。隨機分為8組：空白對照組（等體積生理鹽水）、VE對照組（30mg/kg）、DNA劑量組（30、60、120mg/kg）及DNA酶解物劑量組（30、60、120mg/kg），每組10只，雌雄各半，每天經(jīng)口灌胃一次，每次0.5mL，連續(xù)30 d，自由采食和飲水。

1.2.2 樣品采集

飼喂30 d后，禁食12 h，摘除眼球進行眼眶取血，并迅速頸椎脫臼法處死小鼠，取肝臟和腦，用預(yù)冷的生理鹽水漂洗，剔除脂肪及結(jié)締組織，濾紙吸干表面水分，置于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

血清的制備：將血液在3 000 r/min下離心15min，用無菌注射器取出血清，收集于干凈的離心管中，-4℃保存待測。

組織勻漿的制備：將器官組織置于玻璃勻漿器中，加入一定量預(yù)冷的PBS緩沖液，在0℃~4℃下制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)為10%的組織勻漿，在4℃，3 000 r/min下離心15min，取上清液于-4℃保存待測。

1.2.3 指標(biāo)測定

按照南京建成生物研究所試劑盒說明書，分別測定SOD、CAT和GSH-Px的活力以及MDA含量。

1.2.4 統(tǒng)計分析

試驗結(jié)果以X±SD形式表示，采用SPSS16.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 小鼠體內(nèi)MDA含量

經(jīng)過30 d試驗后，各組小鼠血清、肝臟和腦中MDA含量見表1。

表1 各組小鼠組織中的MDA含量Tab le1 The contentofMDA inm ice tissueof allgroups

MDA即脂質(zhì)過氧化物的代謝產(chǎn)物之一，MDA的高低可以反映出機體脂質(zhì)過氧化程度。由表1可知，各試驗組小鼠血清、肝臟及腦中的MDA含量均低于空白對照組，且DNA高劑量組和DNA酶解物高劑量組與空白對照組相比，差異顯著（P＜0.05）。同時，各試驗組小鼠血清、肝臟及腦中的MDA含量均高于VE對照組，但DNA高劑量組和DNA酶解物中、高劑量組與VE對照組相比，差異不顯著（P＞0.05）。這說明DNA及其酶解物均可抑制小鼠血清、肝臟及腦MDA的產(chǎn)生，具有一定的抗氧化能力，尤其是DNA高劑量組和DNA酶解物中、高劑量組效果較好。

DNA低、中、高劑量組小鼠血清、肝臟及腦中的MDA含量均隨濃度增高而降低，DNA酶解物組亦相同。此說明在一定濃度范圍內(nèi)，DNA及其酶解物的抗氧化能力與其濃度呈正相關(guān)。

DNA組與DNA酶解物組相比，在相同劑量下，酶解物組小鼠血清、肝臟及腦的MDA含量要明顯低于DNA組，說明豆渣DNA酶解物的抗氧化能力優(yōu)于豆渣DNA。

2.2 小鼠體內(nèi)SOD活性

經(jīng)過30 d試驗后，小鼠血清、肝臟和腦中SOD活性變化見表2。

表2 各組小鼠組織中的SOD活性Table2 SOD activity inm ice tissueofallgroups

SOD是機體內(nèi)一類重要的氧自由基清除酶，可以作為抗氧化的重要指標(biāo)[14]。由表2可知，各試驗組小鼠血清、肝臟及腦中的SOD活性均高于空白對照組，且DNA高劑量組和DNA酶解物高劑量組與空白對照組相比，差異顯著（P＜0.05）。同時，各試驗組小鼠血清、肝臟及腦中的SOD活性均低于VE對照組，但DNA酶解物高劑量組小鼠血清和肝臟中SOD活性與VE對照組相比，差異不顯著（P＞0.05）。這說明DNA及其酶解物均可提高小鼠血清、肝臟及腦內(nèi)SOD活性，尤其是DNA酶解物高劑量組對小鼠血清及肝臟中SOD活性影響最大。

DNA低、中、高劑量組小鼠血清、肝臟及腦中的SOD活性均隨濃度增大而升高，DNA酶解物組亦相同。此說明在一定濃度范圍內(nèi)，DNA及其酶解物對小鼠血清、肝臟及腦中的SOD活性的提高與其濃度呈正相關(guān)。

DNA組與DNA酶解物組相比，在相同劑量下，酶解物組小鼠血清、肝臟及腦中的SOD活性要明顯高于DNA組。且DNA酶解物中、高劑量組小鼠肝臟和腦中SOD活性顯著高于相同劑量的DNA組（P＜0.05）。這表明豆渣DNA酶解物對小鼠血清、肝臟及腦中SOD活性的提高效果優(yōu)于豆渣DNA。

2.3 小鼠體內(nèi)GSH-Px活性

經(jīng)過30 d試驗，小鼠血清、肝臟和腦中GSH-Px活性變化見表3。

表3 各組小鼠組織中的GSH-Px活性Table3 GSP-Px activity inm ice tissueof allgroups

GSH-Px是機體內(nèi)的一種重要的抗氧化酶，能夠特異性催化GSH對氫過氧化物的還原反應(yīng)，阻斷體內(nèi)脂質(zhì)過氧化。GSH-Px活性的變化可以反映機體抗氧化能力[15]。由表3可知，各試驗組小鼠血清、肝臟及腦中的GSH-Px活性均高于空白對照組，且血清中，DNA酶解物高劑量組與空白對照組相比，差異顯著（P＜ 0.05）；肝臟中，DNA高劑量組和DNA酶解物中、高劑量組與空白對照組相比，差異顯著（P＜0.05）；腦中，DNA中、高劑量組和DNA酶解物低、中、高劑量組與空白對照組相比，差異顯著（P＜0.05）。同時，各試驗組小鼠血清、肝臟及腦中的GSH-Px活性均低于VE對照組，但DNA酶解物高劑量組小鼠血清和肝臟中GSHPx活性與VE對照組相比，差異不顯著（P＞0.05）。以上說明DNA及其酶解物均可提高小鼠血清、肝臟及腦內(nèi)GSH-Px活性，尤其對小鼠腦中GSH-Px活性影響最大。

DNA低、中、高劑量組小鼠血清、肝臟及腦中的SOD活性均隨濃度增大而升高，DNA酶解物組亦相同。這表明在一定濃度范圍內(nèi)，DNA及其酶解物對小鼠血清、肝臟及腦中的GSH-Px活性的提高與其濃度呈正相關(guān)。

DNA組與DNA酶解物組相比，在相同劑量下，酶解物組小鼠血清、肝臟及腦中的GSH-Px活性要明顯高于DNA組。且高劑量組相比，差異顯著（P＜0.05）。這進一步說明豆渣DNA酶解物對小鼠血清、肝臟及腦中GSH-Px活性的提高效果優(yōu)于豆渣DNA。

2.4 小鼠體內(nèi)CAT活性

經(jīng)過30 d的試驗后，小鼠血清和肝臟中CAT活性變化見表4。

表4 各組小鼠組織中的CAT活性Table4 CAT activity inm ice tissueof allgroups

作為機體細胞中的一種重要抗氧化酶，CAT的活力水平直接影響了機體的抗氧化能力。由表4可知，各試驗組小鼠血清、肝臟及腦中的CAT活性均高于空白對照組，且DNA中、高劑量組和DNA酶解物中、高劑量組與空白對照組相比，差異顯著（P＜0.05）。同時，各試驗組小鼠血清、肝臟及腦中的CAT活性均低于VE對照組，但DNA酶解物高劑量組小鼠肝臟中CAT活性與VE對照組相比，差異不顯著（P＞0.05）。以上說明DNA及其酶解物均可提高小鼠血清、肝臟及腦內(nèi)CAT活性，尤其是DNA酶解物高劑量組對小鼠血肝臟中CAT活性影響最大。

DNA低、中、高劑量組小鼠血清、肝臟及腦中的CAT活性均隨濃度增大而升高，DNA酶解物組亦相同。這說明在一定濃度范圍內(nèi)，DNA及其酶解物對小鼠血清、肝臟及腦中的CAT活性的提高與其濃度呈正相關(guān)。

DNA組與DNA酶解物組相比，在相同劑量下，酶解物組小鼠血清、肝臟及腦中的CAT活性要明顯高于DNA組。且中、高劑量組相比，差異顯著（P＜0.05），說明豆渣DNA酶解物對小鼠血清、肝臟及腦中CAT活性的提高效果優(yōu)于豆渣DNA。

3 結(jié)論

各劑量組與空白對照組相比，小鼠體內(nèi)SOD、GSH-Px和CAT活性均有不同程度的升高，MDA含量也明顯下降，且在30mg/kg~120mg/kg的給藥范圍內(nèi)，豆渣DNA及其酶解物的濃度與抗氧化能力呈現(xiàn)量效關(guān)系。在相同濃度下，DNA酶解物組中SOD、GSH-Px和CAT活性的增加幅度以及MDA含量的減少幅度都明顯優(yōu)于DNA組，且在高劑量組之間達到了顯著水平，說明DNA酶解后的抗氧化水平明顯高于DNA。與VE相比，DNA酶解物高劑量組雖弱于VE的抗氧化水平，但差異并不顯著。因此豆渣DNA及其酶解物具有一定的抗氧化功效，且后者優(yōu)于前者。

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Antioxidative Activity of DNA and its Hydrolysates from Soybean Dregs in Vivo

DONGHe-liang1，CHAICai-jian2，SHAOMei-li2，*

（1.Heilongjiang Province Quality and Technical Supervision and Inspection Center，Harbin 150090，Heilongjiang，China；2.College of Food Science，Northeast Agriculture University，Harbin 150030，Heilongjiang，China）

Theantioxidantactivity ofDNA and itshydrolysates from soybean dregs inmicewere studied.Eighty mice were divided into eight groups random ly，and administered with Vitamin E（VE），normal saline（NS），differentdosesofDNA（30，60，120mg/kg）and hydrolysates（30，60，120mg/kg）day respectively.Themice were decollated and blood serum，liver，brain were collected after 30 days，then CAT，SOD，GSH-Px activity and MDA contentin serum，liverand brain ofmicewere examined.The resultsshowed DNA and itshydrolysates from soybean dregs could improve the activity of SOD，CAT and GSH-Px in the serum，liver and brain and decrease the contentsofMDA in themice，especially the hydrolysates.In conclusion，DNA and itshydrolysates from soybean dregshad thesignificantlyantioxidantactivity in vivo，and thehydrolysateswerebetter than DNA.

soybean；DNA；hydrolysates；antioxidant

2014-05-15

10.3969/j.issn.1005-6521.2014.23.002

黑龍江省博士后科研啟動基金（LBH-Q10152）

董和亮（1980—），男（漢），工程師，學(xué)士，研究方向：食品中活性物質(zhì)檢測、分析。

*通信作者