麥冬藥材及飲片質(zhì)量狀況分析研究

孔令鋒，汪冰，周倩倩，劉洪超，林永強(qiáng)*

1.遼寧省藥品檢驗(yàn)檢測(cè)院，沈陽(yáng) 110036；2.山東省食品藥品檢驗(yàn)研究院，濟(jì)南 250101

麥冬為百合科沿階草屬植物麥冬Ophiopogon japonicus（L.f）Ker-Gawl.的燥塊根。味甘、微苦，性微寒。具有養(yǎng)陰生津，潤(rùn)肺清心之功效。為臨床常用藥味，可用于肺燥干咳，陰虛癆嗽，喉痹咽痛，津傷口渴，內(nèi)熱消渴，心煩失眠，腸燥便秘的治療［1］。麥冬藥材主要為栽培品，且栽培歷史悠久，主產(chǎn)于浙江和四川，由于其產(chǎn)地不同分別稱為浙麥冬和川麥冬［2］。麥冬藥材和飲片的現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)收載于《中國(guó)藥典》2015年版一部。由于價(jià)格差異，資源缺乏等因素的影響，導(dǎo)致麥冬品種較混亂。目前市場(chǎng)上發(fā)現(xiàn)存在麥冬與山麥冬混用、硫磺過(guò)度熏蒸等問(wèn)題，嚴(yán)重影響了麥冬藥材及飲片的質(zhì)量安全。

針對(duì)上述問(wèn)題，本研究對(duì)188批次麥冬藥材及飲片樣品的按現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，并進(jìn)行探索性研究、分析和評(píng)價(jià)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Waters2695高效液相色譜儀；METTLER XSE205電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；超純水儀（美國(guó)Millipore公司）；中藥二氧化硫測(cè)定儀（山東盛泰ST107-1RW）。

1.2 材料

對(duì)照品甲基麥冬黃烷酮A購(gòu)自成都普菲德生物科技有限公司，甲基麥冬黃烷酮B購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司，純度≥98%；甲醇、乙腈為色譜純。麥冬樣品，共188批次，涉及生產(chǎn)企業(yè)142家，分布在27個(gè)省份。

2 方法與結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)結(jié)果及分析

以《中國(guó)藥典》2015年版一部和四部附錄0212藥材和飲片檢定通則為檢驗(yàn)依據(jù)，選擇性狀、鑒別（顯微鑒別、薄層色譜鑒別）、檢測(cè)（水分、總灰分、二氧化硫殘留量）、含量測(cè)定進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，188批次中有42批次不合格，不合格率為22.3%，主要不合格項(xiàng)目為二氧化硫殘留量、性狀、薄層色譜鑒別、顯微鑒別、總灰分。檢驗(yàn)結(jié)果見表1。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)項(xiàng)目結(jié)果分析

2.2.1 性狀針對(duì)麥冬與山麥冬混用的現(xiàn)象，依據(jù)《中國(guó)藥典》2015年版一部性狀項(xiàng)，結(jié)果188批樣品中，24批樣品不符合麥冬項(xiàng)下性狀規(guī)定，其中22批樣品為山麥冬中的湖北麥冬，2批樣品為山麥冬中的短葶山麥冬。麥冬與山麥冬主要區(qū)別點(diǎn)為麥冬長(zhǎng)1.5～3 cm，表面黃白色或淡黃色，有細(xì)縱紋，氣微香，味甘、微苦，而湖北麥冬具不規(guī)則縱皺紋，氣微，味甜，嚼之發(fā)黏，短葶山麥冬稍扁，表面淡黃色至棕黃色，長(zhǎng)2～5 cm，具粗縱紋。

表1 麥冬藥材及飲片檢驗(yàn)結(jié)果表

2.2.2 顯微鑒別按現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，188批樣品中24批樣品不符合規(guī)定，不符合規(guī)定樣品為湖北麥冬和短葶山麥冬，與性狀結(jié)果相一致。麥冬和山麥冬橫切面的主要區(qū)別點(diǎn)為髓部木化程度、增厚的內(nèi)皮層細(xì)胞壁、韌皮部束，具體為麥冬“內(nèi)皮層細(xì)胞壁均勻增厚，中柱較小，韌皮部束16～22個(gè)”，而湖北麥冬“內(nèi)皮層細(xì)胞壁增厚，但不均勻，中柱甚小，韌皮部束7～15個(gè)”，而短葶山麥冬“內(nèi)皮層細(xì)胞壁增厚，但不均勻，韌皮部束16～20個(gè)”，同時(shí)山麥冬髓部木化程度均明顯高于麥冬。見圖1～3。

2.2.3 薄層色譜鑒別按現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，結(jié)果188批樣品中24批樣品不符合規(guī)定，不符合規(guī)定樣品為湖北麥冬和短葶山麥冬，與性狀和顯微結(jié)果相一致。藥典規(guī)定的麥冬薄層條件基本能夠區(qū)分麥冬與山麥冬，對(duì)麥冬進(jìn)行有效控制。部分樣品薄層色譜見圖4。

2.2.4 檢查項(xiàng)測(cè)定按現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，結(jié)果188批麥冬藥材及飲片的水分全部符合規(guī)定，總灰分項(xiàng)中1批不符合規(guī)定，對(duì)該批總灰分不符合規(guī)定的樣品進(jìn)行鎂鹽、鋁鹽的檢查，結(jié)果呈陽(yáng)性反應(yīng)。36批樣品二氧化硫殘留量超過(guò)《中國(guó)藥典》2015年版四部藥材與飲片檢定通則中規(guī)定限度（應(yīng)不得過(guò)150 mg/g）。從測(cè)定結(jié)果分布圖（圖5）可見，二氧化硫殘留量大于50 mg/kg的樣品有58批，占總樣品數(shù)的30.9%，其中超過(guò)1 000 mg/kg的樣品達(dá)16批，說(shuō)明麥冬藥材及飲片仍然存在較嚴(yán)重的硫磺熏蒸問(wèn)題。

2.2.5 含量測(cè)定按現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)，采用紫外-可見吸收分光光度法測(cè)定麥冬總皂苷含量，結(jié)果188批樣品全部符合規(guī)定。但是綜合樣品性狀、顯微鑒別和薄層鑒別的結(jié)果，分別按麥冬、山麥冬中的湖北麥冬和山麥冬中的短葶山麥冬分類對(duì)總皂苷測(cè)定結(jié)果進(jìn)行分析，從測(cè)定結(jié)果的箱線圖（圖6）可見，麥冬中總皂苷的含量主要集中在0.12%～0.30%范圍內(nèi)，而短葶山麥冬和湖北麥冬的結(jié)果要明顯高于麥冬，說(shuō)明質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中采用紫外-可見分光光度法測(cè)定總皂苷的含量很難評(píng)價(jià)麥冬藥材及飲片的質(zhì)量。

2.3 探索性研究

由于按藥典標(biāo)準(zhǔn)的含量測(cè)定項(xiàng)測(cè)定麥冬中總皂苷的含量發(fā)現(xiàn)，紫外法測(cè)定總皂苷含量不能有效反映不同等級(jí)麥冬藥材質(zhì)量，說(shuō)明僅僅測(cè)定總皂苷的含量很難評(píng)價(jià)麥冬藥材及飲片的質(zhì)量?jī)?yōu)劣。而且試驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，該方法專屬性和重現(xiàn)性較差。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，麥冬的主要成分為皂苷類和黃酮類化學(xué)成分，而文獻(xiàn)報(bào)道浙麥冬中黃酮類成分高于川麥冬［3,4］，考慮到藥材的道地性，故建立麥冬中黃酮類成分的含量測(cè)定方法，對(duì)188批麥冬樣品進(jìn)行測(cè)定，全面評(píng)價(jià)麥冬藥材質(zhì)量。

2.3.1 色譜條件Kromasil 100-5 C18色譜柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；以乙腈-0.1%磷酸（45∶55）為流動(dòng)相；流速：1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為296 nm；柱溫30 ℃。理論板數(shù)按甲基麥冬黃烷酮A峰計(jì)算應(yīng)不低于4 000。并采用依利特Hypersil BDS C18 （4.6 mm×250 mm，5 μm）和島津Shim-pack VP-ODS（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱對(duì)上述色譜條件進(jìn)行測(cè)試，結(jié)果甲基麥冬黃烷酮A峰理論板數(shù)均高于4 000，色譜峰的峰形較好，說(shuō)明試驗(yàn)條件適用范圍廣。

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備精密稱取甲基麥冬黃烷酮A對(duì)照品和甲基麥冬黃烷酮B對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含甲基麥冬黃烷酮A 10.66 μg、甲基麥冬黃烷酮B 9.98 μg的混合溶液，即得。

2.3.3 供試品溶液的制備取本品細(xì)粉約3.0 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，稱定重量，加熱回流1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 專屬性考察取混合對(duì)照品溶液、麥冬供試品溶液、湖北麥冬供試品溶液和短葶山麥冬供試品溶液適量，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，色譜圖見圖7。甲基麥冬黃烷酮A、甲基麥冬黃烷酮B的保留時(shí)間分別為21.3、24.3 min，各色譜峰的分離度均符合要求。

2.3.5 線性關(guān)系考察分別精密吸取“2.3.2”下對(duì)照品溶液各1、5、10、15、20、25 μL，注入液相色譜儀，分別測(cè)定峰面積積分值，以對(duì)照品的進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程分別為Y=4 619 695.877 5X-10 493.104 0，Y=2 644 350.782 1X-6 277.060 4。相關(guān)系數(shù)分別為r=1.000 0和r=0.999 9 。試驗(yàn)結(jié)果表明，甲基麥冬黃烷酮A進(jìn)樣量在0.010 66～0.266 5 μg之間，甲基麥冬黃烷酮B進(jìn)樣量在0.009 98～0.249 5 μg之間，與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系。

2.3.6 精密度試驗(yàn)分別精密吸取甲基麥冬黃烷酮A和甲基麥冬黃烷酮B對(duì)照品溶液（濃度分別為0.010 66 mg/mL和0.009 98 mg/mL）10 μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，分別計(jì)算其峰面積積分值的RSD為0.83%和0.20%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一批麥冬供試品溶液，按“2.3.1”項(xiàng)下色譜條件分別在0、2、4、8、12、16、24 h分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算甲基麥冬黃烷酮A和甲基麥冬黃烷酮B的峰面積RSD分別為0.60%和0.74%。表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，能夠滿足測(cè)定需要。

2.3.8 重復(fù)性試驗(yàn)取同一批麥冬供試品6份，按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，注入液相色譜儀，測(cè)定，分別計(jì)算甲基麥冬黃烷酮A和甲基麥冬黃烷酮B的含量，計(jì)算RSD分別為0.84%和0.91%。結(jié)果表明，本品含量測(cè)定方法的重復(fù)性良好。

2.3.9 加樣回收率試驗(yàn)取已測(cè)知含量的麥冬樣品6份，取樣1.5 g，精密加入混合對(duì)照品溶液1 mL（濃度分別為甲基麥冬黃烷酮A 0.106 6 mg/mL、甲基麥冬黃烷酮B 0.099 8 mg/mL），照2.3.3項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制成供試品溶液。注入液相色譜儀，測(cè)定，分別計(jì)算甲基麥冬黃烷酮A和甲基麥冬黃烷酮B的回收率分別為98.1%和97.6%，RSD分別為1.32%和1.06%。結(jié)果表明，測(cè)定方法的回收率良好。

2.3.10 樣品測(cè)定188批樣品按“2.3.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果以甲基麥冬黃烷酮A和甲基麥冬黃烷酮B之和進(jìn)行計(jì)算，對(duì)其中164批鑒定為麥冬的樣品進(jìn)行測(cè)定，以甲基麥冬黃烷酮A和甲基麥冬黃烷酮B含量之和為指標(biāo)評(píng)價(jià)麥冬的質(zhì)量。測(cè)定值在0.000 9%～0.016 3%范圍內(nèi)，均值為0.008 2%。對(duì)24批山麥冬進(jìn)行測(cè)定，未檢測(cè)到甲基麥冬黃烷酮A和B。說(shuō)明采用甲基麥冬黃烷酮A和甲基麥冬黃烷酮B的含量測(cè)定方法既能評(píng)價(jià)麥冬藥材質(zhì)量?jī)?yōu)劣，又能有效區(qū)分山麥冬摻偽。

3 討論

3.1 麥冬的鑒別

通過(guò)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的檢驗(yàn)，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中的顯微鑒別和薄層色譜鑒別基本能夠有效的對(duì)麥冬及其常見偽品山麥冬進(jìn)行鑒別，但是在檢驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)對(duì)于摻偽樣品存在鑒別困難的問(wèn)題。

3.2 硫磺熏蒸問(wèn)題分析

由測(cè)定結(jié)果可見麥冬仍然存在較嚴(yán)重的硫磺熏蒸問(wèn)題。分析硫熏原因，一方面可能由于麥冬中糖類成分含量較高，在相對(duì)潮濕的環(huán)境下容易發(fā)生霉變，硫熏后則方便貯存不易霉變。另一方面可能由于麥冬的產(chǎn)地加工需要反復(fù)暴曬后再處理干燥，耗時(shí)長(zhǎng)，受天氣因素影響較大，而硫磺熏蒸作為相對(duì)簡(jiǎn)單的加工方式，很有可能替代傳統(tǒng)的復(fù)雜加工方法，并且有研究表明川麥冬在產(chǎn)地加工過(guò)程中有使用硫磺熏蒸的情況［5］。再一方面22批湖北麥冬摻偽品中19批二氧化硫殘留量超標(biāo)，占比達(dá)到86.7%。推測(cè)可能因?yàn)楹丙湺橇扛?，長(zhǎng)時(shí)間放置顏色會(huì)變深，故采用硫磺熏蒸以增白防霉。

3.3 總體質(zhì)量評(píng)價(jià)

通過(guò)本次研究工作，發(fā)現(xiàn)麥冬藥材及飲片質(zhì)量狀況主要存在以下質(zhì)量問(wèn)題：一是由于麥冬和山麥冬的地方習(xí)用問(wèn)題以及存在價(jià)格差異等原因，導(dǎo)致目前市場(chǎng)上存在山麥冬與麥冬的混用以及摻偽。二是由于麥冬自身較高的含糖量及復(fù)雜的產(chǎn)地加工等原因，可能帶來(lái)麥冬硫磺過(guò)度熏蒸。三是雖然僅1批樣品檢測(cè)到存在使用無(wú)機(jī)鹽增重的問(wèn)題，卻說(shuō)明麥冬仍存在無(wú)機(jī)鹽增重的安全隱患。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)和檢驗(yàn)方法存在的問(wèn)題

麥冬現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中的檢測(cè)項(xiàng)目比較完善，基本可以用于麥冬的真?zhèn)舞b別，但采用紫外-可見吸收分光光度法測(cè)定麥冬中總皂苷的含量方法專屬性不強(qiáng)，尤其山麥冬的價(jià)格遠(yuǎn)低于麥冬，但其皂苷的含量明顯高于麥冬，因此總皂苷的含量方法不能有效評(píng)價(jià)麥冬藥材及飲片的質(zhì)量?jī)?yōu)劣。不同等級(jí)麥冬質(zhì)量差異大，因此應(yīng)增加麥冬中特征成分含量測(cè)定，有效評(píng)價(jià)藥材的質(zhì)量，以利于麥冬藥材分級(jí)評(píng)價(jià)。

3.5 麥冬的含量測(cè)定

由于浙麥冬和川麥冬生長(zhǎng)年限不同等原因造成其成分含量差異，但主要成分均為皂苷類和黃酮類，試驗(yàn)中曾對(duì)麥冬皂苷D成分進(jìn)行測(cè)定，由于皂苷類成分沒有紫外吸收，采用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器進(jìn)行測(cè)定的響應(yīng)值偏低且測(cè)定含量亦較低，與之相比較黃酮類成分有較強(qiáng)的紫外吸收，且含量相對(duì)較高。有研究表明浙麥冬中黃酮類成分高于川麥冬，而文獻(xiàn)表明浙麥冬的記載早于川麥冬，且質(zhì)量?jī)?yōu)于川麥冬，故認(rèn)為浙麥冬為道地藥材［3,6］，因此考慮到藥材分級(jí)評(píng)價(jià)，采用黃酮類成分對(duì)麥冬藥材及飲片進(jìn)行評(píng)價(jià)。

3.6 建議

本研究發(fā)現(xiàn)麥冬藥材及飲片主要質(zhì)量問(wèn)題為偽品的混用和硫磺熏蒸。因此建議加強(qiáng)麥冬藥材種植生產(chǎn)、流通、使用領(lǐng)域的監(jiān)管，對(duì)麥冬造假、摻偽及以次充好等違法行為進(jìn)行跟蹤監(jiān)管，保障公眾的用藥安全和有效。