膠體金的疫苗遞送及佐劑效應(yīng)研究進(jìn)展

張義浜，楊昱華

1.江蘇大學(xué) 藥學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江 212013；2.鎮(zhèn)江市第四人民醫(yī)院，江蘇 鎮(zhèn)江 212000

納米顆粒，由于其尺寸與細(xì)胞主要組分和蛋白接近，容易通過內(nèi)吞機(jī)制進(jìn)入活細(xì)胞，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中得到廣泛研究與應(yīng)用[1]。膠體金因其尺寸處于納米級(jí)，更多地被稱為納米金或金納米顆粒（gold nanoparticles，GNPs）。其具有形狀和粒徑可控、易于表面改性和修飾等優(yōu)點(diǎn)，并且有良好的生物相容性，被認(rèn)為是一類具有潛力的疫苗遞送載體。本文擬就膠體金在疫苗遞送及其佐劑效應(yīng)方面，尤其在無針化免疫方面的應(yīng)用研究進(jìn)展做簡(jiǎn)要綜述。

1 膠體金作為疫苗載體及其佐劑效應(yīng)

研究表明，膠體金能促進(jìn)抗原特異性抗體的產(chǎn)生，具有免疫佐劑效應(yīng)，被用于設(shè)計(jì)包括抗腫瘤以及多種傳染性疾病的預(yù)防性疫苗。

2016年，Dakterzada等[2]報(bào)道了膠體金與銅綠假單胞菌鞭毛蛋白部分肽段的結(jié)合，評(píng)價(jià)了其對(duì)銅綠假單胞菌的免疫佐劑效果，表明膠體金能產(chǎn)生與弗氏佐劑相似的細(xì)胞免疫反應(yīng)，起到殺菌效果。Wang等[3]也證明膠體金作為免疫佐劑，相較于弗氏佐劑能誘導(dǎo)產(chǎn)生更高滴度的特異性抗體。

另有研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)膠體金和其他免疫佐劑聯(lián)合使用時(shí)，可顯著增強(qiáng)免疫效果。PfMSP-119是抑制瘧疾侵襲抗體的靶點(diǎn)，但即使在有鋁佐劑存在的條件下，其免疫原性仍然較弱。Parween等[4]采用膠體金和氫氧化鋁凝膠共同作為PfMSP-119抗原的免疫佐劑，結(jié)果比單用鋁佐劑組的血清抗體滴度增加了約10倍。同樣，將鼠疫桿菌F1抗原與膠體金聯(lián)合鋁凝膠制劑，比單用鋁凝膠制劑產(chǎn)生更強(qiáng)的體液免疫效果，特異性抗體滴度水平不僅更高而且持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)[5]。

Wang等[6]發(fā)現(xiàn)與單用CpG寡脫氧核苷酸相比，CpG與膠體金聯(lián)用能使乙肝核心蛋白（HBc）的特異性抗體滴度、CD4+和CD8+T細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞介素4（IL-4）和干擾素γ（IFN-γ）的表達(dá)水平顯著增加。Dykman等[7]的研究也支持這一觀點(diǎn)。膠體金被認(rèn)為能促進(jìn)樹突狀細(xì)胞對(duì)抗原的提呈，促進(jìn)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞的免疫應(yīng)答反應(yīng)[8]。

除運(yùn)載蛋白類抗原外，膠體金也被用作DNA或RNA疫苗的載體，甚至細(xì)菌膜[9]的載體。Paul等[10]將抗登革熱病毒（DENV）的小干擾RNA（siRNA）與膠體金連接，發(fā)現(xiàn)陽離子膠體金-siRNA復(fù)合物可以進(jìn)入Vero細(xì)胞，并顯著降低感染后DENV血清型2的復(fù)制和感染性病毒的釋放。此外，經(jīng)過RNase處理的膠體金-siRNA復(fù)合物仍能抑制DENV的復(fù)制，表明膠體金對(duì)RNA可以起到保護(hù)和穩(wěn)定的作用。

2 膠體金佐劑效應(yīng)的影響因素

研究發(fā)現(xiàn)，膠體金兼具抗原遞送載體和佐劑效應(yīng)[11]，且受到膠體金自身理化性質(zhì)的影響。

首先，粒徑作為膠體金的重要物理參數(shù)，對(duì)其體內(nèi)分布及免疫佐劑效果有顯著影響。Kang等[12]用卵清蛋白（OVA）包被膠體金，并給OVA額外添加了2個(gè)半胱氨酸基團(tuán)，以通過Au-S鍵與膠體金發(fā)生共價(jià)鍵合。不同粒徑膠體金對(duì)OVA向淋巴結(jié)的輸送效率和誘導(dǎo)CD8+T細(xì)胞反應(yīng)的影響結(jié)果表明，22和33 nm的膠體金比10 nm的膠體金具有更高的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)運(yùn)效率，且能誘導(dǎo)更強(qiáng)的免疫反應(yīng)。Quach等[13]研究了不同粒徑膠體金對(duì)登革熱抗原免疫應(yīng)答反應(yīng)的影響，發(fā)現(xiàn)隨膠體金的粒徑和濃度的增加，特異性抗體滴度也隨之明顯升高。以上研究表明，在一定范圍內(nèi)，粒徑較大的膠體金更有助于免疫應(yīng)答反應(yīng)的產(chǎn)生。

Barhate等[14]研究了不同粒徑膠體金對(duì)破傷風(fēng)毒素（TT）二級(jí)結(jié)構(gòu)的影響，發(fā)現(xiàn)20 nm的膠體金可導(dǎo)致TT二級(jí)結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，抗原的免疫活性降低95%，而40和80 nm的膠體金則不會(huì)對(duì)TT二級(jí)結(jié)構(gòu)和免疫活性造成明顯影響。然而，口蹄疫病毒（FMDV）疫苗的研究者發(fā)現(xiàn)，并非膠體金粒徑越大越有利于疫苗產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，平均粒徑為8～17 nm的膠體金產(chǎn)生的免疫反應(yīng)最強(qiáng)，而且未發(fā)現(xiàn)免疫后的小鼠血清中有針對(duì)膠體金的抗體產(chǎn)生[15]。由此可見，膠體金的免疫佐劑效果沒有絕對(duì)的粒徑依賴性，其具體粒徑的選擇還與其所應(yīng)用的抗原有關(guān)。

其次，膠體金的形狀對(duì)其免疫佐劑有一定影響。Dykman等[7]探究了不同粒徑、形狀的膠體金對(duì)抗原特異性抗體產(chǎn)生的影響，結(jié)果顯示相對(duì)于其他形狀的膠體金，金納米球的免疫佐劑效果最佳，且50 nm的金納米球產(chǎn)生的特異性抗體比15 nm的更多。其在報(bào)道中所列不同形狀的納米金免疫動(dòng)物所產(chǎn)生的特異性抗體滴度順序?yàn)椋杭{米球（nanosphere）＞納米殼（nanoshells）＞納米星（nanostars）＞納米棒（nanorods）。

Niikura等[16]進(jìn)一步系統(tǒng)研究了膠體金形狀對(duì)西尼羅河病毒（WNV）體內(nèi)和體外免疫應(yīng)答反應(yīng)的影響。球形（直徑20和40 nm）、棒狀（40 nm×10 nm）及立方形（40 nm×40 nm×40 nm）的膠體金作為免疫佐劑，并用WNV包膜（Es）蛋白包裹。結(jié)果表明40 nm的金納米球產(chǎn)生的抗體水平最高。為了研究形狀依賴性WNV抗體產(chǎn)生的機(jī)制，他們采用巨噬細(xì)胞 Raw264.7對(duì)膠體金的細(xì)胞攝取效率進(jìn)行了分析，結(jié)果顯示金納米棒比球形更容易被細(xì)胞攝取，表明抗體的產(chǎn)生并不直接依賴于膠體金的細(xì)胞攝取效率。用膠體金處理骨髓來源樹突狀細(xì)胞（BMDC），再對(duì)其表達(dá)的細(xì)胞因子水平進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果只有金納米棒-Es處理的細(xì)胞產(chǎn)生顯著的白細(xì)胞介素1β（IL-1β）和白細(xì)胞介素18（IL-18），表明金納米棒可激活炎癥依賴性細(xì)胞因子的分泌。同時(shí)，金納米球40-Es和立方金-Es均能顯著誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生。這些結(jié)果表明，膠體金是一種有效的疫苗佐劑，隨著其大小和形狀的不同，將會(huì)通過不同的細(xì)胞因子途徑產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)。

最后，表面修飾/改性對(duì)膠體金發(fā)揮免疫佐劑效應(yīng)也存在影響。Moyano等[17]研究發(fā)現(xiàn)，在脂多糖（LPS）存在的條件下，表面經(jīng)疏水性修飾的膠體金能促進(jìn)在小鼠體內(nèi)的炎癥反應(yīng)，提示其具有免疫佐劑效應(yīng)，而PEG修飾的親水性膠體金則顯示出良好的抗炎活性。

表面經(jīng)多糖修飾后的金納米粒子更容易被樹突狀細(xì)胞攝取，能有效增強(qiáng)抗原提呈和T細(xì)胞應(yīng)答，有助于抗腫瘤免疫治療。Climent等[18]在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中證明了表面修飾HIV肽和甘露糖苷的金納米粒子，能顯著增強(qiáng)特異性CD4+和CD8+T細(xì)胞的增殖，可促進(jìn)pro-Th1細(xì)胞因子和趨化因子的分泌，適當(dāng)分泌pro-Th2細(xì)胞因子，顯著提高促炎細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子α（TNF-α）與IL-1β的分泌。Safari等[19]以膠體金負(fù)載由45%四糖和5% OVA323-339組成的糖蛋白產(chǎn)生特異性抗肺炎鏈球菌14型包膜多糖（PN14PS）的IgG抗體，細(xì)胞因子檢測(cè)表明多糖修飾的金納米粒子更能激活輔助性T細(xì)胞。

作者團(tuán)隊(duì)也曾分別制備了OVA與膠體金的物理共混物（OVA+GNPs）以及兩者的共價(jià)復(fù)合物（OVA@GNPs），其平均粒徑均為5 nm左右。通過對(duì)比研究，最先發(fā)現(xiàn)并提出抗原與膠體金的結(jié)合方式，同樣會(huì)影響其體外穩(wěn)定性及體內(nèi)免疫效果。采用一步法制備的共價(jià)復(fù)合物OVA@GNPs能有效誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生與鋁佐劑相當(dāng)?shù)拿庖邞?yīng)答反應(yīng)，且使用劑量極低，安全性高，制備方法簡(jiǎn)單可行，可應(yīng)用于其他抗原[20]。

以上研究結(jié)果顯示，膠體金能促使細(xì)胞因子分泌，幫助多種類型抗原提呈而其本身無明顯的細(xì)胞和免疫毒性，可單獨(dú)或聯(lián)合其他佐劑發(fā)揮免疫佐劑效應(yīng)，有望作為潛在的新型免疫佐劑。然而由于膠體金的粒徑和形狀存在多樣性，且均會(huì)影響到免疫細(xì)胞的攝取以及細(xì)胞因子的釋放，產(chǎn)生不同的免疫效應(yīng)，再加上納米粒子表面的親疏水性和糖基化修飾等與其與免疫細(xì)胞的相互作用密切相關(guān)，膠體金作為免疫佐劑還有待于更加具體、深入和廣泛的研究。

3 膠體金在無針免疫中的應(yīng)用

3.1 膠體金在黏膜免疫中的應(yīng)用

現(xiàn)已獲批上市的疫苗大多通過皮下或肌肉注射完成接種[21]。注射接種傾向于誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生系統(tǒng)性免疫，較難引發(fā)局部的黏膜免疫。如果能誘導(dǎo)分泌針對(duì)黏膜表面特定病原體的IgA（sIgA）抗體，就可以有效預(yù)防通過黏膜傳染的疾病，但目前只有少量的黏膜免疫類疫苗被獲批上市，提示該類疫苗的研發(fā)存在較大的難度和挑戰(zhàn)，其主要原因在于：①黏膜長(zhǎng)期接觸各種抗原，易發(fā)生免疫耐受，因此需要高劑量的抗原刺激或配合使用強(qiáng)免疫佐劑；②由于黏膜環(huán)境存在各種酶以及微生物，要成功引發(fā)免疫應(yīng)答反應(yīng)，抗原需要具有良好的穩(wěn)定性；③經(jīng)黏膜免疫的疫苗須穿透防御性良好的上皮細(xì)胞屏障，才有可能被黏膜的抗原提呈細(xì)胞捕獲。因此，與注射類疫苗不同，依靠黏膜遞送疫苗由于在實(shí)際應(yīng)用中接種劑量存在不確定性，且黏膜免疫后所產(chǎn)生的sIgA不易被檢測(cè)[21]，開發(fā)能夠幫助抗原通過黏膜，并產(chǎn)生相應(yīng)免疫應(yīng)答的疫苗載體，對(duì)黏膜疫苗的成功研發(fā)至關(guān)重要。

理想的黏膜免疫抗原載體，需要能夠保證抗原的穩(wěn)定性、生物利用度以及抗原攝取率，且載體應(yīng)具有佐劑活性或可搭載有效的免疫佐劑。膠體金作為潛在的抗原載體之一，能夠有效提高抗原在體內(nèi)外的穩(wěn)定性[22]，可通過不同的作用方式與抗原結(jié)合，并在膠體金表面高密度展示。膠體金的粒徑大小可控，尤其小粒徑的膠體金易于穿過上皮細(xì)胞與淋巴細(xì)胞接觸，發(fā)揮佐劑效應(yīng)。目前已有研究報(bào)道膠體金在鼻疽病、流感及破傷風(fēng)等疾病中作為抗原載體，展示其在黏膜免疫中的潛在應(yīng)用前景。

鼻疽病的病原體是鼻疽假單胞菌，通過氣溶膠經(jīng)呼吸道感染，致死率高。研究發(fā)現(xiàn)其LPS的O抗原與其毒力有關(guān)，Gregory等[23-24]構(gòu)建了LPS多糖偶聯(lián)膠體金疫苗，經(jīng)鼻接種后，比游離LPS能產(chǎn)生更高的抗體滴度，且在小鼠和非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物中均顯示出良好的免疫效果，有效減少了鼻疽假單胞菌的感染率，顯著提高了免疫后動(dòng)物的生存率。

流感病毒所含的2種抗原膜蛋白——血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）的快速突變，可降低甚至消除流感疫苗的有效性。Wang等[25]利用膠體金開發(fā)了一種新的流感疫苗制備方法，以18 nm金納米球作為載體，HA為抗原，聯(lián)合鞭毛蛋白（FliC）免疫佐劑，制備H3N2流感病毒疫苗，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該疫苗能夠產(chǎn)生顯著高于兩者單用，即HA/FliC和GNPs-HA的抗體滴度。

Tao等[26-27]將甲型流感病毒基質(zhì)2蛋白（M2e）高度保守的胞外區(qū)與膠體金結(jié)合（M2e-GNPs），另輔以CpG免疫佐劑，通過鼻內(nèi)接種檢測(cè)納米粒子復(fù)合物誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生的抗體滴度以及對(duì)小鼠流感的免疫保護(hù)作用。結(jié)果表明，無CpG時(shí)，在初免M2e-GNPs的42 d后能產(chǎn)生較強(qiáng)的免疫應(yīng)答反應(yīng)，只在一定程度上減少流感病毒PR8-H1N1感染小鼠后的死亡率，而額外添加CpG佐劑組在初免后21 d即可產(chǎn)生顯著的免疫反應(yīng)，并且在較長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)（8個(gè)月以上）降低流感的發(fā)病率和死亡率。該疫苗不僅對(duì)H1N1產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，同時(shí)還能對(duì)H3N2、H5N1其他病毒亞型產(chǎn)生強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答反應(yīng)，起到良好的交叉免疫保護(hù)效果[28]。

Barhate等[22,29]制備了殼聚糖功能化金納米粒（CsGNPs），用于破傷風(fēng)類毒素（TT）和皂樹（Quillaja saponaria，QS）或總序天冬（Asparagus racemosus，ARE）萃取物的共同載體。小鼠經(jīng)口服接種后，TT-QS-CsGNPs誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答顯著高于單用對(duì)照組（28倍）。TT-ARE-CsGNPs組產(chǎn)生的特異性IgG（34.53倍）和IgA（43.75倍）也得到了顯著增加。與普通TT組相比，基于ARE的疫苗組對(duì)TT的局部免疫應(yīng)答也顯著增加，且該疫苗的體外穩(wěn)定性較好。

以上研究表明，膠體金經(jīng)鼻腔或胃腸道的黏膜免疫，可作為抗原的穩(wěn)定和保護(hù)劑，幫助和促進(jìn)抗原透過黏膜上皮屏障，從而被免疫細(xì)胞捕獲，產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)。

3.2 膠體金在經(jīng)皮免疫中的應(yīng)用

人體皮膚中所含的朗格漢斯細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞是重要的抗原提呈細(xì)胞，具有捕獲外來抗原并在引流淋巴結(jié)中呈遞抗原的重要作用。此外，表皮和真皮中含有豐富的角質(zhì)形成細(xì)胞和其他免疫細(xì)胞（如肥大細(xì)胞）可以分泌細(xì)胞因子和趨化因子，這些細(xì)胞因子和趨化因子可以調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。抗原轉(zhuǎn)運(yùn)實(shí)驗(yàn)證明，通過皮膚接種疫苗比常規(guī)肌肉注射更有效地將抗原轉(zhuǎn)移到淋巴結(jié)[30]，因此經(jīng)皮免疫是非常具有吸引力的免疫接種方式，但由于角質(zhì)層的屏障作用，一直難以實(shí)現(xiàn)。

角質(zhì)層由數(shù)層扁平角質(zhì)細(xì)胞組成，胞內(nèi)是密集的角蛋白，胞間則充滿了角質(zhì)小體釋放的脂類物質(zhì)。正常皮膚一般只允許中度親脂性（脂水分配系數(shù)logP 2～3）和小分子（相對(duì)分子質(zhì)量＜500）透過，水溶性的大分子抗原類物質(zhì)無法直接透過角質(zhì)層。為了實(shí)現(xiàn)經(jīng)皮免疫，有各種手段被用來促進(jìn)抗原透過角質(zhì)層，包括使用促透劑、超聲、激光、電穿孔、微針等方法。其中微針被認(rèn)為是最具前景的一項(xiàng)新型透皮應(yīng)用技術(shù)，并且已有微針類疫苗進(jìn)入臨床試驗(yàn)階段[31]。微針技術(shù)無痛且可自行接種，適合疫苗的需求[32]，但在規(guī)?；圃爝^程中存在生產(chǎn)效率和重現(xiàn)性較低，以及生產(chǎn)成本相對(duì)過高的問題，使得微針類疫苗的市場(chǎng)化推廣存在較大的技術(shù)性障礙。

近年來，隨著納米材料和技術(shù)的不斷發(fā)展，有研究表明納米粒子能夠通過不同機(jī)制透過角質(zhì)層，從而進(jìn)入更深層的皮膚組織。正常的皮膚角質(zhì)層含有直徑小于10 nm的孔隙，納米粒子可與脂質(zhì)相互作用，增加脂質(zhì)流動(dòng)，因此小粒徑的剛性納米粒子有可能穿透角質(zhì)層。一些有機(jī)納米顆粒，聯(lián)合應(yīng)用透皮制劑技術(shù)，如脂質(zhì)體、膠束、納米乳等，可降低皮膚擴(kuò)散的屏障。對(duì)于粒徑較大的納米粒子，有研究認(rèn)為還可依靠毛囊等旁路途徑進(jìn)入皮膚。另外，納米粒子的親疏水性也與其透皮性密切相關(guān)[33]。

目前學(xué)界關(guān)于膠體金的透皮性尚無統(tǒng)一定論。有日本的研究結(jié)果顯示，15 nm的膠體金相對(duì)于102和198 nm的膠體金，在皮膚深層的數(shù)量明顯增加，而198 nm的金納米粒子則主要聚集在表皮區(qū)域[34]。之后Huang等[35]的研究也支持了小粒徑膠體金有助于透皮的觀點(diǎn)。他們發(fā)現(xiàn)5 nm膠體金可廣泛分布在表皮層和真皮層，在毛囊區(qū)域并沒有觀察到膠體金，認(rèn)為5 nm膠體金通過與皮膚脂質(zhì)相互作用，可使角質(zhì)層出現(xiàn)短暫且可逆的開放，允許膠體金及蛋白分子透過。然而有人針對(duì)其操作方法中的“在膠體金處理前先用紗布潤(rùn)濕小鼠皮膚10 min”提出了質(zhì)疑，認(rèn)為該處理可能會(huì)破壞小鼠皮膚的結(jié)構(gòu)，從而增加膠體金的皮膚透過性[36]。

Raju等[37]研究了不同粒徑的膠體金對(duì)大鼠足底的透過性，將大鼠后足暴露于不同粒徑的膠體金3 h，然后取后足皮膚進(jìn)行切片染色觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)粒徑為22、105和186 nm的膠體金在3 h后均能透過角質(zhì)層進(jìn)入表皮深層。

盡管關(guān)于膠體金的透皮依然存在爭(zhēng)議，但最近的一些研究顯示通過對(duì)膠體金進(jìn)行表面修飾或與近紅外聯(lián)用能有效增加膠體金的透皮性。Hsiao等[38]考察了平均粒徑為10 nm的膠體金，以及分別經(jīng)過PEG（GNS-PEG）和PEG油酰胺（GNSPEG-OAm）修飾的膠體金，在與大鼠皮膚作用24 h后的皮膚透過情況，結(jié)果均顯示普通膠體金只在角質(zhì)層聚集，而修飾的膠體金能滲透到深層皮膚組織，尤其GNS-PEG-OAm在大鼠各層皮膚組織均有分布，且還能觀察到在皮下脂肪組織聚集。另外研究還發(fā)現(xiàn)GNS-PEG-OAm在毛囊區(qū)域顯著增多，提示其可能通過毛囊途徑進(jìn)入皮膚。隨后該課題組又繼續(xù)考察了PEG-OAm修飾的不同形狀和粒徑的膠體金的透皮效果，結(jié)果顯示GNP-PEG-OAm的透皮能力還與膠體金的形狀相關(guān)，但與粒徑大小無關(guān)。棒狀的膠體金在表皮的富集量是球狀的1.9倍，而在皮下脂肪組織的富集量是球狀的1.7倍[39]。

作者團(tuán)隊(duì)也曾同樣研究過膠體金作為蛋白類抗原經(jīng)皮遞送載體的可能性，但結(jié)果表明小粒徑GNPs作為蛋白透皮載體的能力非常有限，在不破壞角質(zhì)層的情況下無法實(shí)現(xiàn)透皮免疫[20]。

日本有研究者[40]利用金納米棒的光熱效應(yīng)對(duì)大分子的透皮遞送及其影響進(jìn)行了探討。體外研究發(fā)現(xiàn)，金納米棒在低功率連續(xù)近紅外（能使皮膚升溫）和脈沖近紅外（不改變皮膚溫度）聯(lián)合應(yīng)用下均能促進(jìn)OVA蛋白的透皮遞送。然而體內(nèi)研究卻發(fā)現(xiàn)，采用相同強(qiáng)度的脈沖近紅外照射皮膚，并不能明顯促進(jìn)OVA的透皮效果，而額外借助一些輔助設(shè)備，如圓筒小杯或采用多糖類凝膠，將金納米棒局限在某一區(qū)域內(nèi)，可增強(qiáng)OVA的透皮效果。

由此可見，膠體金在無針免疫的具體應(yīng)用過程中，除了考慮自身的理化性質(zhì)和表面修飾以外，還需要選擇和借助合適的劑型和應(yīng)用手段。

4 膠體金在疫苗應(yīng)用中存在的問題及展望

雖然膠體金或金復(fù)合物已有幾項(xiàng)產(chǎn)品獲批用于臨床治療某些疾病，如Auranofin、Solganal和Myochrysine，但尚未真正實(shí)現(xiàn)在疫苗領(lǐng)域的應(yīng)用，分析原因可能有幾方面。

首先，關(guān)于膠體金的免疫佐劑效應(yīng)缺乏系統(tǒng)深入的研究。雖然有很多針對(duì)膠體金的粒徑、形狀及表面修飾對(duì)免疫應(yīng)答影響的研究，但其潛在機(jī)制尚未得到論證。第二，雖然膠體金合成過程簡(jiǎn)單，但在合成粒徑均一、重現(xiàn)性良好的非聚集態(tài)納米顆粒方面仍存在困難。第三，目前缺乏有效的膠體金定量方法，使得產(chǎn)品質(zhì)量控制存在一定困難。第四，對(duì)膠體金的物理特性如何影響其體內(nèi)分布及代謝的理解還不夠深入和全面，導(dǎo)致對(duì)膠體金的生物安全性還存在某些爭(zhēng)議。因此，結(jié)合現(xiàn)代藥劑技術(shù)，進(jìn)一步優(yōu)化不同粒徑、形狀膠體金的合成工藝，探究膠體金定量方法非常關(guān)鍵。同時(shí)，了解不同膠體金的體內(nèi)動(dòng)力學(xué)過程及其與免疫系統(tǒng)的相互作用，將有助于膠體金的臨床轉(zhuǎn)化。

大量研究已證明膠體金能與機(jī)體免疫細(xì)胞相互作用，促進(jìn)免疫相關(guān)細(xì)胞因子的釋放，具有較好的疫苗遞送能力和免疫佐劑效應(yīng)。雖然關(guān)于膠體金與免疫系統(tǒng)的具體作用機(jī)制尚不明確，膠體金的規(guī)?；a(chǎn)、質(zhì)量檢測(cè)等技術(shù)性問題也尚待解決，但隨著對(duì)膠體金不斷的深入研究，在不久的將來有望能夠真正實(shí)現(xiàn)膠體金作為疫苗的新一代載體和佐劑，以及在疫苗無針化免疫接種中的應(yīng)用。