低聚糖對肉雞免疫功能的影響

劉小彬

山東省濰坊市昌樂縣畜牧業(yè)發(fā)展中心，山東濰坊262400

動物機(jī)體的免疫功能直接影響其健康狀況和生產(chǎn)性能，抗生素的廣泛應(yīng)用一定程度上改善了動物機(jī)體的健康狀況，但也帶來了很多的負(fù)面影響。若能有效提高動物自身的免疫功能，便可以達(dá)到事半功倍的效果?，F(xiàn)階段低聚糖方面的生物研究主要停留在單種低聚糖的不同作用效果，對于不同種類低聚糖之間作用效果的相互比較研究相對較少。本試驗(yàn)通過研究現(xiàn)階段生物試驗(yàn)中低聚糖的適宜添加量，通過在肉雞的飼料中添加3 種不同的低聚糖種類和劑量，比較不同品種低聚糖對于肉雞免疫功能的影響，為低聚糖在家禽養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

試驗(yàn)通過選取體況相近的1日齡黃羽肉雞360只，隨機(jī)分為5 個(gè)試驗(yàn)組，5 個(gè)試驗(yàn)組分別為對照組飼喂基礎(chǔ)日糧、抗生素對照組飼喂基礎(chǔ)日糧+50 mg/kg 金霉素、低聚異麥芽糖試驗(yàn)組飼喂基礎(chǔ)日糧+3 g/kg 低聚異麥芽糖、低聚棉籽糖組飼喂基礎(chǔ)日糧+3 g/kg 低聚棉籽糖和低聚殼聚糖試驗(yàn)組飼喂基礎(chǔ)日糧+30 mg/kg 低聚殼聚糖，每個(gè)試驗(yàn)組設(shè)置6個(gè)重復(fù)，每個(gè)試驗(yàn)組的重復(fù)中養(yǎng)殖12 只雞。整個(gè)試驗(yàn)期設(shè)置為56 d，其中試驗(yàn)前期為1~28日齡，試驗(yàn)后期為29~56日齡。

1）免疫器官指數(shù)測定和血清IgA、IgM 含量測定。在試驗(yàn)雞翅靜脈處采血5 mL 左右，在室溫中傾斜靜置30 min 左右，3 000 r/min 離心10 min，取血清，于-20 ℃保存。按試劑盒說明測定IgA、IgM 含量。第28 天和第56 天禁食12 h 后，每組隨機(jī)取5只雞稱重并屠宰（每個(gè)重復(fù)1 只雞），取胸腺、脾臟和法氏囊，稱重并計(jì)算免疫器官指數(shù)，公式如下。

免疫器官指數(shù)=免疫器官鮮重（mg）/活體體重（g）。

2）回腸黏膜分泌型免疫球蛋白A（secretory IgA，sIgA）含量測定。取回腸前1/2 段5~10 cm，剪開腸段，用生理鹽水沖洗干凈后在冰盒上刮取腸黏膜，將腸道黏膜樣品放入液氮中速凍后轉(zhuǎn)入到-80 ℃冰箱中儲存待用。后續(xù)選取0.1~0.2 g 樣品按照試劑盒說明測定黏膜組織中sIgA 的含量。

2 結(jié)果與分析

各低聚糖對全期（1~56 d）黃羽肉雞的免疫器官指數(shù)無明顯影響。28 d 時(shí)，與對照組和抗生素組相比，低聚殼聚糖組IgM 水平顯著升高，低聚異麥芽糖組和低聚棉籽糖組有升高的趨勢，但差異不顯著。56 d 時(shí)，抗生素組和低聚棉籽糖組中血清IgM的水平顯著高于對照組。

在試驗(yàn)的第28 天時(shí)，相比于試驗(yàn)的空白對照組和抗生素組而言，低聚異麥芽糖組和低聚殼聚糖組中腸道黏膜組織的sIgA 水平顯著提高，低聚棉籽糖組腸道黏膜中的sIgA 水平有所上升，但沒有出現(xiàn)顯著差異。56 d 各指標(biāo)差異均不顯著。

3 討 論

胸腺、脾臟和法氏囊是禽類的主要免疫器官，其相對重量可直接反映禽類免疫機(jī)能的狀態(tài)及發(fā)育情況。脾臟內(nèi)含有大量的淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，是體液免疫和細(xì)胞免疫的中心。IgA 是生物體內(nèi)的最主要的免疫蛋白，占血液中免疫球蛋白總量的70%~75%。IgM 有很強(qiáng)的抗原結(jié)合能力，膜表面IgM 是B 細(xì)胞抗原受體的主要成分。楊桂芹等[1]研究結(jié)果表明，低聚異麥芽糖提高了黃羽肉雞免疫器官指數(shù)以及血清總球蛋白含量。低聚殼聚糖對肉雞免疫器官發(fā)育有明顯的促進(jìn)作用。本試驗(yàn)結(jié)果表明，各低聚糖對黃羽肉雞全期免疫器官指數(shù)并沒有影響，與上述結(jié)論不一致，可能是試驗(yàn)環(huán)境不同所致。本試驗(yàn)中黃羽肉雞所受的免疫刺激較少，產(chǎn)生的免疫應(yīng)答較少，因此免疫器官指數(shù)不高。低聚殼聚糖能顯著提高黃羽肉雞IgM 水平，低聚棉籽糖和低聚異麥芽糖也有提高趨勢，說明日糧中添加低聚糖有一定改善機(jī)體免疫功能的作用。然而功能性低聚糖對機(jī)體免疫能力的調(diào)節(jié)作用機(jī)理十分復(fù)雜，尚未研究透徹。有研究認(rèn)為，低聚糖能與病毒、毒素、真菌的表面結(jié)合，從而成為外源性抗原佐劑，提高B細(xì)胞和T 細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫功能和細(xì)胞免疫功能。

腸相關(guān)淋巴組織是肉雞腸黏膜免疫系統(tǒng)的核心組織。當(dāng)腸黏膜受到細(xì)菌、病毒和其他有害物質(zhì)的刺激之后，腸黏膜的GALT 會立即產(chǎn)生免疫應(yīng)答反應(yīng)，向腸腔內(nèi)分泌免疫球蛋白sIgA 來抵御有害物質(zhì)的入侵。因此，sIgA 是反映腸道免疫功能的重要指標(biāo)。王春敏等[2]發(fā)現(xiàn)，低聚異麥芽糖能提高衰老大鼠模型的腸黏膜sIgA 含量，并認(rèn)為其主要是通過提高腸道菌群豐富度來實(shí)現(xiàn)。本試驗(yàn)中，前期低聚異麥芽糖組和低聚殼聚糖組的sIgA 含量顯著提高，同時(shí)回腸前期低聚異麥芽糖組的alpha 多樣性分析指數(shù)也高于其余各組，說明低聚異麥芽糖可能是通過提高腸道菌群豐富度來實(shí)現(xiàn)回腸sIgA 含量的提高，與上述研究結(jié)論一致。低聚異麥芽糖對sIgA 的作用機(jī)理可能是低聚異麥芽糖通過選擇性營養(yǎng)作用提高了腸道菌群豐富度，GALT 中的樹突狀細(xì)胞（dendritic cells，DC）表面的Toll 樣受體可以識別腸道微生物及其代謝產(chǎn)物，誘導(dǎo)DC 活化，活化之后的DC可以使GATL 中的集合淋巴小結(jié)生發(fā)中心的T 細(xì)胞增殖，從而促使B 細(xì)胞分泌sIgA，同時(shí)刺激GALT的發(fā)育。目前，尚未有關(guān)于低聚殼聚糖對sIgA 影響的研究，但是本文中回腸前期的alpha 多樣性分析指數(shù)低于空白組，說明低聚殼聚糖組的微生物豐富度并未提高，因此，低聚殼聚糖提高腸黏膜sIgA 含量的影響機(jī)理還需要進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

低聚殼聚糖和低聚棉籽糖可以分別提高黃羽肉雞前期和后期的IgM 水平，低聚異麥芽糖和低聚殼聚糖可以提高回腸前期的sIgA 水平。