茶氨酸聯(lián)合γ-氨基丁酸改善CUMS大鼠抑郁癥狀的研究

周 月,付 敏,劉 歡

(天津醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院,天津 300070)

抑郁癥是一種廣泛存在的慢性疾病,可影響思想、情緒和身體健康。它的特點(diǎn)是情緒低落、缺乏活力、悲傷、失眠、無法享受生活[1]。據(jù)估計(jì),在全球范圍內(nèi),有將近3.5億人患有抑郁癥[2],其中許多人在接受了推薦的抗抑郁藥物和心理治療后仍未得到緩解[3]。如今,市場上的抗抑郁藥存在著不良反應(yīng)大、起效緩慢、療效不盡人意等缺點(diǎn)[4]。所以除了傳統(tǒng)抗抑郁藥物的使用,從植物中尋找安全、高效的天然產(chǎn)物來改善和防治抑郁癥已成為社會(huì)需求和研究熱點(diǎn)。

近年來,天然產(chǎn)物在抗抑郁方面的應(yīng)用研究成為熱門課題,涉及的天然產(chǎn)物有大葉蒟、百合、花椒、酸棗仁和羅布麻等40多種,其有效成分主要為黃酮類、生物堿、多酚類化合物等。有研究發(fā)現(xiàn)柴胡中的主要成分柴胡皂苷可降低海馬中JNK、Bad蛋白表達(dá)控制慢性不可預(yù)知溫和刺激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)大鼠的抑郁癥狀[5]。酸棗仁中的有效成分酸棗仁總生物堿、酸棗仁皂苷以及酸棗仁總黃酮也有一定的抗抑郁作用,如酸棗仁總生物堿可縮短小鼠懸尾的不動(dòng)時(shí)間[6]。羅布麻葉總黃酮提取物可提高CUMS大鼠曠場運(yùn)動(dòng)水平[7]。植物中的天然產(chǎn)物以其無毒安全、抗抑郁療效顯著等優(yōu)勢,也是篩選抗抑郁新藥的重要資源。

我國茶葉資源豐富,茶葉中主要活性成分如茶多酚、茶色素、茶多糖等,已被證實(shí)具有抗腫瘤、抗氧化、改善心血管疾病等一系列特殊保健功能[8],動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)普洱茶茶色素的主要成分——茶褐素能夠抑制高糖飲食大鼠血糖升高及體重增加[9]。茶葉中含有的L-茶氨酸(L-Theanine)和γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)也有很好的醫(yī)用保健價(jià)值。L-茶氨酸是茶葉中含有的一種特殊的非蛋白質(zhì)氨基酸[10],對(duì)大鼠具有顯著的抗焦慮作用[11],可顯著降低小鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)和懸尾試驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間[12],提高CUMS大鼠腦組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的濃度改善抑郁癥狀[13-14]。

GABA是一個(gè)四碳非蛋白質(zhì)氨基酸,廣泛存在于動(dòng)物、植物和微生物中[15],是一種介導(dǎo)抗癲癇藥物、抗焦慮藥物、鎮(zhèn)靜藥物、抗驚厥藥物、肌肉遲緩藥物的多功能藥物作用的重要靶標(biāo)[16]。近年來的研究發(fā)現(xiàn)GABA的組織濃度與老年認(rèn)知有關(guān)[17],在組織中合成,攝取和釋放受損與慢性應(yīng)激引起的抑郁樣行為有關(guān)[18],具有高水平GABA的新型茶可降低小鼠強(qiáng)迫游泳試驗(yàn)和懸尾試驗(yàn)中的不動(dòng)時(shí)間[19-20]。

目前尚無關(guān)于L-茶氨酸和GABA兩者聯(lián)合干預(yù)防治抑郁癥的研究,因此本研究建立CUMS抑郁大鼠模型進(jìn)行聯(lián)合干預(yù),分析其行為學(xué)變化及血清和腦組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)等指標(biāo)。評(píng)價(jià)L-茶氨酸和GABA的聯(lián)合抗抑郁作用,為天然產(chǎn)物抗抑郁提供新的思路。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

SPF級(jí)SD大鼠 50只,雄性,體重220～240 g,8周齡,由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK(京)2016-0006號(hào),實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)于中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心,溫度長期控制在20～25 ℃,相對(duì)濕度維持在55%～65%。所有實(shí)驗(yàn)大鼠在實(shí)驗(yàn)開始前于動(dòng)物房中適應(yīng)性喂養(yǎng)1周,不限制飼料和水的攝入;基礎(chǔ)飼料(純化飼料) 由南通特洛菲飼料科技有限公司提供;茶氨酸、GABA混合物 由湯臣倍健股份有限公司提供;混合物包括(實(shí)驗(yàn)方法分組劑量中標(biāo)注的GABA和茶氨酸的劑量為有效成分的實(shí)際含量):GABA單品(純度95%)、茶氨酸單品(純度20%)、輔料(微晶纖維素、無水乳糖、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)作為無任何抗抑郁作用的填充劑、崩解劑、助流劑、西酞普蘭 美國Sigma公司;BCA法蛋白質(zhì)檢測試劑盒 南京建成科技有限公司;BDNF Elisa試劑盒、IL-6 Elisa試劑盒、β-內(nèi)啡肽Elisa試劑盒 武漢華美生物科技有限公司;多巴胺標(biāo)準(zhǔn)品、五羥色胺標(biāo)準(zhǔn)品、去甲腎上腺素標(biāo)準(zhǔn)品 上海源葉生物科技有限公司。

OFT-100大小鼠開場活動(dòng)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng) 成都泰盟軟件有限公司;TM-Vision行為學(xué)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng) 成都泰盟軟件有限公司;Bio-Tek SynergyMx多功能酶標(biāo)儀 美國Bio-Tek寶特;3-18 k離心機(jī) 美國Sigma公司;-80 ℃低溫冰箱 海爾集團(tuán);UltiMate 3000高效液相色譜儀 美國Thermo Fisher公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 動(dòng)物分組及干預(yù)方法 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)結(jié)束后根據(jù)體重分層隨機(jī)分為正常對(duì)照組(對(duì)照組)、CUMS模型組(模型組)、CUMS+低劑量組(低劑量組)、CUMS+高劑量組(高劑量組)和CUMS+西酞普蘭組(西酞普蘭組),每組10只。

對(duì)照組和模型組灌胃生理鹽水;低劑量組灌胃劑量(茶氨酸15 mg/kg/d+GABA 20 mg/kg/d);高劑量組灌胃劑量(茶氨酸45 mg/kg/d+GABA 60 mg/kg/d);西酞普蘭組灌胃劑量10 mg/kg/d。灌胃體積均為10 mL/kg/d。

1.2.2 模型建立 本實(shí)驗(yàn)以CUMS進(jìn)行抑郁模型的建立,采用的刺激包括:禁食或禁水24 h/次,4 ℃冰水游泳5 min/次,墊料潮濕8 h/次,束縛籠束縛2 h/次,止血鉗夾尾1 min/次,噪聲刺激2 h/次,晝夜顛倒24 h/次。除對(duì)照組大鼠以外其余四組均每日隨機(jī)給予2種刺激。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)時(shí)間 大鼠給予CUMS刺激第1 d記為實(shí)驗(yàn)的第1 d,第1 d慢性刺激前大鼠內(nèi)眥取血。模型建立第45 d取血并進(jìn)行糖水偏好實(shí)驗(yàn)和曠場實(shí)驗(yàn),記為實(shí)驗(yàn)第45 d。第46 d開始進(jìn)行灌胃藥物干預(yù),45 d后進(jìn)行糖水偏好實(shí)驗(yàn)和曠場實(shí)驗(yàn),最后取血和腦組織,記為實(shí)驗(yàn)第90 d。

圖1 實(shí)驗(yàn)方法及過程時(shí)間流程圖Fig.1 Flow chart of experimental method and process time

1.2.4 體重記錄 實(shí)驗(yàn)的第1、45、90 d,對(duì)所有組別大鼠禁食12 h,禁食完后稱量體重并記錄。最后分別計(jì)算出第1～45 d、45～90 d各組體重增量。

1.2.5 糖水偏好實(shí)驗(yàn) 每次糖水偏好實(shí)驗(yàn)需要4 d,首先將大鼠置于隔噪音、安靜的房間內(nèi)訓(xùn)練適應(yīng)含糖飲水1 d,每籠每只大鼠同時(shí)放置兩個(gè)裝有2%蔗糖水的500 mL水瓶。第2 d給予每只大鼠500 mL/瓶的2%蔗糖水和500 mL/瓶的純凈水。后1 d禁食禁水。最后1 d,進(jìn)行動(dòng)物的糖水消耗實(shí)驗(yàn),同時(shí)給予每只大鼠預(yù)先定量好的100 mL/瓶的2%蔗糖水和100 mL/瓶的純凈水,2 h后測量糖水消耗量及其純凈水消耗量,并計(jì)算動(dòng)物的糖水偏好[糖水偏好率(%)=糖水消耗/總液體消耗]。

1.2.6 曠場實(shí)驗(yàn) 在實(shí)驗(yàn)的第45、90 d各進(jìn)行一次曠場實(shí)驗(yàn)。每次實(shí)驗(yàn)前讓大鼠在安靜環(huán)境中適應(yīng)2 h,實(shí)驗(yàn)裝置為625 mm(L)×740 mm(W)×510 mm(H)四周底面全部涂黑的箱子,實(shí)驗(yàn)在安靜環(huán)境下進(jìn)行,將一只大鼠小心置于箱底中心,記錄組別,用攝像系統(tǒng)觀察并記錄5 min內(nèi)大鼠的活動(dòng)情況。觀察指標(biāo)包括水平運(yùn)動(dòng)-運(yùn)動(dòng)距離;垂直運(yùn)動(dòng)-站立次數(shù):前肢離開水平地面高度1 cm以上的次數(shù)。每次做完后用90%的乙醇溶液清理實(shí)驗(yàn)箱,清除上一只大鼠的氣味,尿液及其糞便。

1.2.7 血清和腦組織中五羥色胺和多巴胺含量的檢測 采用高效液相色譜-熒光法(HPLC-FD):將血液于室溫條件下放置2 h,12000×g離心l0 min,取上清液進(jìn)行100 μL加入等體積的5%(v/v)高氯酸溶液,4 ℃ 12000×g離心10 min,將上清液取出在相同條件下再離心10 min取上清液過0.22 μm濾膜上樣分析。每mg腦組織加入20 μL的0.1 mol/L的HClO4,用細(xì)胞破碎儀混勻,4 ℃ 20000×g離心20 min,取500 μL上清液,加125 μL的0.5 mol/L的Na2CO3,4 ℃ 20000×g離心10 min,過0.22 μm濾膜上樣分析。

色譜條件:色譜柱選用反相色譜YMC-pack-ODS-a(100 mm×4.0 mm,3 μm);流動(dòng)相:0.l mol/L磷酸二氫鉀/甲醇(85∶15,V/V)溶液;流速:0.75 mL/min;熒光檢測激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為278、338 nm;進(jìn)樣量:20 μL;室溫下測定。

1.2.8 血清和腦組織中白介素-6、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)和β-內(nèi)啡肽含量的檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附法(Elisa):腦組織用PBS洗去血污剪成小塊,每100 mg腦組織加入1 mL PBS制成勻漿,然后4 ℃ 5000×g離心10 min取上清進(jìn)行測定。按照Elisa試劑盒說明書要求檢測腦組織和血清中IL-6、BDNF、β-內(nèi)啡肽的含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 體重變化

體重變化可以反映大鼠食欲情況,抑郁可引起大鼠厭食,進(jìn)而導(dǎo)致體重下降。如表1所示,1～45 d CUMS刺激組大鼠體重增量顯著低于對(duì)照組(P<0.05),說明大鼠進(jìn)食減少,出現(xiàn)厭食、消瘦的抑郁癥狀，造模成功。45～90 d高、低劑量干預(yù)組和西酞普蘭組大鼠體重增量顯著高于模型組(P<0.05),高劑量組體重增量大于低劑量組(P<0.05),與西酞普蘭組無明顯差異(P>0.05)。說明L-茶氨酸和GABA聯(lián)合干預(yù)可提高大鼠食欲,增加體重增長速度。

表1 各組大鼠體重增量比較(n=10)Table 1 Weight increment of rats in each group(n=10)

注:*:與對(duì)照組相比,P<0.05;#:與模型組相比,P<0.05;&:與低劑量組相比,P<0.05;Δ:與西酞普蘭組相比,P<0.05；表2～表8同。

2.2 糖水偏好實(shí)驗(yàn)

糖水偏好實(shí)驗(yàn)?zāi)M人類幸福感快感,是反映大鼠快感的有效指標(biāo),是檢驗(yàn)大鼠抑郁模型是否造模成功的專業(yè)指標(biāo)。由表2可知,第45 d時(shí),與對(duì)照組相比,CUMS處理組大鼠糖水偏好程度顯著降低(P<0.05),說明CUMS刺激顯著降低大鼠糖水偏好程度,大鼠造模成功。第90 d高、低劑量組、西酞普蘭組糖水偏好程度顯著高于模型組(P<0.05),說明L-茶氨酸和GABA聯(lián)合干預(yù)可提高大鼠的糖水偏好程度,改善抑郁癥狀;且高劑量組糖水偏好程度顯著高于低劑量組(P<0.05),與西酞普蘭組之間沒有顯著差異(P>0.05),說明L-茶氨酸和GABA高劑量抗抑郁作用更為顯著,與抗抑郁藥物西酞普蘭療效無差異。

表2 各組大鼠糖水偏好程度比較(n=10)Table 2 Comparison of sugar and water preference of rats(n=10)

2.3 曠場實(shí)驗(yàn)

曠場實(shí)驗(yàn)可以反映大鼠活動(dòng)及對(duì)新鮮環(huán)境的好奇度,其中水平運(yùn)動(dòng)反映大鼠運(yùn)動(dòng)活動(dòng)度水平,垂直運(yùn)動(dòng)反映其對(duì)外界新鮮環(huán)境的好奇探測程度和欲望程度。由表3可知CUMS刺激后第45 d,各組水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)水平均低于對(duì)照組(P<0.05),說明慢性刺激后大鼠曠場試驗(yàn)的水平運(yùn)動(dòng)和垂直運(yùn)動(dòng)均明顯降低。

表3 各組大鼠曠場實(shí)驗(yàn)運(yùn)動(dòng)距離和站立次數(shù)比較(n=10)Table 3 Comparison of the distance of exercise and the number of standing times in the open field test of rats(n=10)

表4 各組大鼠血清、腦組織5-HT含量比較(n=10)Table 4 Comparison of 5-HT contents in serum or brain tissue of rats(n=10)

第90 d,與模型組比較,高、低劑量組、西酞普蘭組大鼠水平運(yùn)動(dòng)距離和垂直運(yùn)動(dòng)的站立次數(shù)均顯著增長(P<0.05),且高劑量組站立次數(shù)高于低劑量組(P<0.05)，與西酞普蘭組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),說明L-茶氨酸和GABA聯(lián)合干預(yù)可增加CUMS抑郁大鼠曠場實(shí)驗(yàn)的運(yùn)動(dòng)距離和站立次數(shù),提升對(duì)外界環(huán)境的好奇程度,改善抑郁行為。

2.4 腦組織和血清中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)的含量

如表4、表5所示，第45 d,各組與對(duì)照組相比血清中5-HT、DA水平均明顯降低(P<0.05)。說明抑郁模型建立后大鼠體內(nèi)5-HT、DA水平降低。

表4中第90 d,與模型組相比,高、低劑量組和西酞普蘭組血清5-HT水平顯著升高(P<0.05),高劑量組與西酞普蘭組血清5-HT水平相比無明顯差異(P>0.05);高劑量組和西酞普蘭組腦組織中的5-HT水平顯著高于模型組(P<0.05),且高劑量組的5-HT水平顯著高于低劑量組(P<0.05),高劑量組與西酞普蘭組腦組織的5-HT水平相比也無明顯差異(P>0.05)。

第90 d(表5),與模型組相比，高、低劑量組和西酞普蘭組血清DA水平顯著升高(P<0.05),腦組織中的DA水平有顯著升高(P<0.05);高劑量組與西酞普蘭組血清和腦組織中的5-HT、DA水平相比均無明顯差異(P>0.05)。說明L-茶氨酸和GABA聯(lián)合作用可升高抑郁大鼠體內(nèi)5-HT、DA的水平。

表5 各組大鼠血清、腦組織DA含量比較(n=10)Table 5 Comparison of DA contents in serum or brain tissue of rats(n=10)

2.5 腦組織和血清中IL-6、BDNF、β-內(nèi)啡肽的含量

第45 d,與對(duì)照組比較,接受CUMS刺激各組血清IL-6水平顯著升高,BDNF和β-內(nèi)啡肽水平明顯降低,差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說明CUMS刺激造成的抑郁癥狀,可升高大鼠體內(nèi)炎癥因子水平,降低BDNF和β-內(nèi)啡肽水平，見表6～表8。

第90 d,高、低劑量組和西酞普蘭組血清中的IL-6含量低于模型組(P<0.05),BDNF和β-內(nèi)啡肽含量高于模型組(P<0.05);且高劑量組血清中的IL-6含量低于低劑量組(P<0.05),BDNF和β-內(nèi)啡肽含量高于低劑量組(P<0.05),而高劑量組與西酞普蘭組的IL-6、BDNF、β-內(nèi)啡肽含量相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。腦組織中的結(jié)果與血清中的一致。說明L-茶氨酸和GABA聯(lián)合作用可降低抑郁大鼠體內(nèi)的IL-6水平,升高BDNF和β-內(nèi)啡肽水平。

表6 各組大鼠血清、腦組織IL-6含量比較Table 6 Comparison of serum or brain tissue IL-6 contents of

表7 各組大鼠血清、腦組織BDNF含量比較Table 7 Comparison of serum or brain tissue BDNF contents of

表8 各組大鼠血清和腦組織β-EP含量比較Table 8 Comparison of serum or brain tissue β-EP contents in of

3 討論與結(jié)論

本研究發(fā)現(xiàn)CUMS抑郁大鼠在L-茶氨酸和GABA聯(lián)合干預(yù)后,高低劑量組大鼠的抑郁行為均有所改善,與模型組相比體重增長、糖水偏好程度升高、曠場實(shí)驗(yàn)的運(yùn)動(dòng)距離和站立次數(shù)均增加,表明大鼠食欲有所恢復(fù)、幸福感和快感回升、對(duì)新鮮環(huán)境的好奇程度提高,說明L-茶氨酸和GABA聯(lián)合干預(yù)有改善抑郁的作用。

目前研究表明L-茶氨酸改善CUMS大鼠抑郁癥狀的最低灌胃劑量20 mg/kg/d[13-14]。有GABA對(duì)慢性應(yīng)激大鼠認(rèn)知功能的研究中使用的劑量為500 mg/kg/d,大鼠在電迷宮實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)為潛伏期時(shí)間明顯低于模型組[21]。本研究中低劑量組為(L-茶氨酸15 mg/kg/d+GABA 20 mg/kg/d),其中L-茶氨酸低于其他文獻(xiàn)中最低作用劑量20 mg/kg/d,但仍表現(xiàn)出了緩解抑郁的作用,說明GABA協(xié)同L-茶氨酸改善了CUMS大鼠的抑郁癥狀。高劑量組為(L-茶氨酸45 mg/kg/d+GABA 60 mg/kg/d),GABA的干預(yù)劑量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于其他研究中的500 mg/kg/d,同樣說明L-茶氨酸和GABA對(duì)改善大鼠抑郁行為具有協(xié)同增效作用。西酞普蘭是一種高選擇性的5-羥色胺再攝取抑制劑,是臨床治療抑郁癥的常規(guī)藥物[22],常做為抗抑郁研究的陽性對(duì)照[23-25]。L-茶氨酸+GABA高劑量組與西酞普蘭組大鼠的糖水偏好程度、體重增量、曠場實(shí)驗(yàn)的運(yùn)動(dòng)距離和站立次數(shù)均無明顯差異,說明高劑量的L-茶氨酸聯(lián)合GABA抗抑郁作用顯著。

單胺類神經(jīng)遞質(zhì)5-HT、DA在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中起著非常重要的作用,單胺假說的主要內(nèi)容是腦內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)缺乏與抑郁癥的發(fā)病密切相關(guān)[26]。本研究發(fā)現(xiàn)CUMS大鼠血清及腦組織5-HT、DA水平降低,L-茶氨酸和GABA聯(lián)合干預(yù)后水平上升且高低劑量組差異顯著,說明L-茶氨酸和GABA聯(lián)合干預(yù)改善抑郁癥狀與提高體內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平有關(guān)。

神經(jīng)遞質(zhì)水平的改變可能為L-茶氨酸和GABA直接或間接影響造成。有研究發(fā)現(xiàn)L-茶氨酸通過血腦屏障進(jìn)入腦組織后,紋狀體、下丘腦和海馬中的5-HT和DA濃度顯著增加[27],腦缺血再灌注損傷模型大鼠在茶氨酸干預(yù)后,皮質(zhì)GABA含量顯著升高[28],L-茶氨酸預(yù)防喹啉酸誘導(dǎo)的運(yùn)動(dòng)功能障礙和紋狀體神經(jīng)毒性的實(shí)驗(yàn)中L-茶氨酸干預(yù)大鼠紋狀體5-HT、DA和GABA濃度均顯著升高[29],而GABA與5-HT、DA之間均具有相互正向調(diào)節(jié)作用[30]。

白介素-6(interleukin-6,IL-6)、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)和β-內(nèi)啡肽(β-endorphin,β-EP)也是評(píng)價(jià)抑郁癥的重要指標(biāo)。抑郁癥患者IL-6濃度顯著高于正常健康人[31]。藥物治療使脾臟IL-6生成減少[32]。BDNF是保護(hù)性免疫因子,重度抑郁癥患者血清BDNF水平較低[33],而通過抗抑郁藥治療,可提高BDNF水平[34]。β-EP作為主要的內(nèi)阿片樣物質(zhì),參與欣快、報(bào)酬行為等情緒調(diào)節(jié)活動(dòng)。電針抗抑郁研究中,CUMS大鼠血清β-EP水平降低,電針治療后含量升高,抑郁行為改善[35]。IL-6、BDNF、β-EP之間存在一定調(diào)節(jié)關(guān)系。有研究證明了BDNF對(duì)IL-6的負(fù)向調(diào)節(jié)作用[36],β-EP可介導(dǎo)對(duì)免疫功能的負(fù)向調(diào)節(jié),下調(diào)分泌增多的促炎性細(xì)胞因子及免疫介質(zhì)[37]。IL-6、BDNF、β-EP對(duì)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)水平也有一定的影響。腦室內(nèi)注射細(xì)胞因子可降低大鼠額葉皮質(zhì)5-HT含量,中腦和紋狀體內(nèi)5-HT及其代謝產(chǎn)物5-羥吲哚乙酸(5-HIAA)都減少[38]。BDNF的下調(diào)可增加海馬神經(jīng)元對(duì)傷害性應(yīng)激的敏感性,引起神經(jīng)毒性從而導(dǎo)致海馬神經(jīng)元的萎縮甚至死亡[39],間接對(duì)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)產(chǎn)生影響;向小鼠腦室注入β-EP能增加體內(nèi)5-HT的含量[40]。本研究發(fā)現(xiàn)L-茶氨酸和GABA聯(lián)合干預(yù)后,大鼠血清、腦組織中IL-6水平降低,BDNF、β-EP升高。IL-6炎癥反應(yīng)降低可能影響5-HT系統(tǒng)受損修復(fù)。神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞分泌BDNF增加降低神經(jīng)毒性可能對(duì)5-HT、DA的合成產(chǎn)生影響,其免疫保護(hù)作用也影響了細(xì)胞因子IL-6的水平。β-EP含量升高可能影響5-HT的含量,降低促炎癥性細(xì)胞因子IL-6的水平。L-茶氨酸和GABA可通過影響IL-6、BDNF、β-EP水平,增加大鼠體內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)濃度。

前人研究中L-茶氨酸、GABA對(duì)慢性應(yīng)激大鼠抗抑郁的相關(guān)實(shí)驗(yàn)應(yīng)用的劑量遠(yuǎn)高于本研究,且為單一成分[13,21]。檢驗(yàn)指標(biāo)只限于腦組織中單胺神經(jīng)遞質(zhì)水平[13],或GABA受體和免疫陽性細(xì)胞數(shù)量[21]。本研究從大鼠體重增量、糖水偏好程度、曠場實(shí)驗(yàn)行為學(xué)方面和大鼠血清、腦組織中神經(jīng)遞質(zhì)含量,體內(nèi)神經(jīng)營養(yǎng)因子及炎癥水平多個(gè)角度探索L-茶氨酸和GABA聯(lián)合作用機(jī)制驗(yàn)證其對(duì)抑郁癥狀的有效緩解作用,發(fā)現(xiàn)L-茶氨酸和GABA聯(lián)合干預(yù)對(duì)CUMS誘發(fā)的抑郁癥有一定改善作用,且高劑量的作用更為顯著,作用機(jī)制可能為兩者聯(lián)合增加大鼠體內(nèi)單胺類神經(jīng)遞質(zhì)濃度,升高BDNF、β-內(nèi)啡肽含量,降低炎癥水平來發(fā)揮抗抑郁作用。