宮頸小細(xì)胞癌中PGP 9.5的表達(dá)及其臨床意義＊

鄧穎輝，屈曉輝，劉成偉

（江西省婦幼保健院1.病理科；2.腫瘤科，南昌 330006）

宮頸癌是婦科常見(jiàn)的惡性腫瘤，2018年在全球范圍內(nèi)，宮頸癌的發(fā)病率與死亡率在女性惡性腫瘤中排在第四位，而在發(fā)展中國(guó)家，宮頸癌的發(fā)病率和死亡率均僅次于乳腺癌，居于第二位。宮頸癌常見(jiàn)的病理類型為鱗癌，其次為腺癌及腺鱗癌，再次還有一些十分罕見(jiàn)的病理類型，如子宮頸神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤等。宮頸神經(jīng)內(nèi)分泌癌因電鏡下癌細(xì)胞胞漿內(nèi)可見(jiàn)神經(jīng)內(nèi)分泌顆粒而得名，由于癌細(xì)胞內(nèi)神經(jīng)內(nèi)分泌顆粒的存在，導(dǎo)致其侵襲性極強(qiáng)，早期即可以發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，容易出現(xiàn)肝、腦、肺和骨轉(zhuǎn)移[1];子宮頸小細(xì)胞癌(small cell carcinoma of cervix，SCCC)屬于宮頸神經(jīng)內(nèi)分泌癌，是一種罕見(jiàn)的子宮頸惡性腫瘤，約占宮頸惡性腫瘤的1～3%[2,3]。由于該腫瘤多是彌漫的間質(zhì)浸潤(rùn)，不浸潤(rùn)表皮，宮頸細(xì)胞學(xué)檢查常不能發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)致患者就診時(shí)多已是中、晚期[4]。宮頸小細(xì)胞癌的預(yù)后很差，國(guó)內(nèi)外研究顯示5年生存率為10～40%[5,6]。因此宮頸小細(xì)胞癌的防治值得我們關(guān)注。近些年發(fā)現(xiàn)PGP 9.5（protein gene product,PGP 9.5）在宮頸小細(xì)胞癌組織中的高表達(dá)與疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本次實(shí)驗(yàn)檢測(cè)了PGP 9.5在SCCC中的表達(dá)，分析其表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系，探討PGP 9.5在SCCC中的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 材料 收集江西省婦幼保健院病理科存檔的宮頸組織標(biāo)本102例，其中小細(xì)胞癌38例，鱗癌36例，腺癌18例，正常宮頸組織10例；所有病例均經(jīng)病理診斷證實(shí)。

1.2 主要試劑 兔抗人蛋白基因產(chǎn)物9.5多克隆抗體（Rabbit anti-PGP 9.5 Polyclonal Antibody）購(gòu)自北京中杉公司，稀釋度1:100；SP試劑盒、DAB顯色劑均購(gòu)自福州邁新公司。組織切片經(jīng)脫蠟、水化后，高壓抗原修復(fù)2min，3%H2O2修復(fù)內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，采用免疫組化EnVision法檢測(cè)PGP 9.5的表達(dá)，用PBS代替I抗作陰性對(duì)照，具體的實(shí)驗(yàn)步驟均按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3 結(jié)果判定 PGP 9.5染色的陽(yáng)性信號(hào)為胞質(zhì)和胞漿上出現(xiàn)棕黃色顆粒，綜合染色強(qiáng)度和陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行分級(jí)，取表達(dá)最強(qiáng)的部位，按著色程度分為：基本未著色、染色與背景相似者為0分；著色淺、略高于背景者為1分；中度著色、明顯高于背景者為2分；強(qiáng)染、著色深棕色者為3分。陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜25%為0分；25%-50%為1分；51%-75%為2分；＞75%為3分。2項(xiàng)相加后分4級(jí)：0-1分為 （-），2分為（+），3-4 分為（++），5 分以上為（+++）。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間資料的比較將視情況采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法進(jìn)行，

2 結(jié)果

2.1 不同宮頸組織中PGP 9.5的表達(dá) 免疫組化檢測(cè)顯示PGP 9.5在宮頸小細(xì)胞癌、鱗癌、腺癌與宮頸正常組織中的表達(dá)見(jiàn)圖1,免疫組化染色顯示PG P 9.5在宮頸小細(xì)胞癌、鱗癌、腺癌與宮頸正常組織中均表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)中,呈現(xiàn)棕黃色顆?；驁F(tuán)塊。

圖1 不同宮頸組織中PGP 9.5陽(yáng)性表達(dá)

2.2 不同宮頸組織中PGP 9.5表達(dá)水平比較 PGP 9.5在不同宮頸組織中表達(dá)程度見(jiàn)表1。經(jīng)Fisher確切概率法檢驗(yàn)，PGP 9.5在小細(xì)胞癌中的陽(yáng)性表達(dá)率（73.7%）高于正常組織（10%）、腺癌（33.3%）與鱗癌組織（21.6%），差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。而在腺癌組織與鱗癌組織中，PGP 9.5的表達(dá)水平與正常組織并無(wú)顯著差異（P=0.89）。

表1 PGP 9.5在不同宮頸組織中表達(dá)水平

2.3 PGP 9.5在宮頸小細(xì)胞癌中表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 收集入組宮頸小細(xì)胞癌的臨床病理特征資料見(jiàn)表2。PGP 9.5在宮頸小細(xì)胞癌中的表達(dá)與年齡、FIGO分期、間質(zhì)浸潤(rùn)深度、淋巴血管間隙浸潤(rùn)（Lymph-vascular space invasion，LVSI）的關(guān)系無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），而在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，PGP 9.5的表達(dá)高于淋巴結(jié)陰性的患者 （P=0.049），提示PGP 9.5的表達(dá)可能與小細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。

3 討論

蛋白基因產(chǎn)物9.5最初是從人腦中測(cè)出的一種胞漿蛋白，其分子量在24500Da左右，包含212個(gè)氨基酸的泛素水解酶，其通過(guò)低速軸漿運(yùn)輸在神經(jīng)細(xì)胞軸突中運(yùn)輸，是神經(jīng)元中含量最高的可溶性蛋白[7]。它特異性地存在于神經(jīng)元及散布的神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞中，在腫瘤組織中，PGP 9.5誘導(dǎo)細(xì)胞周期蛋白泛素化的增加，導(dǎo)致未分化體細(xì)胞生長(zhǎng)失控，表明PGP 9.5可能是一個(gè)癌基因[8]。而且通過(guò)基因表達(dá)序列分析法也發(fā)現(xiàn)PGP 9.5在非小細(xì)胞性肺癌高表達(dá)且與肺癌進(jìn)展、惡化密切相關(guān)[9]。還有諸多研究表明在直結(jié)腸癌、食道癌、甲狀腺癌等惡性腫瘤中，PGP 9.5表達(dá)水平與其臨床病理分期密切相關(guān)[10-12]。此外，研究還發(fā)現(xiàn)PGP 9.5的過(guò)度表達(dá)與胰腺癌患者術(shù)后生存率呈負(fù)相關(guān)[13]。

表2 PGP 9.5在宮頸小細(xì)胞癌中表達(dá)與臨床病理特征分析

本次實(shí)驗(yàn)研究了PGP 9．5在宮頸神經(jīng)內(nèi)分泌小細(xì)胞癌組織、腺癌組織、鱗癌組織與正常宮頸組織中的蛋白表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)73.7%的宮頸小細(xì)胞癌組織中表達(dá)PGP 9.5,其陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于宮頸腺癌組織(33.3%)及宮頸鱗癌組織(21.6%)、宮頸正常組織 （10%），4組間PGP 9.5陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．01)。此外，本次研究收集了所有納入研究的宮頸神經(jīng)內(nèi)分泌小細(xì)胞癌的臨床病理資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)PGP 9.5的表達(dá)在與宮頸神經(jīng)內(nèi)分泌小細(xì)胞癌患者的年齡、FIGO分期、深間質(zhì)浸潤(rùn)、間質(zhì)脈管癌栓累及均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是在盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，PGP 9.5的表達(dá)顯著增高，提示PGP 9.5的表達(dá)可能與小細(xì)胞癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)。在2018年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟頒布的宮頸癌新分期系統(tǒng)中，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移被歸類到新的IIIC期[14]，在宮頸癌中，盆腔淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與預(yù)后密切相關(guān)是毋庸置疑的[15]。國(guó)外有學(xué)者對(duì)宮頸神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤62例進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)FIGO分期和年齡是影響預(yù)后的重要因素[16]，因此，PGP 9.5的表達(dá)情況可能可以作為反映宮頸小細(xì)胞癌預(yù)后的預(yù)測(cè)因子。但是由于神經(jīng)內(nèi)分泌小細(xì)胞癌較為罕見(jiàn)，國(guó)內(nèi)外研究均為小樣本的回顧性研究，PGP 9.5的表達(dá)對(duì)于宮頸神經(jīng)內(nèi)分泌腫瘤的預(yù)后的意義仍然需要進(jìn)一步探討。

宮頸神經(jīng)內(nèi)分泌小細(xì)胞癌是一種較為少見(jiàn)的宮頸惡性腫瘤,其早期不易發(fā)現(xiàn)，預(yù)后差，值得我們進(jìn)一步關(guān)注與研究。PGP 9.5在小細(xì)胞癌的發(fā)生、發(fā)展中可能發(fā)揮著一定的作用,可能可以成為在宮頸神經(jīng)內(nèi)分泌小細(xì)胞癌的診斷中的新標(biāo)志物。