山蠟梅葉及其制劑的質(zhì)量控制研究進(jìn)展

溫雯，金賢武，黃道明*

1.江西省藥品認(rèn)證審評中心，南昌 330006；2.上饒市食品藥品檢驗(yàn)檢測中心，江西 上饒 334000

山蠟梅（Chimonanthus nitensOliv.）又稱為亮葉蠟梅、毛山茶，是中國特有的蠟梅科蠟梅屬植物，生長于海拔300 米至2 900 米的山地疏林中及石灰?guī)r石山地，主要分布于江蘇、安徽、浙江、福建、江西、湖南、貴州等地。山蠟梅葉是山蠟梅的干燥葉，因其具有芳香化濕、祛風(fēng)解表之功效，能治療中暑、流感、濕困胸悶、慢性支氣管炎、蚊蟻叮咬等疾病而被《中華本草》收錄［1］。研究表明，臨床上山蠟梅葉及其制劑常用于小兒手足口病、呼吸道感染、小兒外感發(fā)熱等疾病的治療［2,3］。近年來，隨著山蠟梅葉及其制劑的廣泛使用，不少學(xué)者逐漸加大了對山蠟梅葉及其制劑的質(zhì)量控制研究，包括建立了以6,7-二甲氧基香豆素、l-洋蠟梅堿、槲皮素和山奈酚等為指標(biāo)成分的含量測定方法［4］。本文對近年來山蠟梅葉及其制劑的質(zhì)量分析研究進(jìn)行綜述，為山蠟梅葉藥材的資源開發(fā)利用、為山蠟梅葉及其制劑質(zhì)量控制研究提供依據(jù)。

1 山蠟梅葉質(zhì)量控制方法

1.1 性狀鑒別

劉婧等［5］從植物形態(tài)、性狀特征、顯微特征及一般理化等方面對江西德興產(chǎn)山蠟梅葉進(jìn)行了系統(tǒng)的生藥學(xué)研究。結(jié)果顯示，山蠟梅葉呈紙質(zhì)或近革質(zhì)，上表面呈黃綠色，下表面呈淺黃綠色，葉面略粗糙，有光澤，基部有不明顯的腺毛，葉背無毛，或有時(shí)在葉緣、葉脈和葉柄上被短柔毛；葉脈在葉面扁平，在葉背凸起，網(wǎng)脈不明顯。氣微，味微苦。

1.2 理化鑒別

劉婧等［5］通過鹽酸-鎂粉顯色反應(yīng)、碘化汞鉀試劑反應(yīng)和碘-碘化鉀試劑反應(yīng)對德興山蠟梅葉進(jìn)行了理化鑒別，結(jié)果顯示，山蠟梅葉以上3 個(gè)反應(yīng)均呈陽性，說明山蠟梅葉中含有黃酮和生物堿類化合物。

1.3 薄層鑒別

薄層色譜法（TLC）是對藥材定性鑒別的常用方法之一。周斌等［6］以芳樟醇、桉油精、β-石竹烯、東莨菪內(nèi)酯和濱蒿內(nèi)酯對照品為對照，通過二次展開的方法，分別以氯仿-甲醇（9∶1）和石油醚-乙酸乙酯（10∶1）為展開劑，以1% 香草醛硫酸溶液為顯色劑，建立了5 種標(biāo)準(zhǔn)品的TLC 鑒定方法。結(jié)果供試品色譜中在與對照品相應(yīng)的位置顯相同顏色的斑點(diǎn)。李詒光等［7］以蘆丁和蠟梅堿對照品為對照，以醋酸乙酯-甲酸-水（8∶1∶1）的上層溶液和氯仿-甲醇（9.2∶0.8）為展開劑，以1%三氯化鋁乙醇溶液和改良碘化鉍鉀試液為顯色劑，建立了山蠟梅葉中蘆丁和蠟梅堿的TCL 鑒定方法。結(jié)果在紫外光燈（365 nm）下，供試品色譜中在與對照品色譜的相應(yīng)位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。此外，鐘宇婷等［8］以山臘梅葉對照藥材為對照，以石油醚-乙酸乙酯-甲酸（55∶35∶1）為展開劑，噴以三氯化鋁試液，在紫外光燈（365 nm）下檢視，進(jìn)行黃酮類成分鑒定，結(jié)果山蠟梅黃酮類成分提取液供試品中，在與山蠟梅黃酮類成分提取液對照品色譜相對應(yīng)的位置上，顯示出有相同顏色的紫色熒光圓形至橢圓形亮點(diǎn)；以苯-乙酸乙酯-甲醇（4∶3∶1）為展開劑，噴上稀碘化鉍鉀專屬顯色試液，進(jìn)行生物類成分鑒定。結(jié)果，山蠟梅生物堿類成分提取液供試品中，在與山蠟梅生物堿類成分提取液對照品色譜相對應(yīng)的位置上，顯示出有相同顏色的圓形至橢圓形斑點(diǎn)。

1.4 光譜法

光譜法已成為一種快速鑒別中藥材的有效途徑。童偉等［9］采用傅里葉變換紅外光譜法（FTIR），以400～4 000 cm-1范圍內(nèi)的共有吸收峰的相對吸收度為指標(biāo)，對26 個(gè)批次的山蠟梅、柳葉蠟梅、浙江蠟梅的蠟梅葉及其炒制品采用主成分分析、聚類分析與判別分析方法進(jìn)行分析，結(jié)果26 個(gè)樣品被歸為四類，判別準(zhǔn)確率為96%，為山蠟梅葉藥材的質(zhì)量控制提供了一種可靠、便捷、準(zhǔn)確與環(huán)保的方法，同時(shí)對其他藥材的產(chǎn)地鑒別也提供了有益的參考。李少華等［10］以蘆丁為對照品，采用VIS 法，建立了在500 nm 測定了山蠟梅沖劑中的總黃酮含量方法，結(jié)果顯示，穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、加樣回收率較好，可作為各種山蠟梅葉制劑的含量測定和質(zhì)量控制依據(jù)。

1.5 色譜法

色譜法主要有HPLC、GC、LC-MS、MIPs-HPLC 等，是目前中藥質(zhì)量控制中最常見方法。

1.5.1 高效液相色譜法（HPLC） 舒任庚等［11］以l-洋蠟梅堿、槲皮素和山奈酚3 種成分為指標(biāo)成分，以甲醇-磷酸鹽水溶液為洗脫劑，以239 nm、365 nm為檢測波長，建立了江西道地藥材山蠟梅葉中3 種成分的HPLC 含量測定方法，并對不同采收時(shí)間的山蠟梅藥材進(jìn)行了生物堿和黃酮成分的定量測定，結(jié)果顯示4～7 月份山蠟梅葉藥材中生物堿含量隨月份推后不斷增加，而黃酮成分在4、5 月份的含量最高。崔小弟等［12］以東莨菪內(nèi)酯、異嗪皮啶、濱蒿內(nèi)酯、蘆丁為指標(biāo)成分，建立了山蠟梅葉中4 種有效成分含量的HPLC 同時(shí)測定方法。白會強(qiáng)等［13］以東莨菪素、槲皮素、夏蠟梅堿3 種成分為指標(biāo)成分，以甲醇-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，分別在348、376、222 nm 三波長下建立了同時(shí)測定山蠟梅中東莨菪素、槲皮素、夏蠟梅堿量的高效液相色譜法，結(jié)果所建立的方法操作簡便，結(jié)果準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于山蠟梅藥材的質(zhì)量控制。聶韡等［14］建立了HPLC 法同時(shí)測定山蠟梅葉蘆丁、槲皮素、山奈酚含量的方法，并分析了不同月份之間采收的山蠟梅葉中蘆丁、槲皮素、山奈酚的含量動(dòng)態(tài)變化，結(jié)果顯示，8 至9 月份采收的山蠟梅葉藥材具有較大生物產(chǎn)量和質(zhì)量。劉洪濤等［15］研究構(gòu)建了蠟梅屬植物葉片化學(xué)成分的 HPLC 指紋圖譜，其中5 個(gè)化學(xué)成分通過對照品得到指認(rèn)，5 種蠟梅屬植物對照指紋圖譜差異明顯，可進(jìn)行種間辨認(rèn)比較，可以作為蠟梅屬植物分類及質(zhì)量評價(jià)的參考依據(jù)。黃文平等［16］建立了山臘梅葉中東莨菪苷、東莨菪內(nèi)酯、異嗪皮啶、山柰酚-3-O-蕓香糖苷、紫云英苷、濱蒿內(nèi)酯、槲皮素、山柰酚8 種成分HPLC 含量測定方法，并通過主成分分析法對不同產(chǎn)地的山臘梅葉的差異性進(jìn)行了比較，為完善山臘梅葉質(zhì)量控制方法提供了依據(jù)。

1.5.2 氣相色譜法（GC） 山蠟梅葉中揮發(fā)油含量較高，且具有較強(qiáng)的藥理活性。聶鵬等［17］采用氣相色譜法，對山蠟梅葉揮發(fā)油包合物中桉葉素的含量測定方法進(jìn)行了研究，建立了簡便快速、準(zhǔn)確可行的山蠟梅葉揮發(fā)油 β-CD 包合物質(zhì)量控制方法。魏惠珍等［18］對山蠟梅葉中所含桉油精和芳樟醇進(jìn)行了定量測定，建立了山蠟梅葉中桉油精和芳樟醇含量的氣相色譜測定法，為更好地控制山蠟梅葉的質(zhì)量提供了依據(jù)。詹忠根等［19］采用GC/MS 聯(lián)用儀對山蠟梅葉揮發(fā)油的化學(xué)成分進(jìn)行了研究分析，共分離出62 個(gè)成分并鑒定出其中41 個(gè)。

2 山蠟梅葉制劑質(zhì)量控制方法

山蠟梅葉制劑主要有山蠟梅葉顆粒、山蠟梅葉片劑、山蠟梅葉復(fù)合茶等，關(guān)于其制劑的質(zhì)量控制研究報(bào)道還不多。周斌等［20］采用 Elite hypersil ODS2 色譜柱，以乙腈-水為流動(dòng)相，以344 nm為檢測波長，建立了山蠟梅顆粒劑中東莨菪內(nèi)酯、異嗪皮啶、濱蒿內(nèi)酯、蘆丁4 種有效成分含量的HPLC 同時(shí)測定方法，所建立的方法重現(xiàn)性好、操作簡單、結(jié)果準(zhǔn)確，可作為控制山蠟梅藥材及其制劑質(zhì)量的方法。歐陽婷等［21］以蘆丁、槲皮素和山奈素為指標(biāo)成分，采用Cosmosil C18 色譜柱建立了山蠟梅顆粒中有效成分和指紋圖譜方法，并對 20批山蠟梅葉顆粒樣品的指紋圖譜進(jìn)行了相似度分析，用均值數(shù)法生成 20 批山蠟梅顆粒的對照指紋圖譜，相似度評價(jià)結(jié)果均大于 95%，表明樣品生產(chǎn)廠家工藝穩(wěn)定，樣品相似程度高。劉耀明等［22］以山蠟梅藥材為對照，以槲皮素及山柰素為指標(biāo)成分，通過薄層色譜法和高效液相色譜法，建立了山蠟梅顆粒定性鑒別和槲皮素、山柰素進(jìn)行含量測定方法。結(jié)果規(guī)定，本品每克含山蠟梅按槲皮素（C15H10O7）計(jì)，不得少于25 μg，按山柰素（C15H10O6）計(jì)，不得少于35 μg。

3 小結(jié)

山蠟梅葉分布廣泛，資源豐富，具有清涼排毒、防治感冒、防暑解暑等作用，在臨床和民間具有非常高的使用率，已被制成多種中成藥。目前，已有眾多學(xué)者研究建立了山蠟梅葉藥材及飲片的高效液相色譜法、紅外光譜法、原子吸收光譜等質(zhì)量控制方法，這些檢測方法將大大提高山蠟梅葉藥材及其飲片質(zhì)量檢測的準(zhǔn)確性和專屬性，但山蠟梅葉制劑的質(zhì)量控制指標(biāo)成分多為黃酮類成分，較為單一，有必要進(jìn)一步建立多類別、多成分的質(zhì)量控制方法，以全面評價(jià)和保障山蠟梅葉制劑的質(zhì)量。