PCR 法在沙門氏菌檢測中的研究進(jìn)展

荊 揚(yáng)，李卉佳，許世萱，馬景華

（西北農(nóng)林科技大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院 712100）

近年來，食源性疾病的爆發(fā)嚴(yán)重威脅著全球范圍內(nèi)的公共衛(wèi)生，造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。 來自世界衛(wèi)生組織的報(bào)道說，每年有近十分之一的人因此患病， 且會喪失3300 萬個(gè)健康生命。分子生物學(xué)PCR 方法檢測沙門氏菌具有快速、簡便、靈敏度高等優(yōu)點(diǎn)。

1 常規(guī)PCR 技術(shù)

PCR 作為一種分子生物學(xué)檢測方法， 其原理是以DNA 分子為模板， 加入設(shè)計(jì)好的特異性引物、dNTP 及DNA 聚合酶，在體外發(fā)生酶促合成反應(yīng)，通過溫度和時(shí)間的控制而實(shí)現(xiàn)DNA 片段的擴(kuò)增。 侯宛宛[1]等人研制出一種沙門氏菌PCR 的檢測試劑盒。其檢測限為37.5 fg/PCR，將試劑盒經(jīng)反復(fù)凍融60 次后，檢測限還可以達(dá)到375 fg/PCR。 通過對食品樣品進(jìn)行檢測， 含4～5 cfu/10g 鼠傷寒沙門氏菌的樣品，在12h 內(nèi)可被檢出。

2 多重PCR 技術(shù)

常規(guī)PCR 技術(shù)用于一對引物去擴(kuò)增出一個(gè)核酸片段，主要適用于單一致病菌的檢測， 而多重PCR 主要用于多種致病菌的檢測或鑒定，與常規(guī)PCR 技術(shù)相比，多重PCR 技術(shù)具有快速、準(zhǔn)確和節(jié)約時(shí)間等優(yōu)點(diǎn)。 Prem Shankar[2]等人開發(fā)了一種用來檢測市政供水中溶血性大腸桿菌、 蘭氏乳桿菌和沙門氏菌污染的PCR 法，其設(shè)計(jì)了針對三種細(xì)菌的特異性引物。 在158 個(gè)水樣本中， 通過mPCR 發(fā)現(xiàn)56.32%呈陽性， 而常規(guī)方法僅檢測到6.96%。

3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

實(shí)時(shí)熒光定量PCR 是在反應(yīng)體系中加入了熒光物質(zhì)，通過測定熒光信號的變化來檢測PCR 擴(kuò)增反應(yīng)中循環(huán)產(chǎn)物量的變化， 并通過Ct 值和標(biāo)準(zhǔn)曲線的分析對起始模板進(jìn)行定量分析。其相比于常規(guī)PCR 方法， 其有特異性更強(qiáng)、 自動化程度高等優(yōu)點(diǎn)。 Elisa Carloni[3]等人將多重磁捕獲雜交和實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)相結(jié)合， 可用于確定食物中三種重要的食源性致病物種的存在，其中包括沙門氏菌。 擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)表明，對沙門菌的敏感性相當(dāng)于10 GU/PCR。

4 復(fù)合PCR 結(jié)合變性高效液相色譜分析技術(shù)

Yuejiao Liu[4]等人開發(fā)了一種三基因多重高分辨率熔體曲線實(shí)時(shí)PCR 檢測技術(shù)，設(shè)計(jì)了invA、stn 和fimA 三個(gè)特異性基因的引物，在81 株沙門菌上驗(yàn)證其效果。 該方法有效地減少因具有三個(gè)靶基因之一而產(chǎn)生的假陰性或假陽性的結(jié)果。

5 小結(jié)與展望

沙門氏菌作為常見的食源性致病菌， 其對人體和動物造成的危害也受到更多的關(guān)注。 隨著關(guān)注度的增高，沙門氏菌的檢測方法得到不斷的發(fā)展和提高。 各類檢測方法和技術(shù)多種多樣，各有其優(yōu)缺點(diǎn)和適用情況， 因此根據(jù)具體情況選用恰當(dāng)?shù)姆椒ㄒ赃_(dá)到最大的效益。

現(xiàn)階段在沙門氏菌檢測方法上已取得可喜的成就， 在實(shí)際應(yīng)用中成效明顯。 隨著科學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，PCR 檢測技術(shù)必定朝著更加快速、敏捷、準(zhǔn)確且經(jīng)濟(jì)的方法發(fā)展和提升。