補(bǔ)體C1q在診斷狼瘡性腎炎中的研究進(jìn)展*

張亞梅，劉運(yùn)雙 綜述，俸家富 審校

四川省綿陽市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，四川綿陽 621000

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)是一種復(fù)雜的自身免疫性疾病，涉及全身多個(gè)系統(tǒng)，可引起多組織和器官的損傷。不同SLE患者的疾病表型和嚴(yán)重程度均存在顯著差異。狼瘡性腎炎(LN)是SLE患者最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一,有多達(dá)20%的SLE患者在腎損傷約10年后發(fā)展為終末期腎病[1]，給公共衛(wèi)生帶來巨大的負(fù)擔(dān)。腎臟的早期損傷可能與活動(dòng)性炎癥有關(guān)，而晚期的不可逆性損傷通?？蓺w因于藥物的不良反應(yīng)，尤其是長期皮質(zhì)類固醇類藥物的使用[2]。腎臟組織活檢是LN診斷和指導(dǎo)治療方案的金標(biāo)準(zhǔn)，但其對(duì)受檢者一般狀態(tài)要求較高，不能連續(xù)進(jìn)行，且所獲得的標(biāo)本局限，無法反映患者整個(gè)腎臟的病理狀態(tài)[3]，再加上其為有創(chuàng)性操作，患者的依從性不高。因此，理想的生物標(biāo)志物對(duì)于LN的預(yù)測(cè)、早期診斷和治療是非常重要的。目前，已有超過45種標(biāo)志物被相繼發(fā)現(xiàn)，包括自身抗體、細(xì)胞因子、趨化因子、生長因子及其可溶性受體、黏附分子相關(guān)的蛋白質(zhì)分子、mRNA和微小RNA，以及活化的內(nèi)皮、上皮等[4]，但以上指標(biāo)幾乎均未被納入常規(guī)臨床應(yīng)用。

隨著研究的深入，作為固有免疫重要組成部分的補(bǔ)體系統(tǒng)在LN發(fā)病中的作用也被逐漸認(rèn)識(shí)。補(bǔ)體系統(tǒng)具有介導(dǎo)炎癥、裂解細(xì)胞、調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)和調(diào)節(jié)吞噬作用等生物功能。補(bǔ)體C1q是補(bǔ)體經(jīng)典途徑的重要組成部分，能識(shí)別并啟動(dòng)補(bǔ)體活化的經(jīng)典途徑，并可將組織的非特異性免疫與先天免疫聯(lián)系起來，參與調(diào)節(jié)體內(nèi)免疫復(fù)合物的清除[5]。本文對(duì)補(bǔ)體C1q的致病機(jī)制、檢測(cè)方法及其在診斷LN中的應(yīng)用現(xiàn)狀進(jìn)行綜述，旨在為臨床應(yīng)用提供參考。

1 補(bǔ)體C1q的生物學(xué)特性

作為補(bǔ)體C1的重要組成成分之一，補(bǔ)體C1q具有最大的分子結(jié)構(gòu)，相對(duì)分子質(zhì)量約為410 000，是一種由18個(gè)多肽鏈組成的糖蛋白[6]。C1q分子結(jié)構(gòu)中含有6個(gè)異三聚體膠原蛋白樣三螺旋，在其N-末端的中段部分結(jié)合形成原纖維狀結(jié)構(gòu)，然后在彎曲處發(fā)散，在膠原蛋白樣區(qū)域的中段處形成6個(gè)單獨(dú)的“莖”，每個(gè)“莖”終止于C-末端異源三聚體球狀結(jié)構(gòu)域[7]，該球狀結(jié)構(gòu)域是腫瘤壞死因子受體超家族的成員之一，可以結(jié)合多種自身和非自身配體[8]。補(bǔ)體C1q的6個(gè)球狀結(jié)構(gòu)域的主要靶標(biāo)是免疫復(fù)合物中存在的多個(gè)Fc區(qū)，包括免疫球蛋白(Ig)G和IgM抗體。

與主要由肝臟衍生的大多數(shù)其他補(bǔ)體蛋白不同，補(bǔ)體C1q主要由巨噬細(xì)胞合成。有報(bào)道稱，在健康人血清中，補(bǔ)體C1q的水平約為80 μg/mL，隨著年齡的增長，其水平有所上升，在60～81歲的人群中可達(dá)161 μg/mL[9]，但在中國人群中補(bǔ)體C1q的水平變化還有待進(jìn)一步研究。

2 補(bǔ)體C1q在LN發(fā)病機(jī)制中的作用

許多自身免疫性疾病的發(fā)病機(jī)制中都有補(bǔ)體系統(tǒng)的參與，但其確切作用尚不明確。一方面，早期經(jīng)典途徑補(bǔ)體成分的遺傳缺陷使SLE患者成為易感群體；另一方面，補(bǔ)體激活免疫復(fù)合物(IC)也是促進(jìn)組織損傷的成分之一。 因此，補(bǔ)體系統(tǒng)在任何一個(gè)方向上的不平衡及經(jīng)典途徑和替代途徑的各自作用均可對(duì)疾病產(chǎn)生復(fù)雜的影響。

目前廣泛認(rèn)為補(bǔ)體在SLE，尤其是LN的發(fā)病機(jī)制中具有“雙刃劍”作用[10-11]。當(dāng)補(bǔ)體C1中的C1q以高親和力結(jié)合IC中IgM或IgG的Fc部分時(shí)，經(jīng)典途徑將被激活以促進(jìn)病原體的清除，但同時(shí)也造成了組織破壞。另外，補(bǔ)體C1q與其靶標(biāo)的結(jié)合觸發(fā)其構(gòu)象變化和C1r的激活，隨后又激活C1s[12]?；罨腃1作用于C4形成C4b2a，C4b2a作為C3的轉(zhuǎn)化酶又激活C3，從而激活旁路途徑。而患者機(jī)體中免疫功能失調(diào)導(dǎo)致免疫復(fù)合物數(shù)量過多，致使C1q等補(bǔ)體被快速活化，進(jìn)而增加抗C1q抗體的合成，引起大量免疫復(fù)合物沉積，導(dǎo)致腎組織損傷。

另一方面，補(bǔ)體C1q還可促進(jìn)在免疫耐受中起重要作用的凋亡細(xì)胞的清除。但補(bǔ)體C1q的數(shù)量下降或者功能障礙時(shí)，均無法正常發(fā)揮對(duì)凋亡細(xì)胞的清除作用[13]。造成這種現(xiàn)象的主要原因包括：補(bǔ)體C1q可能會(huì)影響樹突狀細(xì)胞(DC)對(duì)凋亡細(xì)胞的吞噬作用。補(bǔ)體C1q可通過凋亡細(xì)胞表面的C1q受體促進(jìn)吞噬作用，并且經(jīng)補(bǔ)體C1q調(diào)理后的凋亡細(xì)胞可能會(huì)更有效地被未成熟樹突狀細(xì)胞(iDC)攝取，但其并不會(huì)在體內(nèi)引起激烈的炎性反應(yīng)，這將有助于維持自身免疫耐受；其次，補(bǔ)體C1q也可能對(duì)DC的分化和成熟有影響。此外，補(bǔ)體C1q還具有誘導(dǎo)DC成熟的作用，經(jīng)其處理后的DC可通過分泌特異性細(xì)胞因子誘導(dǎo)Th1細(xì)胞應(yīng)答。

3 補(bǔ)體C1q檢測(cè)方法學(xué)的研究進(jìn)展

1963年，LEPOW等人通過離子交換色譜法從離子交換柱的洗脫位置定義了補(bǔ)體C1的3個(gè)子組分：C1q、C1r和C1s。1971年，1項(xiàng)使用補(bǔ)體C1q的沉淀素反應(yīng)(凝膠擴(kuò)散方法)來檢測(cè)SLE患者血清中未知免疫復(fù)合物的實(shí)驗(yàn)證實(shí)了補(bǔ)體C1q自身抗體的存在。為了抑制免疫復(fù)合物的低親和力結(jié)合，有研究第一次在檢測(cè)方法中使用了高離子強(qiáng)度緩沖液[14]，隨后又用補(bǔ)體C1q膠原蛋白區(qū)域的固相分析進(jìn)行了替代。2007年首次引入了檢測(cè)人補(bǔ)體C1q球狀結(jié)構(gòu)域自身抗體的檢測(cè)方法[15]。目前最常用的檢測(cè)方法有單向免疫擴(kuò)散法，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)及免疫散射、透射比濁法等。單向免疫擴(kuò)散法的影響因素較多，因此臨床應(yīng)用較少；ELISA多采用雙抗體夾心法間接檢測(cè)補(bǔ)體C1q抗原或者用間接ELISA檢測(cè)抗體。有報(bào)道顯示，采用ELISA的商業(yè)試劑盒檢測(cè)出的結(jié)果與臨床之間存在良好的相關(guān)性[16]，但循環(huán)免疫復(fù)合物可能會(huì)對(duì)該方法帶來一定的干擾。目前，免疫散射、透射比濁法可利用血清中補(bǔ)體C1q 抗原與加入的特異性抗體反應(yīng)形成不溶性免疫復(fù)合物，從而引起光強(qiáng)度的變化，直接定量檢測(cè)補(bǔ)體C1q水平，該方法具有簡單、快捷的優(yōu)點(diǎn)，并且可應(yīng)用于全自動(dòng)生化分析儀。高玲等[17]對(duì)運(yùn)用免疫比濁法的商業(yè)化試劑盒的檢測(cè)性能進(jìn)行了評(píng)價(jià)，結(jié)果顯示其在線性、正確度和攜帶污染率等方面均達(dá)到《定量臨床檢驗(yàn)方法的初步評(píng)價(jià)批準(zhǔn)指南》第2 版(EP10-A2)中的標(biāo)準(zhǔn)，滿足臨床檢測(cè)要求。

4 補(bǔ)體C1q在LN診斷中的臨床應(yīng)用進(jìn)展

有研究發(fā)現(xiàn)，抗C1q抗體水平可以在一定程度上反映LN患者的腎損傷狀態(tài)，并預(yù)測(cè)患者的疾病活動(dòng)程度。補(bǔ)體C1q誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)成抗C1q抗體，腎組織中的基底膜結(jié)構(gòu)在抗C1q抗體的作用下與補(bǔ)體C1q結(jié)合， 生成的免疫復(fù)合物不斷沉積到基底膜上，加重組織損傷。目前補(bǔ)體C1q在LN診斷中的作用可大致歸納為以下3個(gè)方面。

4.1用于預(yù)測(cè)腎臟病變的風(fēng)險(xiǎn) LN患者血清抗C1q抗體陽性率約為40.00%，明顯高于未患LN的SLE患者(21.67%)，且該抗體在SLE患者腎臟病變之前已出現(xiàn)高表達(dá)現(xiàn)象[18]，因此研究者考慮是否能夠通過該指標(biāo)的變化提前預(yù)測(cè)患者的腎臟病變風(fēng)險(xiǎn)。在另1項(xiàng)臨床研究中，LN患者抗C1q抗體的表達(dá)顯著高于其他人群，而補(bǔ)體 C3的表達(dá)則較其他人群顯著降低[19]。TAN等[20]的臨床研究表明，LN患者的血清補(bǔ)體C1q水平顯著低于單純SLE患者和健康個(gè)體。

4.2用于判斷LN的活動(dòng)度 有研究表明，補(bǔ)體C1q的表達(dá)水平與LN的活動(dòng)有一定關(guān)系[21]。CHI等[22]的臨床研究發(fā)現(xiàn)，LN患者的血清補(bǔ)體C1q水平明顯低于未合并LN患者，且低于非活動(dòng)性SLE患者。趙笑梅等[23]的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，20例LN、SLE患者的補(bǔ)體C1q水平較其他腎炎及其他自身免疫性疾病患者顯著降低，且處于SLE活動(dòng)期患者的補(bǔ)體C1q水平低于穩(wěn)定期SLE患者，考慮可通過監(jiān)測(cè)補(bǔ)體C1q的水平變化來監(jiān)測(cè)患者的病情變化情況。

4.3用于LN的腎臟損傷程度判斷及診斷 ALSUWAIDA等[24]的研究指出，補(bǔ)體C1q與LN患者的腎臟損害程度有關(guān)。BASSI等[25]的研究指出，通過檢測(cè)機(jī)體抗C1q抗體與穿孔素3抗體的比值能夠判斷LN患者的病情嚴(yán)重程度，且病情嚴(yán)重程度與該比值呈正相關(guān)。既往研究表明，應(yīng)用抗C1q抗體診斷LN的特異度為70%～92%，而靈敏度為44%～100%，陰性預(yù)測(cè)值為100%[26]。趙俊芳等[27]研究發(fā)現(xiàn)，LN患者的外周血中抗C1q抗體和OX40mRNA的表達(dá)反映了患者的疾病活動(dòng)性，其在LN診斷中的靈敏度約為93.3%，特異度約為73.3%。

5 小 結(jié)

綜上所述，血清中補(bǔ)體C1q和抗C1q抗體的水平在預(yù)測(cè)SLE患者的腎功能損傷、評(píng)估LN患者的病情變化、早期診斷LN及SLE的鑒別診斷中都有一定應(yīng)用價(jià)值。此外，補(bǔ)體C1q及其抗體的檢測(cè)方法簡單、易操作，可在實(shí)驗(yàn)室中實(shí)現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)，這為其日后的廣泛使用提供了條件。在今后的研究中，可進(jìn)一步增加樣本量，研究補(bǔ)體C1q與其他指標(biāo)聯(lián)合在LN的診斷及與其他疾病的鑒別診斷中的應(yīng)用價(jià)值，研究的標(biāo)本類型還可以擴(kuò)大到尿液、體液甚至組織等，從而進(jìn)一步探索補(bǔ)體C1q的應(yīng)用價(jià)值。