白芍飲片厚度對(duì)其損耗及標(biāo)準(zhǔn)湯劑轉(zhuǎn)移率和出膏率的影響

林 杰，梁德勤，羅 云，金傳山，張 偉，甘宜杰

(1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，安徽 合肥 230012；2.中藥飲片制造新技術(shù)安徽省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，安徽 合肥 230012；3.安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院藥劑科，安徽 合肥 230022；4.安徽協(xié)和成藥業(yè)飲片有限公司，安徽 亳州 236800)

白芍為毛茛科植物芍藥PaeonialactifloraPall.的干燥根。古往今來，中藥飲片的切制大多遵循“質(zhì)松宜厚，質(zhì)堅(jiān)宜薄 ”的原則[1]，白芍一直根據(jù)此原則切為薄片，如《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版一部中對(duì)于白芍飲片的形成過程描述為“洗凈，潤(rùn)透，切薄片”[2]。應(yīng)切為薄片的藥材若切厚片，有效成分難以煎出，既影響療效，也浪費(fèi)藥材，且切片過厚無(wú)法將其“味”煎出，如桂枝湯中的桂枝與白芍，桂枝以氣勝，白芍以味勝，若白芍片過厚，煎煮時(shí)間短，雖能保全桂枝之氣，卻失白芍之味；若煎煮時(shí)間長(zhǎng)，雖能取白芍之味，卻失桂枝之氣。白芍切薄片，可氣味兼顧[3]。《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版第一部和2005年《安徽省中藥飲片炮制規(guī)范》均記載白芍飲片為1～2 mm的薄片[1，4]。但通過對(duì)亳州市康美中藥材大市場(chǎng)、十九里中藥材交易市場(chǎng)及多家中藥飲片加工企業(yè)的走訪發(fā)現(xiàn)，白芍飲片切制時(shí)，以3～4 mm厚片居多，甚至有超過4 mm的厚片。因此本實(shí)驗(yàn)擬對(duì)不同厚度白芍飲片的碎屑率、翹片率及其干膏率以及其中主要成分煎出率進(jìn)行測(cè)定，以期探尋白芍在產(chǎn)業(yè)化加工中切厚片的科學(xué)性與合理性。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Thermo Fisher Ulti Mate 3000 高效液相色譜儀(LPG-3400SDN 四元泵，DAD-3000 檢測(cè)器)：賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司；上皿電子天平(FA2004)：上海精科天平；百萬(wàn)分之一微量分析天平(EX-H3052)：上海贊維衡器；循環(huán)水式真空泵(SHZ-DⅢ)：湖南予華儀器有限公司；電子萬(wàn)用電爐：興化市滬興電熱電器廠。

1.2 試藥 氧化芍藥苷(批號(hào) B21472，純度≥98%)、芍藥內(nèi)酯苷(批號(hào) B21149，純度≥91.4%)、芍藥苷(批號(hào) B21148，純度≥98%)、苯甲酰芍藥苷(批號(hào) B20086，純度≥98%)：上海源葉生物科技有限公司；乙醇(分析純)：上海潤(rùn)捷；乙腈(色譜純)：Oceanpak；磷酸(分析純)。

2018年分別在安徽亳州、四川和浙江采集7批樣品，采收信息見表1。經(jīng)安徽中醫(yī)藥大學(xué)金傳山教授鑒定為毛茛科植物芍藥PaeonialactifloraPall.的根加工出的白芍藥材。

表1 白芍樣品信息

2 方法與結(jié)果

2.1 不同飲片厚度白芍樣品的加工 取各批次白芍藥材12 kg，按粗細(xì)分為3個(gè)級(jí)別，分別進(jìn)行軟化，軟化結(jié)束后將大小混勻，平均分為4份。

1.5 mm飲片厚度白芍飲片A1—A7：將軟化后的白芍藥材按以往復(fù)式切藥機(jī)切制飲片厚度切成約1.5 mm的白芍飲片，低溫干燥至含水量為9%左右，得樣品A1—A7。

2.2 mm飲片厚度白芍飲片B1—B7：將軟化后的白芍藥材按以往復(fù)式切藥機(jī)切制飲片厚度切成約2.2 mm的白芍飲片，低溫干燥至含水量為9%左右，得樣品B1—B7。

3 mm飲片厚度白芍飲片C1—C7：將軟化后的白芍藥材按以往復(fù)式切藥機(jī)切制飲片厚度切成約3 mm的白芍飲片，低溫干燥至含水量為9%左右，得樣品C1—C7。

4.5 mm飲片厚度白芍飲片D1—D7：將軟化后的白芍藥材按以往復(fù)式切藥機(jī)切制飲片厚度切成約4.5 mm的白芍飲片，低溫干燥至含水量為9%左右，得樣品D1—D7。

2.2 碎屑率、下料率及翹片率檢測(cè) 將干燥后飲片通過2 cm篩和6 cm篩，2 cm篩篩出的稱為碎屑，6 cm篩篩出的為下料，下料一般不作飲片應(yīng)用，通常作為提取原料使用。實(shí)驗(yàn)將邊緣翹起、飲片不平整的白芍判定為翹片。碎屑率即為碎屑質(zhì)量與飲片質(zhì)量之百分比，下料率為下料質(zhì)量與飲片質(zhì)量之百分比，翹片率為翹片質(zhì)量與飲片質(zhì)量之百分比。碎屑率、下料率及翹片率的結(jié)果見表2。結(jié)果表明，不同切片厚度的白芍飲片的碎屑率、下料率及翹片率有明顯的差異性，且飲片越薄其碎屑率、下料率及翹片率越高。

表2 不同厚度白芍飲片的碎屑率、下料率及翹片率比較

注：與1.5 mm白芍飲片比較，*P<0.05；與2.2 mm白芍飲片比較，#P<0.05

2.3 白芍飲片供試品溶液的制備 精密稱取白芍飲片粉末(過4號(hào)篩)0.5 g于25 mL容量瓶中，加入稀乙醇20 mL，放入超聲儀中超聲30 min(功率270 W，頻率40 kHz)，取出，待溶液冷卻后用稀乙醇定容至刻度，搖晃均勻，用0.45 μm濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得白芍飲片供試品溶液。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液的制備[5-7]取白芍飲片100 g，加7倍量水浸泡30 min，加熱回流1 h，趁熱過濾，藥渣加6倍水加熱回流40 min，合并兩次濾液，濃縮定容至500 mL，即得濃度為0.2 g/mL的標(biāo)準(zhǔn)湯劑。取白芍標(biāo)準(zhǔn)湯劑1 mL，加甲醇定容至10 mL，搖勻，靜置20 min，分出上清液，0.45 μm 微孔濾膜過濾，即得標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液。

2.5 對(duì)照品溶液的制備 分別精密稱取對(duì)照品氧化芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷、苯甲酰芍藥苷適量于10 mL容量瓶中，加甲醇配制成芍藥苷0.375 6 mg/mL，氧化芍藥苷0.116 6 mg/mL，芍藥內(nèi)酯苷0.151 8 mg/mL，苯甲酰芍藥苷0.075 1 mg/mL混合對(duì)照品溶液，搖勻，備用。

2.6 色譜條件 色譜柱：WondaSiL C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈(A)-0.1%磷酸(B)，梯度洗脫(0～5 min，8%～12% A；5～20 min，12% ～ 20% A；20～30 min，20% A；30～35 min，20% ～ 35% A；35 ～ 45 min，35% A)；柱溫：30 ℃；容積流量：1 mL/min；進(jìn)樣容積：10 μL，波長(zhǎng)230 nm。高效液相色譜圖見圖1。

注：1.氧化芍藥苷；2.芍藥內(nèi)酯苷；3.芍藥苷；4.苯甲酰芍藥苷

圖1白芍混合對(duì)照品溶液(A)、白芍飲片(B)和標(biāo)準(zhǔn)湯劑(C)的高效液相色譜圖

2.7 方法學(xué)考察

2.7.1 線性關(guān)系的考察 分別取適量的7種成分對(duì)照品，用甲醇溶解，定容，并將其稀釋成6個(gè)梯度，取各梯度對(duì)照品溶液10 μL，進(jìn)樣，記錄其峰面積。以對(duì)照品質(zhì)量濃度(ρ)為橫坐標(biāo)，以峰面積(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，建立各成分的標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性方程、相關(guān)系數(shù)及線性范圍：氧化芍藥苷，A=1 210ρ+0.579 2，r=0.999 5，線性范圍0.017 2～0.274 7 mg/mL；芍藥內(nèi)酯苷，A=4 689ρ+5.020 8，r=0.999 6，線性范圍0.020 2～0.324 0 mg/mL；芍藥苷，A=5 716ρ-21.783，r=0.999 8，線性范圍0.061 1～0.978 1 mg/mL；苯甲酰芍藥苷，A=9 766ρ+20.988，r=0.999 5，線性范圍0.009 2～0.146 9 mg/mL。

2.7.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取供試品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，計(jì)算相對(duì)應(yīng)的RSD，結(jié)果顯示白芍飲片和標(biāo)準(zhǔn)湯劑中氧化芍藥苷RSD依次為0.06%、0.26%；芍藥內(nèi)酯苷RSD依次為0.09%、1.16%；芍藥苷RSD依次為0.07%、0.09%；苯甲酰芍藥苷RSD依次為0.10%、0.08%。表明該分析方法精密度良好。

2.7.3 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一樣品6份，制備成供試品溶液并進(jìn)行含量測(cè)定，測(cè)得白芍飲片和標(biāo)準(zhǔn)湯劑中氧化芍藥苷RSD依次為0.10%、1.37%；芍藥內(nèi)酯苷RSD依次為0.08%、1.16%；芍藥苷RSD依次為0.08%、1.37%；苯甲酰芍藥苷RSD依次為0.12%、0.33%。結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.7.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密稱定粉末0.5 g，按供試品溶液制備方法制備供試品溶液，按“2.6”項(xiàng)色譜條件操作，分別在室溫下放置0、2、4、8、12、24 h后進(jìn)樣分析，記錄峰面積。結(jié)果顯示，白芍飲片和標(biāo)準(zhǔn)湯劑中芍藥苷對(duì)應(yīng)峰面積的RSD分別為0.07%、1.86%，芍藥內(nèi)酯苷對(duì)應(yīng)峰面積的RSD分別為0.10%、0.89%，氧化芍藥苷對(duì)應(yīng)峰面積的RSD分別為1.32%、1.11%，苯甲酰芍藥苷對(duì)應(yīng)峰面積的RSD為0.06%、0.45%，說明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的白芍粉末約0.25 g，按1∶1加入適量的對(duì)照品，制備6份平行樣，按“2.6”項(xiàng)中色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算回收率及RSD。白芍飲片中芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷的平均加樣回收率分別為99.38%(RSD 1.64%)、99.57%(RSD 2.32%)、100.06%(RSD 2.52%)、101.92%(RSD 1.67%)；白芍標(biāo)準(zhǔn)湯劑中芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、氧化芍藥苷、苯甲酰芍藥苷的平均加樣回收率分別為99.00%(RSD 2.79%)、99.27%(RSD 1.89%)、99.25%(RSD 1.85%)、100.51%(RSD 2.50%)。結(jié)果表明該方法準(zhǔn)確可靠。

2.8 樣品含量測(cè)定 分別精密吸取混合對(duì)照品溶液、白芍飲片供試品溶液和白芍標(biāo)準(zhǔn)湯劑供試品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，按“2.6”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，記錄各樣品峰面積，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算各樣品含量，結(jié)果見表3。1.5 mm飲片厚度白芍飲片的標(biāo)準(zhǔn)湯劑中4種化學(xué)成分含量最高，與2.2 mm飲片厚度白芍飲片比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；1.5 mm飲片厚度白芍飲片中芍藥苷和苯甲酰芍藥苷含量與3 mm飲片厚度和4.5 mm飲片厚度白芍飲片比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表3 不同厚度白芍飲片中主要成分含量比較

注：與1.5 mm厚度飲片比較，*P<0.05；與2.2 mm厚度飲片比較，#P<0.05

2.9 不同厚度白芍飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑轉(zhuǎn)移率和出膏率測(cè)定

2.9.1 不同厚度白芍飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑轉(zhuǎn)移率比較 按照下列公式分別計(jì)算出芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、氧化芍藥苷和苯甲酰芍藥苷的轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見表4。按文獻(xiàn)[8]計(jì)算轉(zhuǎn)移率。轉(zhuǎn)移率=w/m×100%。式中w表示1 g白芍飲片在標(biāo)準(zhǔn)湯劑中被提取的物質(zhì)的質(zhì)量(mg)，m表示1 g白芍飲片經(jīng)超聲提取的物質(zhì)的質(zhì)量(mg)。對(duì)不同厚度白芍飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑中各成分的轉(zhuǎn)移率進(jìn)行單因素方差分析。隨著白芍飲片厚度的增加，其標(biāo)準(zhǔn)湯劑中4種化學(xué)成分的轉(zhuǎn)移率逐漸降低，其中1.5 mm白芍飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑中4種化學(xué)成分的轉(zhuǎn)移率均顯著低于4.5 mm白芍飲片(P<0.05)。

2.9.2 不同厚度白芍飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑出膏率 分別精密移取不同厚度白芍飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑50 mL于已恒定質(zhì)量的蒸發(fā)皿中，105 ℃烘4 h后取出，置干燥器中冷卻0.5 h，立即稱質(zhì)量，計(jì)算出膏率，結(jié)果見表4。不同厚度白芍飲片的標(biāo)準(zhǔn)湯劑平均出膏率分別為15.22%、14.89%、12.89%和10.52%。結(jié)果表明白芍飲片越厚其出膏率越低。

表4 不同厚度白芍飲片標(biāo)準(zhǔn)湯劑轉(zhuǎn)移率和出膏率比較

注：與1.5 mm厚度白芍飲片比較，*P<0.05；與2.2 mm厚度白芍飲片比較，#P<0.05；與3.0 mm厚度白芍飲片比較，△P<0.05

3 討論

由不同厚度白芍飲片的碎屑率、下料率及翹片率結(jié)果可發(fā)現(xiàn)，隨著白芍飲片厚度增加，其碎屑率、下料率及翹片率總體為下降趨勢(shì)，當(dāng)白芍切為薄片時(shí)，其損耗率較高，翹片率也極高，且其在貯藏與運(yùn)輸過程中極易破碎，會(huì)進(jìn)一步增加碎屑率，增大損耗，且等量的白芍切薄片較切厚片更耗費(fèi)人力、物力和時(shí)間，增加生產(chǎn)成本，不適用于產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。從此角度考慮，白芍切為薄片值得進(jìn)一步商榷。

從不同厚度白芍飲片干膏率結(jié)果可看出，隨著飲片厚度增加，其煎出的干膏率逐漸降低，但1.5 mm薄片與2.2 mm左右的厚片出膏率的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，與3 mm厚的飲片相比，下降了2個(gè)百分點(diǎn)，實(shí)際煎煮中也許可通過延長(zhǎng)煎煮時(shí)間來提升煎出的出膏率。

不同厚度白芍飲片中主要成分在標(biāo)準(zhǔn)湯劑里的轉(zhuǎn)移率的平均值表明，各成分的轉(zhuǎn)移率隨著飲片厚度的增大而變小，其中飲片厚度為1.5 mm的白芍飲片的標(biāo)準(zhǔn)湯劑中各成分轉(zhuǎn)移率最高，而當(dāng)切片厚度超過3 mm時(shí)，芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷、氧化芍藥苷和苯甲酰芍藥苷的轉(zhuǎn)移率低于56%。據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，此4種成分為白芍總苷的主要成分，具有保護(hù)肝臟、止痛及抗炎等作用，故白芍飲片厚度可能會(huì)影響其臨床藥效[9]。

從碎屑率、下料率、翹片率及干膏率和主要成分轉(zhuǎn)移率綜合來看，白芍切為1.5 mm左右的薄片雖出膏率及多種成分的煎出率較高，但其翹片率及損耗率較高，且不利于控制生產(chǎn)成本，2.2 mm的飲片翹片率顯著降低，且其出膏率與1.5 mm薄片相當(dāng)，主要成分煎出率下降不明顯，但當(dāng)厚度控制在3 mm左右時(shí)，其干膏率和主要成分煎出率下降較明顯，不建議切至此厚度。通過研究，結(jié)合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)實(shí)際，建議亳白芍飲片厚度以2 mm左右為宜。此結(jié)果也說明從古自今白芍炮制方法的正確性。至于白芍切薄片其碎屑率、下料率及翹片率較高的問題，可通過改進(jìn)切制設(shè)備以及干燥方式等方法來解決，這需要進(jìn)一步研究。