來(lái)曲唑聯(lián)合高脂膳食誘導(dǎo)PCOS-IR大鼠模型復(fù)制時(shí)間及其內(nèi)分泌、代謝改變的實(shí)驗(yàn)研究*

王明星，尹謙，張曉丹，許昕

（1.首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京中醫(yī)醫(yī)院，北京 100010；2.北京中醫(yī)藥大學(xué)，北京 100027）

多囊卵巢綜合征（polycystic ovarian syndrome, PCOS）是指青春期及育齡期婦女常見(jiàn)的一種復(fù)雜性生殖功能障礙及糖脂代謝異常的內(nèi)分泌紊亂綜合征，其生殖功能障礙包括卵泡發(fā)育和排卵異常，是青春期、育齡期婦女月經(jīng)紊亂及不孕的原因之一[1]。該病在國(guó)外育齡期婦女中發(fā)病率約為20%，我國(guó)報(bào)道的PCOS發(fā)病率為5%～10%[2]。PCOS 發(fā)病的重要病理生理基礎(chǔ)為胰島素抵抗（insulin resistance, IR）。BURGHEN于1980年首次報(bào)道PCOS 患者存在高胰島素血癥，流行病學(xué)研究證實(shí)多囊卵巢綜合征胰島素抵抗（PCOSIR）的發(fā)病率約為5%，占PCOS 的50%～70%[3]。PCOS-IR 具有高發(fā)性、異質(zhì)性、終身性、難治性等特點(diǎn)，其病理機(jī)制較PCOS 更為復(fù)雜，除排卵障礙、高雄激素血癥之外，常引起肥胖、高胰島素血癥等代謝異常，后者又加重IR，形成病理狀態(tài)的惡性循環(huán)，使PCOSIR 復(fù)雜演變，最終可導(dǎo)致脂肪肝、糖尿病、高血壓、子宮內(nèi)膜癌變及代謝綜合征等遠(yuǎn)期并發(fā)癥。近年來(lái)，PCOS-IR 的發(fā)病率逐漸上升，其治療相當(dāng)棘手，治愈難度很大，該病損害生殖功能的同時(shí)，更影響女性身心健康。本研究復(fù)制穩(wěn)定理想的PCOS-IR 大鼠模型，以研究和探索該病的發(fā)病機(jī)制及藥物作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

選取6 ～8 周齡，無(wú)特定病原體級(jí)SD 雌性大鼠48 只，體重160 ～180 g，北京華阜康生物科技股份有限公司提供，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（京）2018-0006。將48 只大鼠按體重排序編號(hào)，利用隨機(jī)數(shù)字表法將其分為對(duì)照組和模型組，每組24 只；分別在第21、24、27 及30 天處死6 只大鼠。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)北京市中醫(yī)研究所倫理委員會(huì)的審批（審批文號(hào)：2018050101）。

1.2 材料與試劑

羧甲基纖維素鈉（carboxymethylcellulose sodium salt, CMC-Na）（ 購(gòu) 自 美 國(guó)Sigma 公 司， 批 號(hào)：1002375619），用超純水配制成0.5%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）CMC-Na 溶液；來(lái)曲唑（江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司，批號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字HI9991001），將1 mg/（kg·d）的來(lái)曲唑溶于0.5%（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）CMC-Na 溶液中配制成來(lái)曲唑混懸液。羅氏活力型血糖儀試紙（德國(guó)羅氏診斷有限公司）；血清胰島素（INS）（批號(hào)：CEA447Ra-96T）、甘油三酯（TG）（批號(hào)：CEB687Ge-96T）、促卵泡激素（FSH）（批號(hào)：CEA830Ra-96T）、黃體生成素（LH）（批號(hào)：CEA441Ra-96T）、睪酮（T）（批號(hào)：CEA458Ge-96T）試劑盒均由北京北方生物 技術(shù)研究所有限公司提供。高脂飼料（H10060，5.24 kal/kg，供能比：蛋白20%、碳水化合物20%、脂肪60%），普通飼料（H10010，3.85 kal/kg，供能比：蛋白20%、碳水化合物70%、脂肪10%），由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，主要成分為酪蛋白、糊精、蔗糖、纖維素、豆油、豬油、多礦、多維、膽堿等。

1.3 儀器與設(shè)備

超低溫冰箱、組織脫水機(jī)、石蠟包埋機(jī)、石蠟切片機(jī)、圖像分析系統(tǒng)、紫外分光光度計(jì)、高速冷凍離心機(jī)等均由北京市中醫(yī)研究所實(shí)驗(yàn)室平臺(tái)提供。

1.4 方法

1.4.1 模型復(fù)制方法 本實(shí)驗(yàn)參考KAFALI[4]及本課題組[5]前期來(lái)曲唑模型復(fù)制法。48 只SD 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d 后，對(duì)照組大鼠用普通飼料喂養(yǎng)30d，模型組大鼠用高脂飼料喂養(yǎng)30d。喂養(yǎng)21d 后，對(duì)照組大鼠每天按照1 ml/100 g 灌胃CMC-Na 溶液，模型組大鼠每天按照1 ml/100 g 灌胃來(lái)曲唑混懸液，兩組均在第21、24、27 及30 天處死6 只大鼠。

1.4.2 檢測(cè)指標(biāo) ①大鼠體重及體長(zhǎng)。固定每周測(cè)量大鼠體重及體長(zhǎng)（大鼠鼻子至肛門直線距離），繪制大鼠體重增長(zhǎng)變化曲線，并計(jì)算Lee's 指數(shù)[6]（可作為評(píng)價(jià)成年肥胖模型大鼠肥胖程度的指標(biāo)）。②大鼠卵巢重量及卵巢體積。兩組大鼠分別在第21、24、27 及30 天實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，腹腔麻醉取出大鼠左側(cè)卵巢，進(jìn)行稱重，計(jì)算卵巢指數(shù)（‰）=卵巢重量（g）/體重（g）×1 000；分別測(cè)量大鼠卵巢長(zhǎng)、短徑，計(jì)算卵巢體積[7]（mm3）=（π/6）×長(zhǎng)徑（mm）×短徑（mm）2。③性激素與代謝指標(biāo)。兩組大鼠分別在第21、24、27 及30天灌胃后，禁食8h，次日鼠尾采血，利用羅氏活力型血糖儀試紙測(cè)定空腹血糖（FBG）并記錄。隨后腹腔注射質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2%戊巴比妥鈉（0.2ml/100g）進(jìn)行麻醉，取腹主動(dòng)脈血5 ～8ml，離心收集血清。嚴(yán)格按照ELISA 試劑盒說(shuō)明書檢測(cè)大鼠血清FSH、LH、T、空腹胰島素（FINS）及TG 的水平。計(jì)算FSH/LH 比值和HOMA-IR[HOMA-IR=FPG（mmol/L）×FINS（mIU/L）/22.5]。④鏡下卵巢及卵泡情況。兩組大鼠分別在第21、24、27 及30 天實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，腹腔麻醉取出大鼠左側(cè)卵巢，用體積分?jǐn)?shù)為4%的多聚甲醛固定卵巢組織，常規(guī)組織脫水，石蠟包埋；將卵巢組織切成5 μm 厚切片，常規(guī)脫蠟、水化后經(jīng)蘇木精-伊紅（HE）染色，中性樹(shù)膠封片，光學(xué)顯微鏡下觀察兩組大鼠卵巢組織病理學(xué)變化，于低倍鏡下記錄每只大鼠卵巢組織中的卵泡個(gè)數(shù)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用GraphPad Prism 7 及SPSS 17.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析或重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，兩組比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組大鼠一般情況

灌胃期間，對(duì)照組大鼠未出現(xiàn)任何不適癥狀，大鼠飲食及活動(dòng)自如。模型組大鼠偶見(jiàn)情緒躁動(dòng)，出現(xiàn)灌胃困難等情況，等待約10 min 后大鼠情緒可恢復(fù)平穩(wěn)，繼續(xù)灌胃，其飲食及活動(dòng)均無(wú)異常狀況；實(shí)驗(yàn)期間兩組未見(jiàn)大鼠死亡。

2.2 兩組大鼠體重及Lee's 指數(shù)

兩組大鼠喂養(yǎng)第1、7 及14 天的體重及Lee's 指數(shù)比較，采用重復(fù)測(cè)量設(shè)計(jì)的方差分析，結(jié)果：①不同時(shí)間點(diǎn)的大鼠體重（F=45.810，P=0.000）及Lee's指數(shù)（F=8.347，P=0.008）有差異。②兩組大鼠體重（F=1065.000，P=0.000）及Lee's 指數(shù)（F=14.080，P=0.000）有差異，隨著喂養(yǎng)天數(shù)的增加，兩組大鼠體重及Lee's 指數(shù)均逐漸增高；③模型組與對(duì)照組的大鼠體重（F=137.500，P=0.000）及Lee's 指數(shù)（F=24.980，P=0.000）變化趨勢(shì)有差異，即喂養(yǎng)7d 后，模型組大鼠體重高于同時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組；喂養(yǎng)14d 后，模型組大鼠Lee's 指數(shù)高于同時(shí)間點(diǎn)的對(duì)照組。見(jiàn)表1。

喂養(yǎng)21 d 后，隨著喂養(yǎng)時(shí)間繼續(xù)延長(zhǎng)，模型組各時(shí)間點(diǎn)大鼠體重及Lee's 指數(shù)均高于同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組（P＜0.05）；模型組第21、24、27 和30 天Lee's 指數(shù)比較，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=21.070，P=0.000），模型組第27 和30 天Lee's 指數(shù)均高于第21天（P＜0.05）。見(jiàn)表2、3。

2.3 兩組大鼠卵巢指數(shù)及卵巢體積

喂養(yǎng)21 d 后，隨著喂養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，對(duì)照組第21、24、27 和30 天大鼠卵巢指數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=8.641，P=0.001），而模型組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.589，P=0.629）；模型組第27 和30 天大鼠卵巢指數(shù)低于同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組（P＜0.05）（見(jiàn)表4）。喂養(yǎng)21 d 后，模型組第21、24、27 和30 天大鼠的卵巢體積比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3.564，P=0.031），隨著喂養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)呈上升趨勢(shì)，第30 天大鼠的卵巢體積大于第21 和24 天（P＜0.05）。模型組各時(shí)間點(diǎn)大鼠卵巢體積均大于同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（見(jiàn)表5）。

表1 兩組大鼠第1、7 及14 天體重及Lee's 指數(shù)比較 （n =24，±s）

表1 兩組大鼠第1、7 及14 天體重及Lee's 指數(shù)比較 （n =24，±s）

注：Lee's 指數(shù)=÷體長(zhǎng)

組別體重/g Lee's 指數(shù)第1 天 第7 天 第14 天 第1 天 第7 天 第14 天對(duì)照組 181.74±9.59 207.77±11.71 224.73±14.60 3.12±0.14 3.16±0.10 2.93±0.07模型組 183.60±9.50 229.43±9.24 271.18±13.16 3.10±0.10 3.13±0.14 3.15±0.07

表2 兩組大鼠第21、24、27 及30 天的體重比較（n =6，g，±s）

表2 兩組大鼠第21、24、27 及30 天的體重比較（n =6，g，±s）

組別 第21 天 第24 天 第27 天 第30 天對(duì)照組 240.67±25.82 221.00±16.16 263.65±17.70 248.90±9.43模型組 303.30±19.65 300.62±22.51 313.12±17.67 308.37±20.11 t 值 11.460 7.037 5.278 6.193 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000

表3 兩組大鼠第21、24、27 及30 天的Lee's 指數(shù)比較 （n =6，±s）

表3 兩組大鼠第21、24、27 及30 天的Lee's 指數(shù)比較 （n =6，±s）

注：?與第21天比較，P ＜0.05。

組別 第21 天 第24 天 第27 天 第30 天對(duì)照組 3.04±0.10 2.98±0.08 3.16±0.10 3.12±0.03模型組 3.23±0.08 3.28±0.09 3.34±0.09? 3.37±0.11?t 值 6.503 -6.103 2.797 4.268 P 值 0.000 0.000 0.021 0.002

表4 兩組大鼠第21、24、27 及30 天的卵巢指數(shù)比較（n =6，‰，±s）

表4 兩組大鼠第21、24、27 及30 天的卵巢指數(shù)比較（n =6，‰，±s）

組別 第21 天 第24 天 第27 天 第30 天對(duì)照組 0.22±0.03 0.22±0.05 0.29±0.04 0.31±0.03模型組 0.24±0.05 0.23±0.05 0.24±0.02 0.22±0.03 t 值 0.782 0.402 3.271 5.715 P 值 0.452 0.696 0.008 0.000

表5 兩組大鼠第21、24、27 及30 天的卵巢體積比較（n =6，mm3，±s）

表5 兩組大鼠第21、24、27 及30 天的卵巢體積比較（n =6，mm3，±s）

注：?與第30 天比較，P ＜0.05。

組別 第21 天 第24 天 第27 天 第30 天對(duì)照組 39.08±9.09 32.29±11.82 37.80±9.61 60.47±12.79模型組 59.13±13.49? 66.71±12.82? 73.17±17.84 83.63±19.67 t 值 3.018 4.834 4.275 2.896 P 值 0.013 0.001 0.002 0.013

2.4 兩組大鼠卵巢組織形態(tài)及卵泡數(shù)目

肉眼觀察：對(duì)照組大鼠卵巢顏色紅潤(rùn)，大小正常；模型組大鼠卵巢體積增大，外觀顏色蒼白，卵巢表面透明囊狀擴(kuò)張卵泡較多且分布密集。HE 染色后：低倍鏡下可見(jiàn)，對(duì)照組卵巢組織內(nèi)不同發(fā)育階段的卵泡及多個(gè)黃體，偶見(jiàn)極少量的卵泡囊狀擴(kuò)張；模型組卵巢結(jié)構(gòu)紊亂，位于卵巢表面的囊狀擴(kuò)張卵泡數(shù)量較對(duì)照組增多，發(fā)育階段的卵泡及黃體減少，而竇前卵泡和閉鎖卵泡增多；高倍鏡下可見(jiàn)，對(duì)照組大鼠卵巢組織中卵泡結(jié)構(gòu)比較完整，卵泡內(nèi)可見(jiàn)8 或9 層顆粒細(xì)胞層；模型組大鼠卵巢組織中卵泡放射冠及顆粒細(xì)胞層數(shù)減少，甚至消失。見(jiàn)圖1。

兩組大鼠各時(shí)間點(diǎn)的卵巢表面的囊狀擴(kuò)張卵泡數(shù)量比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），模型組多于對(duì)照組。模型組各時(shí)間點(diǎn)的卵泡數(shù)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=1.674，P=0.212）。見(jiàn)表6。

圖1 兩組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)卵巢形態(tài)學(xué)變化 （HE）

表6 兩組大鼠第21、24、27 及30 天卵泡數(shù)量比較（n =6，±s）

表6 兩組大鼠第21、24、27 及30 天卵泡數(shù)量比較（n =6，±s）

組別 第21 天 第24 天 第27 天 第30 天對(duì)照組 18.50±3.31 20.20±0.84 21.00±3.41 22.50±4.81模型組 46.00±7.44 44.75±4.20 42.17±7.14 35.50±7.11 t 值 7.697 11.140 6.555 4.414 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000

2.5 兩組大鼠各時(shí)間點(diǎn)的FBG、FINS、HOMA-IR水平

模型組第21、24、27 和30 天的FBG 比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.975，P=0.055）；兩組大鼠各時(shí)間點(diǎn)的FBG 比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（見(jiàn)表7）。模型組第27 和30 天大鼠的FINS 及HOMA-IR水平較同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；且模型組第27 天的HOMA-IR 高于第21 天，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見(jiàn)表8、9。

表7 兩組大鼠第21、24、27 及30 天FBG 水平（n =6，±s）

表7 兩組大鼠第21、24、27 及30 天FBG 水平（n =6，±s）

組別 第21 天 第24 天 第27 天 第30 天對(duì)照組 5.18±0.50 5.58±0.39 5.67±0.61 5.16±0.41模型組 4.83±0.57 5.40±0.35 5.54±0.91 5.23±0.56 t 值 1.182 0.805 0.044 0.121 P 值 0.262 0.442 0.966 0.906

表8 兩組大鼠第21、24、27 及30 天血清FINS 水平（n =6，±s）

表8 兩組大鼠第21、24、27 及30 天血清FINS 水平（n =6，±s）

注：?與第21 天比較，P ＜0.05。

組別 第21 天 第24 天 第27 天 第30 天對(duì)照組 36.02±3.58 40.50±7.44 35.05±5.13 32.87±8.71模型組 37.71±2.72 39.00±8.38 45.00±1.90? 45.76±3.10?t 值 0.699 0.799 4.081 3.117 P 值 0.507 0.267 0.003 0.014

表9 兩組大鼠第21、24、27 及30 天血清HOMA-IR 水平 （n =6，±s）

表9 兩組大鼠第21、24、27 及30 天血清HOMA-IR 水平 （n =6，±s）

注：?與第21 天比較，P ＜0.05。

組別 第21 天 第24 天 第27 天 第30 天對(duì)照組 8.29±0.83 10.04±1.85 8.68±1.27 7.68±2.04模型組 8.10±0.58 9.36±2.01 11.24±0.33? 10.55±0.80?t 值 0.405 0.500 3.882 2.629 P 值 0.699 0.635 0.005 0.034

2.6 兩組大鼠各時(shí)間點(diǎn)的TG 水平

兩組大鼠各時(shí)間點(diǎn)TG 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），模型組高于同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組；模型組第21、24、27 和30 天TG 水平比較，經(jīng)單因素方差分析，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.037，P=0.990）。見(jiàn)表10。

2.7 兩組大鼠各時(shí)間點(diǎn)血清性激素水平

兩組大鼠各時(shí)間點(diǎn)FSH 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），模型組均低于同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組；模型組第21、24、27 及30 天FSH 水平比較，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=6.605，P=0.002），第24 天模型組大鼠FSH 水平低于第21 天（P＜0.05）（見(jiàn)表11）。兩組大鼠各時(shí)間點(diǎn)LH 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），模型組均高于同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組；模型組第21、24、27 及30 天LH 水平比較，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=11.940，P=0.000），模型組第21 天LH 水平高于其他時(shí)間點(diǎn)（P＜0.05）（見(jiàn)表12）。兩組大鼠各時(shí)間點(diǎn)FSH/LH 比值比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），模型組均高于同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組；模型組第21、24、27 及30 天FSH/LH比值比較，經(jīng)單因素方差分析，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=15.980，P=0.000），模型組第21 天 FSH/LH 比值高于其他時(shí)間點(diǎn)（P＜0.05）（見(jiàn)表13）。兩組大鼠各時(shí)間點(diǎn)T 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），模型組均高于同時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組；模型組第21、24、27 及30天T 水平比較，經(jīng)單因素方差分析，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=0.572，P=0.640）（見(jiàn)表14）。

表10 兩組大鼠第21、24、27 及30 天血清TG 水平（n =6，±s）

表10 兩組大鼠第21、24、27 及30 天血清TG 水平（n =6，±s）

組別 第21 天 第24 天 第27 天 第30 天對(duì)照組 517.69±48.47 530.65±99.95 539.86±40.69 459.47±95.18模型組661.63±130.59 666.17±73.40 682.01±99.22 668.87±98.74 t 值 2.531 3.665 2.662 3.330 P 值 0.029 0.011 0.032 0.010

表11 兩組大鼠第21、24、27 及30 天血清FSH 水平（n =6，±s）

表11 兩組大鼠第21、24、27 及30 天血清FSH 水平（n =6，±s）

注：?與第21 天比較，P ＜0.05。

組別 第21 天 第24 天 第27 天 第30 天對(duì)照組 7.11±2.15 6.57±0.41 7.49±0.85 6.38±1.59模型組 5.84±0.57 4.67±0.59? 5.32±0.72? 4.58±0.47?t 值 1.403 5.576 4.743 3.066 P 值 0.191 0.000 0.001 0.010

表12 兩組大鼠第21、24、27 及30 天血清LH 水平（n =6，±s）

表12 兩組大鼠第21、24、27 及30 天血清LH 水平（n =6，±s）

注：?與第21 天比較，P ＜0.05。

組別 第21 天 第24 天 第27 天 第30 天對(duì)照組 5.91±0.80 5.69±0.55 6.08±0.49 5.77±0.49模型組 13.53±2.62 8.93±1.28? 8.73±2.59? 7.25±0.65?t 值 5.539 4.678 2.466 4.541 P 值 0.000 0.002 0.033 0.001

表13 兩組大鼠第21、24、27 及30 天血清FSH/LH 比值（n =6，±s）

表13 兩組大鼠第21、24、27 及30 天血清FSH/LH 比值（n =6，±s）

注：?與第21 天比較，P ＜0.05。

組別 第21 天 第24 天 第27 天 第30 天對(duì)照組 0.91±0.32 0.87±0.05 0.82±0.11 0.94±0.19模型組 2.34±0.23 1.94±0.25? 1.66±0.21? 1.59±0.18?t 值 8.842 8.434 8.730 6.521 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000

表14 兩組大鼠第21、24、27 及30 天血清T 水平（n =6，±s）

表14 兩組大鼠第21、24、27 及30 天血清T 水平（n =6，±s）

組別 第21 天 第24 天 第27 天 第30 天對(duì)照組 4.38±0.51 4.44±1.46 5.56±1.60 4.17±1.49模型組 8.77±1.24 10.28±1.72 9.18±2.77 9.41±1.44 t 值 6.562 4.899 2.768 6.248 P 值 0.000 0.003 0.019 0.000

3 討論

目前已有多種PCOS-IR 模型復(fù)制方法，但是國(guó)內(nèi)外迄今尚無(wú)一種令人信服、可以復(fù)制PCOS-IR 病理特征的方法，缺乏動(dòng)物模型復(fù)制成功的標(biāo)準(zhǔn)。脫氫表雄酮皮下注射模型復(fù)制法[8]其大鼠模型雖然具有PCOSIR 病理及內(nèi)分泌特征，但持續(xù)外源性注射雄激素與PCOS-IR 模型大鼠自身體內(nèi)高雄激素水平的來(lái)源不易區(qū)別，不適于研究模型大鼠雄激素的變化。丙酸睪丸酮聯(lián)合高脂飼料模型復(fù)制法[8]，本研究前期復(fù)制模型時(shí)發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠卵巢體積變小，鏡下無(wú)明顯多囊樣改變，推測(cè)外源性雄激素可能抑制卵巢功能。來(lái)曲唑配合高脂膳食法誘導(dǎo)PCOS-IR 大鼠模型[9]，本研究前期復(fù)制模型成功[5]，結(jié)果顯示模型組大鼠體重增加，鏡下可見(jiàn)卵巢組織多囊樣改變，血清FSH/LH 比值及T 水平升高，血清FINS、TG 水平及HOMA-IR 亦升高，基本符合PCOS-IR 病理及內(nèi)分泌、代謝紊亂的疾病特征。有文獻(xiàn)報(bào)道[4]來(lái)曲唑聯(lián)合高脂飼料喂養(yǎng)21 d 可成功復(fù)制PCOS-IR 大鼠模型。亦有學(xué)者[10]將模型復(fù)制時(shí)間比較，用科學(xué)方法確定模型復(fù)制時(shí)間更加合理、更加穩(wěn)定，而且便于研究的PCOS-IR 大鼠模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，模型復(fù)制時(shí)間延長(zhǎng)至30 d 的PCOS-IR 大鼠模型更加穩(wěn)定理想；模型復(fù)制27 與30 d 的內(nèi)分泌與代謝改變無(wú)差異。

來(lái)曲唑是一種芳香化酶抑制劑，而芳香化酶是雄激素向雌激素轉(zhuǎn)化過(guò)程中起關(guān)鍵作用的限速酶[11]，一旦卵巢內(nèi)的芳香化酶活性降低則可引起局部雄激素水平升高，因此，來(lái)曲唑可以阻止卵巢內(nèi)雄激素向雌激素的轉(zhuǎn)換，形成高雄激素血癥，進(jìn)而發(fā)展為多囊卵巢[12]。有文獻(xiàn)報(bào)道高脂飼料可誘導(dǎo)下丘腦炎癥反應(yīng)，而下丘腦炎癥因子的高表達(dá)可以導(dǎo)致胰島素和瘦素抵抗，進(jìn)一步引起機(jī)體攝食紊亂和肥胖[13]。肥胖被越來(lái)越多的學(xué)者認(rèn)為是一種低度慢性炎癥狀態(tài)，長(zhǎng)期處于此狀態(tài)下可導(dǎo)致外周胰島素抵抗，從而引起糖脂代謝紊亂[14]。有研究證實(shí)，高胰島素血癥能刺激卵巢合成大量雄激素形成高雄激素血癥，尤其是游離雄激素水平升高，引起IR 的發(fā)生[15]。兩者互相促進(jìn)并形成IR-高胰島素血癥-高雄激素血癥的惡性循環(huán)，共同參與卵巢功能障礙的發(fā)生。因此，來(lái)曲唑聯(lián)合高脂膳食可以誘導(dǎo)出PCOSIR 動(dòng)物模型。

本研究復(fù)制一種穩(wěn)定理想的PCOS-IR 動(dòng)物模型用于基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)，研究結(jié)果表明，來(lái)曲唑聯(lián)合高脂飼料分別喂養(yǎng)第21、24、27 及30 天后，模型組大鼠體重及Lee's 指數(shù)均高于同期對(duì)照組。肉眼可見(jiàn)模型組各時(shí)間點(diǎn)大鼠卵巢體積增大，卵巢表面可見(jiàn)較多且密集的透明囊狀擴(kuò)張卵泡，鏡下觀察卵巢呈多囊樣改變，模型組大鼠卵巢囊性卵泡個(gè)數(shù)多于同期對(duì)照組。模型組大鼠血清TG 水平、FSH/LH 比值及T 水平均升高，但血清FINS 及HOMA-IR 水平直至模型復(fù)制第27 及30 天才升高，符合PCOS-IR 病程長(zhǎng)久、病情復(fù)雜的病理特征及內(nèi)分泌、代謝紊亂狀態(tài)。

來(lái)曲唑聯(lián)合高脂膳食連續(xù)喂養(yǎng)27 天，可成功復(fù)制符合PCOS-IR 患者病理特征及內(nèi)分泌、代謝紊亂的大鼠模型，為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。

致謝：感謝本人的導(dǎo)師許昕教授長(zhǎng)期以來(lái)給予悉心指導(dǎo)、深切關(guān)懷和鼎力幫助；感謝北京市中醫(yī)研究所提供實(shí)驗(yàn)室平臺(tái)及對(duì)本實(shí)驗(yàn)部分的支持和指導(dǎo)。