八楞麻飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

蔣健　曹玉　王貞媛　蔣小文

【摘 要】 目的：制定八楞麻飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。方法：參照《中國藥典》2015年版相關(guān)方法，對八楞麻的性狀、顯微特征、薄層色譜、水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物進(jìn)行研究;采用高效液相色譜法測定槲皮素含量。結(jié)果：薄層色譜斑點(diǎn)清晰，分離好，專屬性強(qiáng);八楞麻水分不得過14.0%，總灰分不得過10.0%，酸不溶性灰分不得過1.5%，浸出物不得少于6.0%，槲皮素平均含量為0.01805%。結(jié)論：根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果建立了八楞麻飲片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，可用于八楞麻的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】 八楞麻;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);高效液相色譜法;槲皮素

【中圖分類號(hào)】R282 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2020）23-0040-04

Establishing Quality Standard of Saussureae Japonicae Herba

JIANG Jian CAO Yu WANG Zhenyuan JIANG Xiaowen

Nanjing Institute for Food and Drug Control， Nanjing 211122， China

Abstract：Objective To establish the quality standard of Saussureae Japonicae Herba.Methods Identification through microscope and TLC（thin-layer chromatography）， and determination of moisture， total ash， acid-insoluble ash， extract and content of quercetin were conducted to investigate the quality.Results TLC spots were clear， well-separated without interference and had a strong specificity. The moisture of Saussureae Japonicae Herba should be less than 14.0%， the total ash should be less than 10.0%， the acid-insoluble ash should be less than 1.5%， the alcoholic extract should be more than 6.0%. The average content of quercetin determined by HPLC（high performance liquid chromatography） was 0.01805%.Conclusion The quality standard of Saussureae Japonicae Herba was conformed to the state requirements of traditional Chinese medicinal examination， it can be used for quality control of Saussureae Japonicae Herba.

Keywords：Saussureae Japonicae Herba; Quality Standard; HPLC; Quercetin

八楞木又名八楞麻，青竹標(biāo)，八面風(fēng)，三棱草，為菊科植物風(fēng)毛菊Saussurea japonica （Thunb.） DC. 的干燥地上部分，生于海拔1000～1800m的山坡草地、山谷草地或山腳路旁。分布于全國各地[1]。八楞麻飲片收載于《江蘇省中藥飲片炮制規(guī)范》2002年版，性辛、苦，平，具有祛風(fēng)活血功效，用于風(fēng)濕痹痛、跌撲損傷、麻風(fēng)[2]。原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有性狀鑒別，無法有效控制飲片質(zhì)量。本實(shí)驗(yàn)建立八楞麻飲片的性狀、顯微鑒別、薄層色譜鑒別、水分、總灰分、酸不溶性灰分、浸出物方法，研究了含量測定方法，為進(jìn)一步提高飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 儀器和試藥

1.1 儀器 Olympus DP-12 顯微數(shù)碼攝影系統(tǒng);CAMAG REPROSTAR 3 薄層成像系統(tǒng)（瑞士CAMAG公司）;KQ-250B 型超聲清洗機(jī)（昆山超聲儀器有限公司）;SHIMADZU LC-20AB 高效液相色譜儀;DiKMA Silversil C18（150mm×4.6mm，5μm）色譜柱;HH-4 數(shù)顯恒溫水浴鍋（國華電器有限公司）;XS205 型天平（Mettler ToleDo公司）

1.2 試藥 默克產(chǎn)硅膠G預(yù)制薄層板、青島海洋化工廠產(chǎn)硅膠G預(yù)制薄層板;八楞麻對照藥材（自制）;槲皮素對照品（批號(hào)：100081-201610，含量99.1%，105℃干燥2 h后使用。）購自中國食品藥品檢定研究院;甲醇為色譜純，水為超純水，其它試劑均為分析純。

八楞麻飲片均購自亳州藥材市場，來源于廣西、湖北，經(jīng)江蘇省中藥飲片炮制規(guī)范修訂專家組鑒定為風(fēng)毛菊Saussurea japonica （Thunb.） DC. 干燥地上部分。見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 藥材性狀 本品為不規(guī)則的短段。莖、葉混合。莖圓柱形，具縱棱，有疏生腺點(diǎn)及細(xì)毛，切面類白色，有髓;葉多卷縮破碎，暗綠色，兩面有腺點(diǎn)及細(xì)毛。氣微，味苦。

2.2 顯微特征 本品粉末棕色。非腺毛多見，常斷裂，單細(xì)胞或多細(xì)胞，表面光滑或微波狀，長約50～300μm。導(dǎo)管多為螺紋、網(wǎng)紋、梯紋及具緣紋孔導(dǎo)管。氣孔不定式。分泌細(xì)胞含油滴。葉薄壁細(xì)胞含草酸鈣簇晶，直徑10～20 μm。纖維壁厚，多斷裂，有點(diǎn)狀紋孔。顯微如圖1所示。

2.3 薄層色譜鑒別 取本品粉末1g，加甲醇10mL，超聲處理30min，濾過，取濾液作為供試品溶液。另取八楞麻對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法（《中國藥典》2015年版四部 通則0502）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-丁酮（4∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。噴以10%硫酸乙醇溶液，加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，置日光及紫外光燈（365nm）下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)和熒光斑點(diǎn)。薄層色譜如圖2所示。

2.4 水分測定照《中國藥典》2015年版四部（通則0832水分測定法 第二法），測定五批樣品，平均測定值為10.09%。根據(jù)《中國藥典》2015年版四部（通則0212 藥材和飲片檢定通則），除另有規(guī)定外，飲片水分通常不得過13%，故規(guī)定水分不得過13.0%。結(jié)果見表2。

2.5 灰分測定 照《中國藥典》2015年版四部（通則2302 灰分測定法），依法測定五批樣品，平均測定值為7.26%。以平均測定值的120%設(shè)限，為8.7%，故規(guī)定總灰分不得過9.0%。結(jié)果見表2。

酸不溶性灰分? 照《中國藥典》2015年版四部（通則2302 灰分測定），法依法測定五批樣品，平均測定值為0.71%，由于數(shù)據(jù)離散度大，故規(guī)定酸不溶性灰分不得過1.5%。結(jié)果見表2。

2.6 浸出物測定 照《中國藥典》2015年版四部（通則2201浸出物測定法），采用熱浸法，以75%乙醇為溶劑，測定浸出物。測定五批樣品，平均測定值為9.53%，由于數(shù)據(jù)離散度大，以平均測定值的70%設(shè)限，故規(guī)定浸出物不得少于6.0%。結(jié)果見表2。

2.7 槲皮素含量測定

2.7.1 色譜條件 色譜柱：DiKMA Silversil C18（150mm×4.6mm，5μm）;流動(dòng)相：甲醇-0.4%磷酸（40∶60）;流速：1.0mL;柱溫：35℃;檢測波長：370nm;進(jìn)樣量：10μL。

2.7.2 對照品溶液的制備 精密稱取槲皮素對照品10.20mg，置100mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品貯備液。

2.7.3 供試品溶液的制備 精密稱取本品粉末（過二號(hào)篩）2g，置錐形瓶中，精密加入甲醇25mL，加熱回流30min，放冷，濾過，取續(xù)濾液10mL，置錐形瓶中，加鹽酸溶液（15→37）5mL，搖勻，置90℃水浴中加熱水解30min，立即冷卻，轉(zhuǎn)移至25mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.7.4 線性關(guān)系考察 精密吸取2.7.2項(xiàng)下對照品貯備液適量，制成槲皮素濃度分別為1.011、2.022、5.054、10.11、20.22、50.54、101.1μg·mL-1的對照品溶液，分別進(jìn)樣10μL，記錄峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程為：Y=4.289×104X-1.200×104，r=1.000。結(jié)果表明，槲皮素對照品濃度在1.011～101.1μg·mL-1范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.7.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取2.7.4項(xiàng)下濃度為10.11μg·mL-1的對照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，對照品溶液峰面積的RSD為0.59%，表明精密度良好。

2.7.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批供試品（編號(hào)05）溶液，分別于0、3、6、12、24h進(jìn)樣10μL，按2.7.1項(xiàng)下色譜條件測定，峰面積的RSD為0.67%。表明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批供試品（編號(hào)05），按2.7.3供試品溶液制備方法平行制備6份，按2.7.1項(xiàng)下色譜條件測定，計(jì)算槲皮素的含量，RSD為0.55%，表明重復(fù)性良好。

2.7.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的八楞麻樣品（編號(hào)05）9份，每份1.0g，置錐形瓶中，按低、中、高濃度分別精密加入對照品貯備液1.7mL、3.4mL、5.1mL，精密補(bǔ)足甲醇至25mL，照2.7.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.7.1項(xiàng)下色譜條件測定 計(jì)算加樣回收率，結(jié)果平均回收率為98.14%，RSD為1.61%。結(jié)果見表3。

2.7.9 樣品測定 按2.7.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按2.7.1項(xiàng)下色譜條件，對五批樣品進(jìn)行測定，結(jié)果按干燥品計(jì)算，槲皮素含量分別為0.02337%、0.003590%、0.01436%、0.01446%、0.03448%，平均值為0.01805%。由于樣品批次少，含量測定結(jié)果離散性較大，故暫未收入標(biāo)準(zhǔn)，本試驗(yàn)為含量測定進(jìn)一步研究提供參考。圖譜如圖3所示，結(jié)果見表4。

3 討論

3.1 薄層色譜鑒別 在本實(shí)驗(yàn)研究中，對不同溶劑[甲醇、石油醚（60～90℃）、環(huán)己烷、乙酸乙酯]提取進(jìn)行考察，結(jié)果顯示甲醇提取簡單方便，效果佳。經(jīng)考察，供試品溶液在24h內(nèi)點(diǎn)樣，色譜圖斑點(diǎn)清晰，重現(xiàn)性好。對不同薄層板（默克產(chǎn)硅膠G預(yù)制薄層板、青島海洋化工廠產(chǎn)硅膠G預(yù)制薄層板）、不同展開系統(tǒng)[參考其他菊科來源飲片：環(huán)己烷-甲酸乙酯-甲酸（15∶5∶1）上層液、三氯甲烷-環(huán)己烷（5∶1）（木香）[3]62;環(huán)己烷-丁酮（4∶1）（漏蘆）[3]370;石油醚（60～90℃）-丙酮（9∶2）（蒼術(shù)）[3]161]進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明，本方法展開劑配制簡單方便，薄層色譜斑點(diǎn)清晰豐富、分離效果好。本實(shí)驗(yàn)還針對不同溫、濕度（t：4℃，RH：45%;t：30℃，RH：45%;t：18℃，RH：18%;t：18℃，RH：72%）等薄層條件進(jìn)行了考察，結(jié)果表明，本薄層色譜實(shí)驗(yàn)?zāi)陀眯院谩?/p>

3.2 浸出物測定 分別采用不同浸出方法（冷浸法、熱浸法）進(jìn)行比較，不同浸出溶劑（水、稀乙醇、75%乙醇、乙醇）進(jìn)行比較，結(jié)果采用熱浸法，以75%乙醇為溶劑，測定浸出物。測定5批樣品，平均測定值為9.53%，由于數(shù)據(jù)離散度大，以平均測定值的70%設(shè)限，故規(guī)定浸出物不得少于6.0%。

3.3 含量測定 八楞麻地上部分含揮發(fā)油、內(nèi)酯、黃酮類、三萜類、木脂素等，具有抗炎、抗變作用[4]。八楞麻飲片用法為水煎（內(nèi)服：煎湯，9～15 g;外用適量，煎水洗患處）[2]，因此考慮活性成分為水煎后較穩(wěn)定的成分，故擬定黃酮類為含量測定指標(biāo)。八楞麻含槲皮素-3-O-（6″-巴豆油?；?β-D-葡萄糖苷，山柰酚-3-O-（6″-巴豆油?；?β-D-葡萄糖苷，山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷，槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷等黃酮類[4]，甲醇提取物經(jīng)酸水解后可得槲皮素和山柰素，經(jīng)試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)槲皮素含量較高，可用于含量測定。槲皮素對照品紫外光譜顯示最大吸收為370nm，因此確定吸收波長為370nm。參考《中國藥典》2015年版一部紅花[3]151、金錢草[3]219含量測定項(xiàng)下槲皮素、山柰素提取方法，結(jié)果加鹽酸溶液（15→37）5mL水解效果更優(yōu)，因此確定本試驗(yàn)提取方法。同時(shí)考察了甲醇-水（40∶60）和甲醇-0.4%磷酸（40∶60）兩個(gè)系統(tǒng)，二者差別不大，但甲醇-0.4%磷酸（40∶60）系統(tǒng)下槲皮素峰響應(yīng)值更高，故以此為流動(dòng)相。

4 結(jié)論

八楞麻為江蘇地區(qū)使用藥材，收載于《江蘇省中藥飲片炮制規(guī)范》2002年版，原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有性狀鑒別。本實(shí)驗(yàn)參照《中國藥典》2015年版相關(guān)方法，對五批八楞麻飲片開展了性狀、顯微鑒別、薄層色譜鑒別、水分檢查、灰分檢查、浸出物測定等研究，結(jié)果表明該試驗(yàn)簡便高效，重復(fù)性好，可操作性強(qiáng)，提高后的標(biāo)準(zhǔn)可用于八楞麻飲片的質(zhì)量控制。本實(shí)驗(yàn)建立了高效液相色譜法測定八楞麻中槲皮素含量的方法，為八楞麻質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的進(jìn)一步提高提供一定的科學(xué)依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2020-06-07 編輯：劉斌）

作者簡介：蔣?。?982- ），女，漢族，本科，主管中藥師，研究方向?yàn)橹兴幏治?。E-mail：jiangjane1982@sina.com