維藥多脂大戟治療白內(nèi)障活性部位化學(xué)成分研究

廖東波　楊帆　朱智英　范淼崟　張亞梅

【摘 要】 目的：研究多脂大戟治療白內(nèi)障活性部位化學(xué)成分。方法：利用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜、高效液相色譜等分離技術(shù)，對多脂大戟樹脂抗白內(nèi)障活性部位進(jìn)行分離純化，并通過1H-、13C-NMR等波譜技術(shù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。結(jié)果：共鑒定6個萜類化合物，分別為eburicol （1）、羊毛甾醇（2）、ingol 7，8，12-triacetate 3-phenylacetate （3）、ingol 7，8，12-triacetate 3-（4-methoxyphenyl） acetate（4）、12-O-Acetyl-8-O-tigloylingol （5）、3，12-di-O-acetylingol （6）。結(jié)論：化合物1、4、6首次從本種分離得到。

【關(guān)鍵詞】 多脂大戟;大戟屬;白內(nèi)障;物質(zhì)基礎(chǔ)

【中圖分類號】R282.6 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2020）23-0032-04

Study on Material Basis of Anti-cataractogesis Activity of Euphorbia resinifera

LIAO Dongbo YANG Fan ZHU Zhiying FAN Miaoyin ZHANG Yamei*

Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine， Nanchang 330004，China

Abstract：Objective To study the material basis of anti-cataractogesis activity of Euphorbia resinifera. Methods The material basis of anti-cataractogesis activity of Euphorbia resinifera were isolated by different column chromatographic techniques. Their structures were identified by a comprehensive analysis of the spectroscopic data. Results six compounds were isolated from Euphorbia resinifera and identified as eburicol （1）， lanosterol （2）、ingol 7，8，12-triacetate 3-phenylacetate （3）、ingol 7，8，12-triacetate 3-（4-methoxyphenyl）acetate （4）、3-O-acetyl-8-O-tigloylingol （5）、8-O-tigloylingol（6）. Conclusion These compounds may relate to the anti-cataractogesis activity of Euphorbia resinifera.

Keywords：Euphorbia resinifera;Euphorbia;Material Basis;Anti-cataractogesis

多脂大戟Euphorbia resinifera Berg.隸屬于大戟科Euphorbiaceae，其樹脂狀分泌物大戟脂（Euphorbium）即維藥“排日非云”，具有散寒止痛、燥濕退腫、強筋健骨、消除白內(nèi)障等功效，主治濕寒性或黏液質(zhì)性疾病，如癱瘓、關(guān)節(jié)疼痛、腹水、白內(nèi)障等疾病[1-2]。課題組前期通過硒性白內(nèi)障大鼠動物模型篩選多脂大戟治療白內(nèi)障活性部位，發(fā)現(xiàn)大戟脂95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位具有治療白內(nèi)障活性?；诖耍緦嶒瀸Υ瞬课贿M(jìn)行化學(xué)成分研究，以探明多脂大戟治療白內(nèi)障的物質(zhì)基礎(chǔ)。

1 儀器與材料

1.1 儀器 Shimazu LC-6AD制備液相色譜儀，Buchi C605中壓色譜儀，Agilent 1200液相色譜儀，Buchi R-220SE旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，TripleTOF5600 質(zhì)譜儀 （ESI-MS），Bruker AVANCE III 600 核磁共振波譜儀。

1.2 材料 青島海洋硅膠G （100～200、200～300目），Sephadex LH-20凝膠，反相硅膠C18（50μ），MCI HP-20，色譜用甲醇、乙腈，其余試劑均為分析純。多脂大戟樹脂購于新疆和田藥材市場，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)鐘國躍研究員鑒定為大戟科 Euphorbiaceae 植物多脂大戟E. resinifera的樹脂狀分泌物。標(biāo)本現(xiàn)存于江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源與民族藥研究中心標(biāo)本館。憑證標(biāo)本（20180804）存放于江西中醫(yī)藥大學(xué)標(biāo)本館。

2 提取分離

多脂大戟樹脂活性部位（95%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取部位）62.5g，加甲醇溶解后，通過硅膠色譜柱進(jìn)行初步分離，依次用石油醚-丙酮（50∶1，F(xiàn)i1），石油醚-丙酮（30∶1，F(xiàn)i2）、石油醚-丙酮（15∶1，F(xiàn)i3），石油醚-丙酮（5∶1，F(xiàn)i4）、石油醚-丙酮（1∶1，F(xiàn)i5）、乙酸乙酯（Fi6）梯度洗脫，甲醇沖柱（Fi7）?；厥杖軇┑玫?個洗脫部分（Fi1-Fi7）。薄層色譜顯色石油醚-丙酮（30∶1），即Fi2部分化合物多，且與其它組分重疊斑點較少。 故將其進(jìn)一步通過MCI柱層析、凝膠柱層析、中壓反相硅膠柱層析、制備反相硅膠柱層析分離，最終得到6個化合物。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

各化合物通過TLC、HPLC、香草醛濃硫酸顯色、UV、以及MS、NMR等方法確定了結(jié)構(gòu)。

化合物1 （246.9mg）： 白色粉末。HR-ESI-MS：分子量440，分子式C31H52O。1H-NMR （600 MHz， CDCl3） δ： 4.73 （1H， brs， H-28α）， 4.68 （1H， brs， H-28β）， 3.23 （1H， m， H-3）， 1.02 （3H， d，J= 7.1 Hz， H-26）， 1.01 （3H， d， J=7.1 Hz， H-27）， 0.99 （3H， s， H-29）， 0.94 （3H， s， H-19）， 0.96 （3H， d，J= 6.3 Hz， H-21）， 0.86 （6H， s， H-30， 31）， 0.74（3H， s， H-18）;13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 35.5 （C-1）， 27.6 （C-2）， 76.3 （C-3）， 39.2 （C-4）， 50.8 （C-5）， 17.6 （C-6）， 28.1 （C-7）， 133.5 （C-8）， 134.3 （C-9）， 36.6 （C-10）， 20.1 （C-11）， 25.7 （C-12）， 31.2 （C-13），49.6 （C-14）， 30.9 （C-15）， 30.7 （C-16）， 50.1 （C-17）， 15.6 （C-18）， 18.3 （C-19）， 34.9 （C-20）， 18.8 （C-21）， 33.9 （C-22）， 31.2 （C-23）， 157.1 （C-24）， 31.3 （C-25）， 21.6 （C-26）， 22.1 （C-27）， 106.1 （C-28）， 27.9 （C-29）， 15.4 （C-30）， 24.5 （C-31）上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致[3]，故鑒定為eburicol。

化合物2（611.2mg）：白色粉末。HR-ESI-MS：分子量426，分子式C30H50O。1H-NMR （600 MHz， CDCl3） δ： 0.75 （3H， s， CH3-30）， 0.79 （3H， s， CH3-18）， 0.84 （3H， d，J =6.5Hz， CH3-21）， 0.87 （3H， s，CH3-28） ， 0.91 （3H， s， CH3-29） ， 1.59 （3H， s， CH3-26） ， 1.68 （3H， s， H-27）， 3.22 （1H， dd，J= 4.5， 2.3 Hz， H-3）， 5.09 （1H， m， H-24）;13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 35.9 （C-1）， 28.2 （C-2）， 79.0 （C-3）， 38.9 （C-4）， 50.1 （C-5）， 20.1 （C-6）， 28.2 （C-7）， 134.0 （C-8）， 133.4 （C-9）， 37.4 （C-10）， 28.2 （C-11）， 25.8 （C-12）， 44.1 （C-13），49.6 （C-14）， 30.9 （C-15）， 29.9 （C-16）， 50.0 （C-17）， 15.6 （C-18）， 18.7 （C-19）， 35.0 （C-20）， 18.8 （C-21）， 35.3 （C-22）， 24.8 （C-23）， 125.4 （C-24）， 130.8 （C-25）， 24.7 （C-26）， 17.7 （C-27）， 24.4 （C-28）， 27.8 （C-29）， 15.6 （C-30）。上述數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致[4]，故鑒定為羊毛甾醇。

化合物3（52.2mg）：白色粉末。 HR-ESI-MS：分子量610，分子式C34H42O10。1H-NMR （600 MHz， CHCl3） δ： 2.78 （1H， dd，J= 14.8、9.0 Hz， H-1α）， 1.69 （1H， d， J=14.8 Hz， H-1β）， 2.51 （1H， m， H-2），5.15 （1H， brs， H-3）， 5.39 （1H， brs， H-5）， 5.12 （1H， d，J=1.6 Hz， H-7）， 4.52 （1H， dd，J= 10.4、1.6 Hz， H-8）， 1.09 （1H， dd，J=10.4， 9.3Hz， H-9）， 1.01 （1H， m， H-11）， 4.82 （1H， dd，J= 10.7、3.8 Hz， H-12）， 2.90 （1H， qd，J= 7.4、3.8 Hz， H-13）， 0.92 （3H， d，J= 7.4 Hz， H-16）， 2.05 （3H， 3， H-17）， 1.04 （3H， s， H-18）， 0.82 （3H， s， H-19）， 1.04 （3H， d，J= 7.0 Hz， H-20）， 3.72 （2H， br， H-2′）， 7.31 （1H， m， H-4′） ， 7.31 （1H， m，J= 8.6 Hz， H-5′）， 7.31 （1H， m， H-7′）， 7.31 （1H， d，J= 8.6 Hz， H-8′） ， 2.09 （3H， s， COCH3）， 2.05 （3H， s， COCH3）， 1.97 （3H， s，COCH3）。13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 31.4 （C-1）， 29.5 （C-2）， 76.3 （C-3）， 73.4（C-4）， 117.1 （C-5）， 139.3 （C-6）， 76.9 （C-7）， 71.1 （C-8）， 24.7 （C-9）， 19.2 （C-10）， 30.6 （C-11）， 70.6 （C-12） ， 43.0 （C-13）， 207.9（C-14）， 71.5 （C-15）， 16.9 （C-16）， 17.5 （C-17）， 29.1 （C-18）， 16.1 （C-19）， 13.4 （C-20）， 170.3 （C-1′）， 41.5 （C-2′）， 133.8 （C-3′）， 129.3 （C-4′）， 128.6 （C-5′）， 127.4 （C-6′）， 128.6 （C-7′）， 129.3 （C-8′）， 170.8 （COCH3）， 170.3（COCH3），170.4（COCH3），21.0 （COCH3）， 20.9 （COCH3）， 20.6 （COCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致[5]，確定為ingol 7，8，12-triacetate-3-phenylacetate。

化合物4（30.4mg）：白色粉末。 HR-ESI-MS：分子量 640，分子式C35H45O11。 1H-NMR （600 MHz， CHCl3） δ： 2.78 （1H， dd，J= 15.0、9.0 Hz， H-1α）， 1.68 （1H， d，J=15.0Hz， H-1β）， 2.51 （1H， m， H-2），5.16 （1H， d，J= 8.6 Hz， H-3）， 5.40 （1H， brs， H-5）， 5.14（1H， d，J=1.6 Hz， H-7）， 4.54 （1H， dd，J= 10.6、1.6 Hz， H-8）， 1.10 （1H， dd，J=10.6、9.1Hz， H-9）， 1.04 （1H， m， H-11）， 4.83 （1H， dd，J= 10.6、4.0 Hz， H-12）， 2.89 （1H， qd，J= 7.3、4.0 Hz， H-13）， 0.92 （3H， d，J= 7.3 Hz， H-16）， 2.06 （3H， 3， H-17）， 1.04 （3H， s， H-18）， 0.82 （3H， s， H-19）， 1.05 （3H，J=7.0Hz， H-20）， 3.80 （3H， s， OCH3）， 3.67 （2H， brs， H-2′）， 7.20 （1H， m， H-4′） ， 6.85 （1H， m， H-5′）， 6.85 （1H， m， H-7′）， 7.20 （1H， m， H-8′） ， 2.06 （3H， s， COCH3）， 2.09 （3H， s， COCH3）， 1.97 （3H， s，COCH3）。13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 31.5 （C-1）， 29.5 （C-2）， 76.9 （C-3）， 73.4（C-4）， 117.1 （C-5）， 139.4 （C-6）， 76.9 （C-7）， 71.5 （C-8）， 24.6 （C-9）， 19.3 （C-10）， 30.6 （C-11）， 70.6 （C-12） ， 43.0 （C-13）， 207.8 （C-14）， 71.1 （C-15）， 16.9 （C-16）， 17.4 （C-17）， 29.1 （C-18）， 16.0 （C-19）， 13.4 （C-20）， 170.4 （C-1′）， 40.6 （C-2′）， 113.9 （C-3′）， 130.4 （C-4′）， 125.7 （C-5′）， 158.4 （C-6′）， 125.7 （C-7′）， 130.4 （C-8′）， 55.4 （-OCH3）， 170.6（COCH3）， 20.6（COCH3）， 170.5 （COCH3）， 20.9 （COCH3）， 170.3（COCH3）， 21.0（COCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致[6]，確定為ingol 7，8，12-triacetate 3-（4-methoxyphenyl）acetate。

化合物5（21.1mg）：白色粉末。 HR-ESI-MS：分子量 490，分子式C27H38O8。 1H-NMR （600 MHz， CHCl3） δ： 1.64 （1H， dd，J=14.9、1.9 Hz， H-1β）， 2.76 （1H， dd，J=14.9、9.0 Hz， H-1α）， 2.40 （1H， m， H-2），4.36 （1H， d，J= 8.2 Hz， H-3）， 5.87 （1H， brs， H-5）， 4.28 （1H， brs， H-7）， 4.57 （1H， dd，J= 10.7， 1.4 Hz， H-8）， 1.43 （1H， dd，J= 10.7， 9.5 Hz， H-9）， 1.10 （1H， dd，J= 11.0， 9.5 Hz， H-11）， 4.87 （1H， dd，J=11.0， 3.9 Hz， H-12）， 2.92 （1H， dq，J=3.9， 7.3 Hz， H-13）， 1.07 （3H， d，J= 7.6 Hz， H-16）， 2.09 （3H， brs， H-17）， 1.09 （3H， s， H-18）， 0.82 （3H， s， H-19）， 1.04 （3H， d，J= 7.3 Hz， H-20）， 2.07（3H， s， OCH3）， 6.91 （1H， qq，J=6.0， 1.2 Hz， H-3′）， 1.81 （3H， dq，J=6.0， 1.6 Hz， H-4′） ， 1.84 （3H， dq，J=1.6， 1.6 Hz， H-5′）。13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 31.8 （C-1）， 29.1 （C-2）， 76.1（C-3）， 74.3（C-4）， 117.1 （C-5）， 141.7 （C-6）， 76.4 （C-7）， 76.3 （C-8）， 23.8 （C-9）， 19.1 （C-10）， 31.6 （C-11）， 70.9 （C-12） ， 43.2 （C-13）， 207.9 （C-14）， 72.8 （C-15）， 16.3 （C-16）， 17.5 （C-17）， 29.2 （C-18）， 16.3 （C-19）， 13.4 （C-20）， 170.7 （OCOCH3）， 21.0 （COCH3），167.7 （C-1′）， 138.2 （C-2′）， 128.7 （C-3′）， 12.0 （C-4′）， 14.5 （C-5′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致[7]，確定為12-O-acetyl-8-O-tigloylingol 。

化合物6（47.5mg）：白色固體。HR-ESI-MS：分子量450，分子式C24H34O8; 1H-NMR （600 MHz，? CDCl3） δ： 2.82 （1H， dd，J= 15.0、9.3 Hz， H-1α）， 1.66 （1H， d，J= 15.0， 1.9 Hz， H-1β）， 2.58 （1H， m， H-2），5.21 （1H， d，J= 8.4 Hz， H-3）， 5.75 （1H， s， H-5）， 4.21 （1H， s， H-7）， 3.46 （1H， dd，J= 10.3、1.9 Hz， H-8）， 1.25 （1H， m， H-9）， 1.06 （1H， m，? H-11）， 4.85 （1H， dd，J= 11.0、3.9 Hz， H-12）， 2.93 （1H， m， H-13）， 0.90 （3H， d，J= 7.4 Hz， H-16）， 1.97 （3H， s， H-17）， 1.09 （3H， s， H-18）， 1.08 （3H， s， H-19）， 1.04 （3H， d，J= 7.3 Hz， H-20）， 2.10 （6H， s， C12OCOCH3， C3OCOCH3）。13C NMR （150 MHz， CDCl3） δ： 31.7 （C-1）， 29.6 （C-2）， 77.7（C-3）， 71.3 （C-4）， 116.6 （C-5）， 141.7 （C-6）， 78.2 （C-7）， 71.5 （C-8）， 27.5（C-9）， 18.4 （C-10）， 31.0 （C-11）， 70.9 （C-12） ， 43.1 （C-13）， 207.7 （C-14）， 73.9 （C-15）， 17.0 （C-16）， 17.9 （C-17）， 29.4 （C-18）， 16.5 （C-19）， 13.4 （C-20）， 20.8 （C3OCOCH3）， 21.1 （C12OCOCH3）， 170.9 （C3OCOCH3）， 17.07 （C12OCOCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道一致[8]，確定為3，12-di-O-acetylingol。

4 結(jié) 論

維藥“排日非云”在當(dāng)?shù)孛耖g用于治療白內(nèi)障，但尚未見有關(guān)其清除白內(nèi)障的藥理和化學(xué)研究報道。本實驗前期通過硒性白內(nèi)障大鼠動物模型篩選出多脂大戟樹脂治療白內(nèi)障的活性部位，通過進(jìn)一步分離得到6個單體化合物， 其中羊毛甾醇及其類似物eburicol 為主要成分。研究表明，羊毛甾醇可以降低兔白內(nèi)障晶狀體白內(nèi)障嚴(yán)重程度、提高透明度，并在體內(nèi)試驗中減輕了狗白內(nèi)障嚴(yán)重程度[9]。據(jù)此，初步推斷維藥“排日非云”用于治療白內(nèi)障可能與所含大量的羊毛甾醇及類似物相關(guān)。

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（收稿日期：2020-06-05 編輯：劉斌）

基金項目：江西省衛(wèi)生計生委中醫(yī)藥科研課題 （2017A300）。

作者簡介：廖東波（1994-），男，漢族，碩士研究生在讀，研究方向為中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。 E-mail：2473776179@qq.com

通信作者：張亞梅（1982-），女，漢族，博士，副教授，研究方向為中藥資源與民族藥開發(fā)利用研究。E-mail：yameizhang01@126.com