p16在宮頸上皮內(nèi)瘤變診斷中的分流作用

李海寧，龔愛紅，郭珊珊，李 妍

宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN)為宮頸癌前病變，及時和精準診治對其轉(zhuǎn)歸和預(yù)防發(fā)展為宮頸癌具有重要意義。只有盡早對CIN進行準確分級，且提出合理化管理，才能真正降低宮頸癌的發(fā)病率和病死率[1-3]。病理診斷是CIN診斷和分級的金標準[4]，有關(guān)研究報道表明在不同的病理學(xué)醫(yī)師之間高級別CIN診斷的可重復(fù)性較好，低級別CIN的可重復(fù)性較差[4-6]。因此，尋找一種鑒別不同級別宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變的方法用于分級診斷是十分重要的。目前，通過分子標志物檢測對腫瘤進行診斷是國內(nèi)外的研究熱點，有關(guān)文獻報道[7-8]p16基因在宮頸病變進展過程中是一個較有價值的標志物。本研究旨在通過檢測p16蛋白表達以探討其在宮頸病變中的輔助診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料：收集2017年5月-2019年7月期間寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院經(jīng)宮頸活檢、宮頸錐切確診為SIL的宮頸上皮組織石蠟包埋標本共118例，其中CIN Ⅰ 43例，年齡19～69(45.67±11.22)歲；CIN Ⅱ 27例，年齡24～63(41.78±11.95)歲；CIN Ⅲ 48例，年齡21～65(45.29±11.30)歲。因婦科良性疾病行全子宮切除的正常宮頸組織25例，年齡45～69(53.68±6.61)歲。所有患者術(shù)前均未接受激素治療，經(jīng)兩位中級以上職稱病理學(xué)專科醫(yī)生確診。

1.2 試驗方法

1.2.1 p16蛋白檢測方法：采用免疫組化SP法檢測p16蛋白的表達。具體步驟：宮頸組織石蠟標本切片→65℃烘烤、脫蠟、水化→3%去離子水去除內(nèi)源性過氧化物酶→檸檬酸高壓熱修復(fù)抗原→用兔抗人p16免疫組化試劑盒，SP法行免疫組化染色，嚴格按照試劑盒說明進行實驗操作。采用光學(xué)顯微鏡觀察不同宮頸病變組織中p16蛋白的表達情況，采用雙盲法對試驗結(jié)果進行半定量評分。PBS代替一抗作為陰性對照。該檢測由本院病理科免疫組織化學(xué)檢測實驗室完成。

1.2.2 試驗指標：p16蛋白在不同程度宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變宮頸組織中的表達情況。

2 結(jié)果

在不同子宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變宮頸組織中，p16蛋白陽性表達率明顯不同(χ2=110.758，P<0.05)。p16蛋白在正常宮頸組織中不表達，在CIN Ⅰ級中p16蛋白的表達率為13.95%(6/43)，CIN Ⅱ級為92.59%(25/27),CIN Ⅲ級為97.92%(47/48)，CIN Ⅱ和CIN Ⅲ組中p16蛋白陽性表達率明顯高于CIN I組和對照組(P<0.05)。由此可以看出，p16蛋白的陽性表達率隨著宮頸病變嚴重程度的增加而升高，見表1。

表1 不同宮頸病變組織中p16陽性、p16陰性表達[n(%)]

3 討論

宮頸上皮內(nèi)瘤變是一組與宮頸浸潤癌密切相關(guān)的子宮頸病變，大部分CIN I級為自限性疾病，但高級別鱗狀上皮內(nèi)病變(CIN Ⅱ和CIN Ⅲ)具有癌變潛能，早期篩查和診斷能夠預(yù)防其發(fā)展至宮頸癌[7-9]。眾所周知，癌變的機制是多種癌基因和抑癌基因參與的多因素、多階段過程[10-11]。p16是一種腫瘤抑制基因，可阻止細胞從G1期發(fā)展至S期而抑制細胞增殖。文獻報道[10]已發(fā)現(xiàn)p16在腫瘤中呈強陽性表達，F(xiàn)inegan等[12]研究認為p16常在宮頸鱗狀細胞癌組織中表達，在良性病變和低級別病變時陰性，p16可能是從低級別到高級別病變轉(zhuǎn)化的標志物。另有研究表明[13-14]，p16組織學(xué)檢測可增加宮頸病變病理學(xué)診斷的準確性，對指導(dǎo)宮頸病變的臨床診療具有重要意義。

本研究顯示，p16陽性表達率在不同宮頸組織分布不同，隨著宮頸病變嚴重程度的增加，p16蛋白陽性表達率逐漸升高，這與國內(nèi)文獻報道一致[13,15]。在CIN Ⅲ和CIN Ⅱ組織中p16蛋白陽性表達率明顯高于CIN Ⅰ和正常宮頸組織，說明p16的異常表達對宮頸高級別鱗狀上皮內(nèi)病變更敏感，是宮頸病變發(fā)生過程中的早期事件，通過檢測p16蛋白可提高診斷的敏感性和特異性，彌補宮頸病理診斷的不足。本研究還發(fā)現(xiàn)，高級別病變CIN Ⅱ～Ⅲ組中，仍有少部分患者宮頸組織中p16蛋白呈陰性表達，與宮頸高級別病變臨床表現(xiàn)不符合，宮頸組織活檢診斷為宮頸癌，可能和p16基因突變有關(guān)，因此筆者認為單純檢測p16蛋白并不能全部獲得滿意診斷，故要聯(lián)合其他相關(guān)檢查提高診斷的敏感性和特異性。