菊粉作為佐劑可增強(qiáng)禽多殺性巴氏桿菌ptfA 基因DNA 疫苗的免疫效果

由禽多殺性巴氏桿菌引起的禽霍亂是影響禽類健康的重要疫病之一，給養(yǎng)禽業(yè)帶來了較大的經(jīng)濟(jì)損失，因此需要采取積極有效的措施來預(yù)防和控制該病。目前臨床上用于預(yù)防該病的疫苗仍然以傳統(tǒng)的弱毒活疫苗和滅活疫苗為主，但禽多殺性巴氏桿菌抗原結(jié)構(gòu)較為復(fù)雜，且易發(fā)生變異，導(dǎo)致目前商品化弱毒疫苗的免疫效果并不是特別理想。弱毒活苗還存在免疫期較短、免疫保護(hù)力偏低、局部及全身的反應(yīng)偏大，可能存在散毒危險(xiǎn)、殘余毒力引起蛋雞產(chǎn)蛋率下降等問題，而禽霍亂滅活疫苗的保護(hù)效果尚不及弱毒活疫苗，應(yīng)用較少。因此，為提高免疫預(yù)防的成功率需進(jìn)一步研制新型疫苗。

目前國內(nèi)外對于禽多殺性巴氏桿菌病新型疫苗的研究主要集中于基因工程亞單位疫苗、缺失突變活疫苗上，如外膜蛋白H 重組亞單位疫苗、pLpE 蛋白重組亞單位疫苗、莢膜缺失突變疫苗等。但多數(shù)細(xì)菌性DNA 疫苗的免疫效果差強(qiáng)人意。為提高DNA 疫苗的免疫原性，新型佐劑被廣泛應(yīng)用，其中多糖類化合物已成為佐劑研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)之一，而且大多表現(xiàn)出了較好的佐劑效應(yīng)。

近期《Poultry Science》發(fā)表了菊粉增強(qiáng)禽多殺性巴氏桿菌ptfA 基因DNA 疫苗免疫效果的研究。菊粉是一類天然植物性多糖，是一種有效的補(bǔ)體替代激活途徑的活化劑，給動物應(yīng)用后可以激活動物機(jī)體的先天免疫系統(tǒng)，有效地誘導(dǎo)Th1 型和Th2 型免疫應(yīng)答。而且菊粉在體內(nèi)可以被代謝成簡單的果糖和葡萄糖，因此不會伴隨有任何局部或全身的毒性，是一種安全的免疫佐劑。該研究以菊粉為佐劑制備了禽多殺性巴氏桿菌ptfA 基因的菊粉佐劑DNA疫苗，以弱毒活疫苗、菌毛蛋白疫苗及DNA 疫苗為對照，同時(shí)設(shè)置了菊粉灌胃組（先以菊粉進(jìn)行連續(xù)灌胃兩周后以DNA 疫苗進(jìn)行免疫），以上述各疫苗進(jìn)行了動物免疫。在初次免疫后的第1-6 周分別以禽多殺性巴氏桿菌的菌懸液和菌毛蛋白為包被抗原，采用間接ELISA 方法測定了各疫苗組誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生的血清抗體水平，結(jié)果表明兩種包被抗原檢測到的菊粉佐劑組、菊粉灌胃組和DNA 疫苗組的血清抗體水平均無顯著差異，且均低于弱毒活疫苗組和菌毛蛋白疫苗組，提示菊粉作為佐劑對于禽多殺性巴氏桿菌ptfA 基因DNA 疫苗誘導(dǎo)的血清抗體無明顯的促進(jìn)作用。在每次免疫后以禽多殺性巴氏桿菌的菌毛蛋白為刺激物，以MTT 法測定了免疫雞外周血淋巴細(xì)胞的增殖水平及其分泌的Th1 型細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2的濃度和Th2型細(xì)胞因子IL-4的濃度，結(jié)果在2免和3免后菊粉佐劑組分泌的IFN-γ和IL-2的濃度雖不及弱毒活疫苗組，但顯著高于DNA 疫苗組、菊粉灌胃組和菌毛蛋白疫苗組；但菊粉佐劑組、DNA 疫苗組、菊粉灌胃組和菌毛蛋白疫苗組分泌的IL-4 的濃度始終無顯著差異，且均低于弱毒活疫苗組和菌毛蛋白疫苗組。表明菊粉作為佐劑對于禽多殺性巴氏桿菌ptfA 基因DNA 疫苗誘導(dǎo)的Th2 型免疫應(yīng)答無明顯的促進(jìn)作用，但可提高Th1 型免疫應(yīng)答水平。3 次免疫后以禽多殺性巴氏桿菌強(qiáng)毒進(jìn)行攻毒試驗(yàn)，測定了各疫苗為實(shí)驗(yàn)動物提供的保護(hù)率，結(jié)果顯示菊粉佐劑組的保護(hù)率高于DNA 疫苗組，但菊粉灌胃組的保護(hù)率則并不優(yōu)于裸DNA 疫苗組。該研究證實(shí)菊粉可在一定程度上增強(qiáng)禽多殺性巴氏桿菌ptfA 基因DNA 疫苗的免疫效果，對于DNA 疫苗佐劑的研究以及禽多殺性巴氏桿菌新型疫苗的研究具有一定的意義。