天胡荽化學(xué)成分的研究

林啟凰，張 娜，葉廷秀，陳仲巍，張 崗

（廈門醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系，福建 廈門 361000）

天胡荽Hydrocotyle sibthorpioidesLam.［H.rotundifoliaRoxb.］為傘形科天胡荽屬植物，廣泛分布于安徽、福建、臺灣、云南、貴州、廣東、廣西等地，其全草入藥，具有清熱利濕、解毒消腫等功效［1］，是主流品種之一［2］，臨床上常用于治療膽囊炎、肝炎病毒感染、帶狀皰疹、牛皮癬等疾病［1］?，F(xiàn)代研究表明，天胡荽含有揮發(fā)油［3］、三萜皂苷［4-5］、黃酮［6］及其他酚類化合物［7］，提取物具有 抗HBsAg［8］、抗腫瘤［9］、免疫調(diào)節(jié)［9］、抗菌［10］等作用。為了繼續(xù)挖掘該植物的潛在價值，課題組對其進行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究，從水提物中分離、純化并鑒定得到7 種化合物，其中，化合物7 首次從傘形科植物中分離得到，化合物5 首次從天胡荽屬植物中分離得到，化合物1～2 首次從該植物中分離得到。

1 材料

Advance AV-600 核磁共振波譜儀（瑞士Bruker 公司）；Agilent 1260 高效液相色譜儀（美國Agilent 公司）；UV-1800 紫外分光光度計（日本島津公司）；Nexera UHPLC LC-30A 超高效液相色譜儀、LC-MS 8050 三重四極桿質(zhì)譜儀聯(lián)用系統(tǒng)（日本島津公司）；超純水機（美國Thermo 公司）。

Sephadex LH-20 填料（美國GE 公司）；反相ODS 色譜填料、Semi-HPLC 色譜柱（日本YMC 公司）；AB-8 大孔吸附樹脂（陜西博暉生化科技有限公司）；柱色譜用硅膠（200～300 目）、硅膠GF254薄層板（青島海洋化工廠）；柱色譜用聚酰胺（30～60 目）、薄層層析用聚酰胺薄膜（浙江臺州市陸橋四甲生化塑料）。色譜用甲醇、乙腈（美國Thermo Fisher 公司）。

藥材于2016 年6 月采自福建廈門，經(jīng)廈門醫(yī)學(xué)院鮑紅娟副教授鑒定為傘形科植物天胡荽Hydrocotyle sibthorpioidesLam.［H.rotundifoliaRoxb.］，標(biāo)本保存于廈門醫(yī)學(xué)院藥物分析教研室，編號為THS-201606。

2 提取與分離

將天胡荽（2 kg）于60 ℃下干燥后粉碎，分別用8 倍量純化水加熱回流提取2 次，濾過，合并濾液，使之緩緩?fù)ㄟ^AB-8 大孔樹脂，待化合物完全吸附后，先用2 倍柱體積的純化水洗柱，棄去水洗脫液，再用3 倍柱體積的75%乙醇洗脫，洗脫液于40 ℃下減壓濃縮，將濃縮液上樣于裝有30～60目聚酰胺（500 g）的色譜柱中，以乙醇-水系統(tǒng)梯度洗脫，聚酰胺薄層色譜檢視，合并相同組分，回收溶劑，將樣品分為6 個洗脫組分F1～F6。其中F6（1.2 g）組分通過硅膠柱和Sephadex LH-20 凝膠柱，得化合物6（7 mg）；通過反復(fù)硅膠柱和Sephadex LH-20 凝膠柱純化F5（6.5 g）組分，得化合物3（3.7 mg）、4（3.5 mg）；F4（18.2 g）組分上樣于反相ODS 柱后，由甲醇-水系統(tǒng)梯度洗脫，聚酰胺薄層檢視，合并相同組分，回收溶劑，又將樣品分為6 個洗脫組分（F4-1～F4-6），通過Sephadex LH-20 凝膠柱純化F4-3 組分，最后經(jīng)Semi-HPLC 制備，得化合物5（3.5 mg）；F4-4 經(jīng)Semi-HPLC 制備，得化合物7（4.2 mg）；經(jīng)反復(fù)硅膠柱和Sephadex LH-20 凝膠柱純化F3（1.5 g）組分，得化合物2（2.4 mg）；經(jīng)反復(fù)Sephadex LH-20 凝膠柱純化F2（8.5 g）組分，得化合物1（2.5 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，三氯化鐵反應(yīng)顯陽性，易溶于甲醇。分子式C7H6O4，ESI-MSm／z：153.0［M-H］－。1H-NMR（CD3OD，600 MHz）δ：7.45（1H，dd，J＝8.0，1.8 Hz，H-6）；7.21（1H，d，J＝1.8 Hz，H-2），6.76（1H，d，J＝8.0 Hz，H-5）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：122.5（C-1），117.2（C-2），142.7（C-3），151.8（C-4），114.0（C-5），122.7（C-6），167.7（C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］基本一致，故鑒定為原兒茶酸。

化合物2：淡黃色粉末，三氯化鐵反應(yīng)顯陽性，易溶于甲醇。分子式C9H8O3，ESI-MSm／z：163.1［M-H］－。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：7.52（1H，d，J＝16.0 Hz，H-7），7.46（2H，d，J＝8.0 Hz，H-2，6），6.79（2H，d，J＝8.0 Hz，H-3，5），6.30（1H，d，J＝16.0 Hz，H-8）；13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6）δ：127.7（C-1），130.5（C-2，6），116.1（C-3，5），159.9（C-4），146.3（C-7），115.5（C-8），174.5（C-9）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］基本一致，故鑒定為對羥基桂皮酸。

化合物3：黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯陽性。分子式C15H10O5，UVλmax（nm）為269，334，ESI-MSm／z：269.1［M-H］－。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：7.85（2H，d，J＝7.8 Hz，H-2′，6′），6.90（2H，d，J＝7.8 Hz，H-3′，5′），6.18（1H，d，J＝1.8 Hz，H-6），6.55（1H，d，J＝1.8 Hz，H-8），6.75（1H，s，H-3）；13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：94.2（C-8），99.0（C-6），102.2（C-3），103.4（C-10），115.8（C-3′，5′），120.5（C-1′），128.1（C-2′，6′），157.0（C-9），161.2（C-4′），161.7（C-5），163.5（C-7），163.9（C-2），178.1（C-4）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］基本一致，故鑒定為芹菜素。

化合物4：黃色針晶，鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯陽性。分子式C15H10O6，UVλmax（nm）為268，364，ESI-MSm／z：285.1［M-H］－。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：6.19（1H，d，J＝1.8 Hz，H-6），6.40（1H，d，J＝1.8 Hz，H-8），8.06（2H，d，J＝8 Hz，H-2′，6′），6.92（2H，d，J＝8 Hz，H-3′，5′-H）；13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：148.4（C-2），137.1（C-3），177.5（C-4），161.7（C-5），99.4（C-6），165.2（C-7），94.5（C-8），156.7（C-9），104.6（C-10），122.3（C-1′），130.8（C-2′，6′），115.8（C-3′，5′），160.6（C-4′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］基本一致，故鑒定為山柰酚。

化合物5：黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯陽性。分子式C27H30O14，UVλmax（nm）為265，345，ESI-MSm／z：577.3［M-H］－。1H-NMR（600 MHz，CD3OD）δ：0.93（3H，d，J＝7.2 Hz，3-O-rha-CH3），1.26（3H，d，J＝7.2 Hz，7-O-rha-CH3），5.40（1H，3-O-rha-1-H），5.56（1H，7-O-rha-1-H），6.45（1H，d，J＝1.8 Hz，H-6），6.71（1H，d，J＝2.0 Hz，H-8），6.94（2H，d，J＝8.4 Hz，H-3′，H-5′），7.79（2H，d，J＝8.4 Hz，H-2′，H-6′）；13C-NMR（125 MHz，CD3OD）δ：157.9（C-2），136.3（C-3），179.6（C-4），161.6（C-5），99.6（C-6），163.3（C-7），95.4（C-8），159.6（C-9），107.3（C-10），122.2（C-1′），131.8（C-2′），116.4（C-3′），161.6（C-4′），116.4（C-5′），131.8（C-6′），100.3（3-O-rha-C-1），103.3（7-O-rha-C-1），72.9～71.1（8 個碳信號，3-O-rha-C-2～C-5，7-O-rha-C-2～C-5），17.4（3-O-rha-C-6），17.8（7-O-rha-C-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［15］基本一致，故鑒定為山柰苷。

化合物6：黃色粉末，鹽酸-鎂粉反應(yīng)顯陽性。分子式C15H10O7，UVλmax（nm）為249，372；ESI-MSm／z：301.1［M-H］－。1H-NMR（600 MHz，DMSO-d6）δ：7.70（1H，d，J＝1.8 Hz，H-6′），7.60（1H，dd，J＝8.0，1.8 Hz，H-2′），6.85（1H，d，J＝8.0 Hz，H-5′），6.35（1H，d，J＝1.8 Hz，H-8），6.15（1H，d，J＝1.8 Hz，H-6）；13CNMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：147.8（C-2），137.0（C-3），177.1（C-4），162.3（C-5），99.0（C-6），165.4（C-7），94.2（C-8），58.0（C-9），104.5（C-10），123.9（C-1′），115.5（C-2′），145.6（C-3′），148.6（C-4′），116.0（C-5′），120.8（C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］基本一致，故鑒定為槲皮素。

化合物7：黃色粉末，聚酰胺薄膜上噴三氯化鋁試劑后紫外下顯黃綠色熒光。分子式C20H18O8，UVλmax（nm）為235，390［sh］，326，ESI-MSm／z：385.2［M-H］－。1H-NMR（DMSO-d6，600 MHz）δ：7.47（1H，d，J＝15.6 Hz，H-7），7.39（1H，d，J＝1.8 Hz，H-2），7.21（1H，s，H-7′），7.09（1H，dd，J＝1.8，7.8 Hz，H-6），6.65（1H，d，J＝7.8 Hz，H-5），6.47（1H，d，J＝15.6 Hz，H-8），7.34（1H，d，J＝1.8 Hz，H-2′），6.72（1H，d，J＝7.8 Hz，H-5′），7.05（1H，dd，J＝1.8，7.8 Hz，H-6′）；13C-NMR（DMSO-d6，125 MHz）δ：128.1（C-1），111.2（C-2），148.5（C-3），143.7（C-4），113.3（C-5），122.0（C-6），147.9（C-7），117.4（C-8），168.0（C-9），55.8（3-OCH3），124.5（C-1′），112.8（C-2′），147.3（C-3′），140.1（C-4′），115.4（C-5′），123.9（C-6′），147.8（C-7′），140.2（C-8′），164.8（C-9），55.8（3′-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［16］基本一致，故鑒定為8-O-4-dehydrodiferulic acid。

4 討論

本研究從采自福建廈門的天胡荽水提物中分離得到7 個化合物，包括4 個黃酮類（3～6）、2 個苯丙素類（2、7）、1 個小分子酚酸類（1）?；衔? 為首次從傘形科植物中分離得到，化合物5 為首次從該屬植物中分離得到，化合物1～2 為首次從該植物中分離得到。

大量研究表明，本實驗所得化合物具有多種生理活性。原兒茶酸（1）具有較好的抗氧化作用，對MPP＋誘導(dǎo)的中腦多巴胺能神經(jīng)元損傷具有保護作用［17］，對阪崎克羅諾腸桿菌有抑制效果［18］；對羥基桂皮酸（2）具有一定的抗菌［19］、抗炎［20］活性；芹菜素（3）、山柰酚（4）、槲皮素（6）為常見的黃酮類化合物，均具有不同程度的抗腫瘤、抗炎、抗菌、抗氧化、心腦血管保護等作用［21-23］；山柰苷（5）具有較好的降血糖活性［24］，也顯示了抗炎［25］作用，對于揭示天胡荽清熱利濕、解毒消腫等功效的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)具有一定意義。同時，上述結(jié)果為天胡荽的臨床應(yīng)用提供依據(jù)。