• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    GC-MS/MS在研究生實驗教學(xué)中的應(yīng)用

    2020-01-13 09:49:02虞俊超陳翠紅徐利斯馬小東孟鳳林展思輝
    實驗室研究與探索 2019年12期
    關(guān)鍵詞:實驗教學(xué)實驗分析

    虞俊超, 陳翠紅, 徐利斯, 馬小東, 孟鳳林, 展思輝

    (南開大學(xué) 環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院,天津 300351)

    0 引 言

    研究生實驗教學(xué)是高校研究生培養(yǎng)的重要組成部分,是提高研究生科研水平和創(chuàng)新能力的中心環(huán)節(jié)[1-2]。在環(huán)境分析領(lǐng)域,熟練掌握相關(guān)儀器分析技術(shù)與方法對研究生進行科學(xué)研究及日后從事相關(guān)工作至關(guān)重要。雖然目前國內(nèi)多數(shù)高等院校已開設(shè)了研究生的儀器分析實驗教學(xué)課,但受實驗條件限制,課程普遍與本科實驗相近,實驗教學(xué)內(nèi)容拓展不足,這不利于研究生的高質(zhì)量培養(yǎng)[3]。

    氣質(zhì)聯(lián)用儀因其兼有氣相色譜的單一流動相(通常為He)供應(yīng)優(yōu)勢、高效色譜分離能力及質(zhì)譜對未知物的強大定性/定量功能而被廣泛應(yīng)用于熱穩(wěn)定性較好的中小分子化合物分析。由于其較寬廣的使用范圍,氣質(zhì)聯(lián)用測試已成為化學(xué)、環(huán)境科學(xué)、環(huán)境工程等專業(yè)儀器分析課程的常見實驗內(nèi)容。國內(nèi)關(guān)于氣質(zhì)聯(lián)用實驗的實踐探索很多,但多是面向本科生且使用氣相色譜-單級質(zhì)譜聯(lián)用儀(GC-MS)進行實驗教學(xué)[4-8]。然而在實際的環(huán)境檢測中,單級質(zhì)譜(MS)常受到復(fù)雜環(huán)境樣品的基質(zhì)干擾,有時無法滿足目標(biāo)物的確證分析需求。相比于單級質(zhì)譜,串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)可對目標(biāo)物進行二次裂解,有效地提高了測試的選擇性和靈敏度,因此在環(huán)境分析中發(fā)揮著愈發(fā)重要的作用[9]。

    近幾年,在國家“統(tǒng)籌推進世界一流大學(xué)和一流學(xué)科建設(shè)”計劃支持下,我校環(huán)境科學(xué)與工程學(xué)院陸續(xù)購置了一批高精尖儀器,集中于大型儀器平臺共享使用,這對學(xué)院教學(xué)及科研發(fā)展形成了強有力的支撐。一流的研究生教育是高校實現(xiàn)“雙一流”建設(shè)目標(biāo)的基石[10]。為進一步提高研究生的科研實踐能力,學(xué)院儀器平臺依托其較優(yōu)越的設(shè)備條件和專職教師豐富的分析測試經(jīng)驗,以必修課的形式開設(shè)了一系列的現(xiàn)代儀器分析課程(70學(xué)時)。本文涉及的“氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS/MS)測定土壤中的硝基苯”就是其中的一節(jié)實驗課,課程緊系環(huán)境專業(yè)特色,并基于GC-MS/MS多樣的定性/定量功能拓寬儀器分析實驗內(nèi)容,同時積極進行多元化教學(xué)方法實踐,對研究生的氣質(zhì)聯(lián)用實驗教學(xué)進行探索。

    1 GC-MS/MS實驗教學(xué)選題情況簡述

    實驗課面向研究生,考慮到他們將來科研工作中可能遇到更復(fù)雜多樣的氣質(zhì)聯(lián)用測試需求,因此選用GC-MS/MS進行實驗教學(xué)。如圖1所示,GC-MS/MS主要由5部分組成,分別為氣相色譜、離子源、質(zhì)量分析器、檢測器及數(shù)據(jù)系統(tǒng)。進樣后樣品各組分先通過氣相色譜進行高效分離,然后依次進入離子源完成離子化(形成帶電離子),質(zhì)量分析器按離子質(zhì)荷比(m/z)實現(xiàn)分離分析,檢測器將樣品中不同組分的存在情況轉(zhuǎn)化為電信號,最后通過數(shù)據(jù)系統(tǒng)進行數(shù)據(jù)的匯總及處理。平臺購置的氣質(zhì)聯(lián)用設(shè)備采用大氣壓化學(xué)電離源(APCI)進行測試,因其優(yōu)異的靈敏度和選擇性,該軟電離技術(shù)已被大量應(yīng)用于GC-MS(/MS)分析測試中[11]。

    圖1 GC-MS/MS結(jié)構(gòu)解析

    與單四級桿質(zhì)譜(MS)不同,三重四級桿串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)由一級四級桿(MS1),線性加速碰撞室及三級四級桿(MS2)3部分(見圖1)構(gòu)成。樣品離子先進入MS1篩選出目標(biāo)物的特征母離子;母離子與氣體(Ar)碰撞,裂解產(chǎn)生子離子;再由MS2捕集子離子。GC-MS/MS的結(jié)構(gòu)特性使其可提供更多分析模式:質(zhì)譜全掃描模式(MS scan)和子離子掃描模式(Product ion scan)可分別用于樣品組分的母離子和子離子電離特征分析,選擇離子監(jiān)測模式(SIM)和多反應(yīng)監(jiān)測模式(MRM)可分別選擇目標(biāo)物的特征母離子、母離子-子離子對進行定量分析。

    硝基苯(Nitrobenzene)是一種芳烴類化合物,在農(nóng)藥、紡織、炸藥等工業(yè)領(lǐng)域生產(chǎn)活動中應(yīng)用廣泛[12]。早在1989年,硝基苯就被國家環(huán)保局列入“水中優(yōu)先控制污染物黑名單”。2016年,為切實加強土壤污染防治工作,國務(wù)院印發(fā)土壤污染防治行動計劃,公布的污染物檢測名單也包括硝基苯。土壤中硝基苯類污染物定量分析常選用氣質(zhì)聯(lián)用儀(EI源)[13],但目前尚無基于APCI源離子化的GC-MS(/MS)分析報道。依托學(xué)院大型儀器平臺的設(shè)備條件,設(shè)計了GC-APCI-MS/MS測定土壤基質(zhì)中硝基苯的實驗教學(xué)課程,將科研項目轉(zhuǎn)化為實驗課程,豐富了實驗的可探索性,有利于激發(fā)研究生的專業(yè)學(xué)習(xí)興趣,培養(yǎng)科研創(chuàng)新思維。

    2 實驗教學(xué)目標(biāo)的設(shè)定

    (1) 通過教學(xué),開拓學(xué)生的知識面,了解GC-MS/MS的結(jié)構(gòu)與工作原理。

    (2) 通過實驗,掌握GC-MS(/MS)的主要操作方法,加深學(xué)生對氣質(zhì)聯(lián)用儀開展環(huán)境分析測試的認(rèn)識。

    (3) 通過文獻調(diào)研,讓學(xué)生結(jié)合各自未來的研究方向,了解氣質(zhì)聯(lián)用分析測試的適用范圍,充分調(diào)動學(xué)生的主動學(xué)習(xí)興趣,為將來的科研工作做準(zhǔn)備。

    3 實驗準(zhǔn)備與流程設(shè)計

    3.1 試劑與材料

    丙酮、正己烷、乙酸乙酯(色譜級)及無水硫酸鈉(分析級)購自天津市化學(xué)試劑六廠。硝基苯標(biāo)準(zhǔn)儲備液:1 g/L。弗羅里硅土SPE柱(500 mg/3 mL)購于東莞市譜標(biāo)實驗器材科技有限公司。無水硫酸鈉使用前在馬弗爐中300 ℃烘烤2 h,冷卻后放入試劑瓶備用。

    天亮后,先后有兩個人扒著木排求救。男人沒有再阻攔,任表姐把他們一個一個拉上木排。第二個上岸的人見表姐沒穿衣服,身子抖得厲害,就脫下自己的衣服,擰干,讓表姐穿上。那是件中山裝,厚厚的卡其布料,外掛四個兜。應(yīng)該是干部裝,不知道是水里撈的還是那男人自己的。楊小水穿在身上又胖又長,連下身也罩得嚴(yán)嚴(yán)實實的。

    3.2 儀器分析條件

    Agilent 7890B-Waters Xevo TQS型氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀。

    (1) 氣相色譜條件。進樣方式:不分流進樣,進樣量1 μL,進樣口溫度250 ℃,載氣為高純氦氣,流速1.0 mL/min。選用DB5-MS UI柱30 m×0.25 mm×0.25 μm,升溫程序:起始溫度40 ℃,保持4 min,以20 ℃/min升溫至280 ℃,保持2 min。運行時間18 min,溶劑延遲為6 min,傳輸線溫度280 ℃。

    (2) 質(zhì)譜條件。采用大氣壓氣相色譜技術(shù)(APGC),APCI電離源,正離子化模式,電暈針電壓2.0 μA,離子源溫度:150 ℃,MS scan掃描范圍:20~300 m/z,Product ion scan 掃描范圍:20~200 m/z。

    3.3 土壤樣品制備

    樣品前處理是完成待分析物提取、凈化和富集的重要過程,對后續(xù)的分析測試效果影響顯著[14]??紤]到土壤樣品處理過程復(fù)雜,實驗耗時過長,課程采用教學(xué)演示的方式對樣品前處理各步驟用途、質(zhì)量控制等方面進行詳細(xì)講解,具體制備流程如下:稱取約10.0 g樣品放入燒杯中,以20 mL丙酮-正己烷(1∶1, V/V)超聲提取30 min,提取結(jié)束后使用離心機3 000 r/min離心5 min(提取流程重復(fù)3次),合并有機提取液;提取液經(jīng)無水硫酸鈉柱除水后,使用弗羅里硅土柱凈化樣品:依次用10 mL正己烷、10 mL乙酸乙酯淋洗柱子,土壤提取液裝載后,選用12 mL乙酸乙酯洗脫;將洗脫液氮吹至近干,使用正己烷定容至1 mL,待上機測試。

    3.4 實驗流程設(shè)計

    實驗流程如圖2所示。以小組的形式(每組3~5人)開展實驗教學(xué),保證學(xué)生都能進行儀器操作。設(shè)計了兩套實驗方案,通過抽簽分配儀器分析實驗內(nèi)容,引導(dǎo)不同組別的學(xué)生協(xié)作完成單級質(zhì)譜的SIM和串聯(lián)質(zhì)譜MRM方法開發(fā),并將兩套方法對土壤基質(zhì)樣品的測試效果進行比較,讓學(xué)生對GC-MS(/MS)的主要定性/定量功能有較全面的了解。

    圖2 GC-MS(/MS)實驗流程設(shè)計

    4 多元化教學(xué)方法探索

    研究生是儀器分析實驗教學(xué)過程中的學(xué)習(xí)主體,教師須改變以往“灌輸式”的教學(xué)培養(yǎng)方式,增強教學(xué)的直觀性、互動性、探索性,建立以學(xué)生為中心,教師為引導(dǎo)的新型教學(xué)關(guān)系[15-16]。為進一步提高實驗教學(xué)效率,達到鞏固研究生專業(yè)知識學(xué)習(xí),提高科研創(chuàng)新能力的目標(biāo),課程從4個方面進行多元化的教學(xué)方法探索(見圖3)。

    圖3 多元化的大型儀器分析教學(xué)方法實踐

    (1) 健全課前預(yù)習(xí)制度。強化學(xué)生課前預(yù)習(xí)。通過文獻資料調(diào)研,讓學(xué)生對硝基苯這類污染物的檢測意義,儀器分析方法有所認(rèn)識,以此鍛煉學(xué)生的主動學(xué)習(xí)能力;開課前安排5 min,讓學(xué)生重溫實驗講義,使學(xué)生對教學(xué)內(nèi)容與方式,實驗準(zhǔn)備流程、操作方法及相關(guān)注意事項有所了解,這有助于學(xué)生盡快進入課堂學(xué)習(xí)狀態(tài),提高學(xué)習(xí)效率。

    (3) 開展基于問題的課堂回顧與討論。要求學(xué)生在教學(xué)完成后積極提問,設(shè)置課堂回顧與討論環(huán)節(jié),并將此環(huán)節(jié)表現(xiàn)納入成績考核。通過課堂知識點回顧,深化學(xué)生對相關(guān)知識點的理解;提出問題本身就是一種更主動的學(xué)習(xí)過程,通過對問題的交流與討論,可以有效強化同組學(xué)生對實驗原理、方法的理解,也提高了學(xué)生們對儀器分析的探索興趣和創(chuàng)造能力。

    (4) 課后開放性問題拓展。針對本次實驗教學(xué)內(nèi)容,設(shè)置開放性問題,讓學(xué)生結(jié)合自己的研究方向,進行相關(guān)資料的再檢索。通過對實驗現(xiàn)象進行開放性探索,有助于穩(wěn)固學(xué)生知識積淀,提高實驗教學(xué)效果。

    5 實驗結(jié)果與討論

    5.1 氣相色譜條件選擇

    在課前文獻調(diào)研的基礎(chǔ)上[12],讓學(xué)生對氣相色譜儀主要參數(shù)進行設(shè)置。進樣口溫度設(shè)定為250 ℃,確保硝基苯能以氣態(tài)的形式進入色譜柱。實驗選用DB5-MS UI非極性毛細(xì)管柱,設(shè)置梯度升溫程序?qū)⑾趸脚c樣品雜質(zhì)進行高效分離。選擇正己烷作為溶劑,制備標(biāo)樣和土壤基質(zhì)樣品,在GC分析6 min后啟動質(zhì)譜,切除溶劑峰,減少溶劑對GC-MS/MS分析測試的干擾。通過標(biāo)準(zhǔn)品的總離子流色譜圖確定硝基苯的保留時間為10.2 min。

    5.2 質(zhì)譜掃描條件優(yōu)化

    相比于單級質(zhì)譜(MS),串聯(lián)質(zhì)譜(MS/MS)可以提供更多樣的掃描模式。在GC-MS/MS實驗過程中,可以先使用質(zhì)譜全掃描(MS Scan)了解硝基苯的APCI源電離行為,篩選出豐度較高的母離子,再采用子離子掃描模式(Product ion scan)觀察特征母離子的裂解特征,結(jié)合兩級質(zhì)譜的掃描信息有助于推斷待分析物的分子離子結(jié)構(gòu)。錐孔電壓、碰撞能量分別是MS Scan、Product ion scan模式中的重要調(diào)控參數(shù),通過參數(shù)條件的梯度實驗操作,使學(xué)生直接觀察到參數(shù)值的更改對儀器響應(yīng)的影響,既培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目蒲兴季S,也加深了他們對GC-MS/MS結(jié)構(gòu)及測試原理的理解。硝基苯標(biāo)準(zhǔn)品的MS/MS掃描結(jié)果見圖4,在APCI源離子化條件下,最優(yōu)錐孔電壓為25 V,全掃描譜圖中最強峰是m/z 123.9,根據(jù)質(zhì)荷比推斷應(yīng)該是硝基苯(C6H5NO2)的質(zhì)子化離子[M+H]+,其余特征母離子主要為m/z 94.1、77.2及105.0。譜圖里的m/z 148.7可能來源于氣相系統(tǒng)中的酞酸酯類化合物干擾,該現(xiàn)象在其他氣質(zhì)聯(lián)用測試中也有報道[17]。選擇高豐度的母離子m/z 123.9,通過設(shè)置不同碰撞能量(10~30 eV)進行子離子掃描,記錄產(chǎn)物離子m/z 77.0、93.8、51.0、66.1的最優(yōu)碰撞能量參數(shù)。

    通過質(zhì)譜掃描條件優(yōu)化,對硝基苯化合物建立了基于單級質(zhì)譜的SIM定量方法,以及基于串聯(lián)質(zhì)譜的MRM定量方法,具體參數(shù)見表1。

    5.3 土壤基質(zhì)樣品測試效果

    采用外標(biāo)法定量: 配制20、50、200、500、1 000 ng/mL硝基苯標(biāo)準(zhǔn)溶液,以目標(biāo)化合物的濃度值為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),建立5點校準(zhǔn)工作曲線。結(jié)果顯示在0~1 000 ng/mL范圍內(nèi)測試線性效果良好,相關(guān)系數(shù)R2≥0.994 0。使用GC-MS/MS方法對土壤樣品中的硝基苯含量進行測定,未有檢出。通過對土壤基質(zhì)加標(biāo)樣品(800 ng/mL)進行測定,全面比較SIM與MRM兩種定量方法對真實環(huán)境樣品的測試效果差別,不同方法的提取離子色譜分析效果如圖5。分析結(jié)果表明,與SIM方法相比,串聯(lián)質(zhì)譜MRM方法選用母-子離子對進行分析測試,能明顯降低土壤基質(zhì)干擾,并增強色譜峰的信噪比值,顯著提高儀器分析測試的靈敏度。通過比對實驗,學(xué)生對GC-MS(/MS)的環(huán)境分析測試效果有了更直觀的認(rèn)識,這有益于他們?nèi)蘸罂蒲泄ぷ鞯拈_展。

    圖4 硝基苯的質(zhì)譜掃描條件優(yōu)化

    表1 基于MS(/MS)的硝基苯定量和定性離子選擇

    圖5 GC-MS(/MS)對土壤加標(biāo)樣品的測定效果比對

    6 結(jié) 語

    為提高學(xué)生的分析操作、創(chuàng)新及團隊協(xié)作能力,將大型儀器氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用儀引入到研究生的儀器分析實驗課程中,選題為“GC-MS/MS測定土壤中的硝基苯”。課程緊系環(huán)境專業(yè)特色,并基于新設(shè)備多樣的測試功能,設(shè)計兩套氣質(zhì)聯(lián)用定性/定量思路,引導(dǎo)學(xué)生協(xié)作式開展儀器分析實驗,使學(xué)生對GC-MS(/MS)的主要分析測定功能有較全面的了解。同時為切實提高教學(xué)效果,從健全課前預(yù)習(xí)制度、貫徹對比性教學(xué)、開展基于問題的課堂回顧與討論、課后開放性問題拓展4個方面進行多元化教學(xué)方法實踐。該實驗課開設(shè)已歷時2年,對研究生科研實踐能力的培養(yǎng)助力明顯,教學(xué)效果良好。依托儀器平臺的先進設(shè)備開展實驗教學(xué),課程本身也可看作是環(huán)境專業(yè)研究生的“公用儀器操作準(zhǔn)入培訓(xùn)”,這為后續(xù)的公用實驗室大型儀器開放,學(xué)生自主操作儀器開展科研工作奠定了堅實的基礎(chǔ)。

    猜你喜歡
    實驗教學(xué)實驗分析
    記一次有趣的實驗
    隱蔽失效適航要求符合性驗證分析
    小議初中化學(xué)演示實驗教學(xué)
    甘肅教育(2020年4期)2020-09-11 07:42:36
    電容器的實驗教學(xué)
    物理之友(2020年12期)2020-07-16 05:39:20
    對初中化學(xué)實驗教學(xué)的認(rèn)識和體會
    甘肅教育(2020年8期)2020-06-11 06:10:04
    做個怪怪長實驗
    電力系統(tǒng)不平衡分析
    電子制作(2018年18期)2018-11-14 01:48:24
    幾何體在高中數(shù)學(xué)實驗教學(xué)中的應(yīng)用
    電力系統(tǒng)及其自動化發(fā)展趨勢分析
    NO與NO2相互轉(zhuǎn)化實驗的改進
    午夜成年电影在线免费观看| 国产真实乱freesex| 久久亚洲真实| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片 | 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产真实乱freesex| 女警被强在线播放| 操出白浆在线播放| 性欧美人与动物交配| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 大香蕉久久成人网| 亚洲精品中文字幕在线视频| 免费在线观看视频国产中文字幕亚洲| 香蕉久久夜色| 免费看日本二区| 国产v大片淫在线免费观看| svipshipincom国产片| 国产高清videossex| 观看免费一级毛片| 久久国产亚洲av麻豆专区| netflix在线观看网站| 老司机深夜福利视频在线观看| 成年版毛片免费区| 日本黄色视频三级网站网址| 免费在线观看影片大全网站| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 日韩大码丰满熟妇| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 免费av毛片视频| 人成视频在线观看免费观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 亚洲国产欧美网| 午夜福利高清视频| 国产一区二区在线av高清观看| 国产精华一区二区三区| 国产99久久九九免费精品| 亚洲电影在线观看av| 色综合亚洲欧美另类图片| 色播亚洲综合网| 久久久久国产一级毛片高清牌| 美国免费a级毛片| 亚洲真实伦在线观看| 久久久久久久午夜电影| 一进一出抽搐动态| 99国产精品一区二区三区| av中文乱码字幕在线| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 欧美色视频一区免费| 久久久久久久久免费视频了| 欧美亚洲日本最大视频资源| 久久久久久国产a免费观看| 精品欧美国产一区二区三| www.熟女人妻精品国产| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| www日本黄色视频网| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 一进一出抽搐动态| 一本综合久久免费| 午夜福利18| 成在线人永久免费视频| 少妇的丰满在线观看| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 日韩成人在线观看一区二区三区| cao死你这个sao货| 校园春色视频在线观看| 757午夜福利合集在线观看| 在线视频色国产色| 狠狠狠狠99中文字幕| 久久久国产成人精品二区| 亚洲国产欧美网| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 成在线人永久免费视频| 色av中文字幕| 久久香蕉精品热| 18禁国产床啪视频网站| 成人手机av| 男女那种视频在线观看| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 视频区欧美日本亚洲| 99久久国产精品久久久| 中文字幕高清在线视频| 欧美av亚洲av综合av国产av| 母亲3免费完整高清在线观看| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 在线观看www视频免费| 在线免费观看的www视频| 两性夫妻黄色片| 久久久久久久久免费视频了| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 制服人妻中文乱码| 欧美不卡视频在线免费观看 | 在线观看午夜福利视频| 国产av又大| 午夜成年电影在线免费观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合 | 亚洲熟女毛片儿| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 91老司机精品| 一级毛片女人18水好多| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 日韩成人在线观看一区二区三区| 免费在线观看完整版高清| 免费看美女性在线毛片视频| 男人的好看免费观看在线视频 | 亚洲精品国产一区二区精华液| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 美女国产高潮福利片在线看| 成人av一区二区三区在线看| 午夜福利欧美成人| 国产一区二区在线av高清观看| 99久久国产精品久久久| 国产精品国产高清国产av| 日韩精品免费视频一区二区三区| 久久午夜亚洲精品久久| 成人永久免费在线观看视频| 国产一区在线观看成人免费| 国产精品久久视频播放| 中文在线观看免费www的网站 | 男女床上黄色一级片免费看| 国产真实乱freesex| 亚洲中文日韩欧美视频| 99re在线观看精品视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 成人永久免费在线观看视频| 大型黄色视频在线免费观看| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产色视频综合| 桃色一区二区三区在线观看| 精品不卡国产一区二区三区| 久久久国产精品麻豆| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲最大成人中文| 国产成年人精品一区二区| 可以在线观看的亚洲视频| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 色播亚洲综合网| 中文在线观看免费www的网站 | 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 在线天堂中文资源库| 很黄的视频免费| 岛国在线观看网站| 在线天堂中文资源库| 免费在线观看亚洲国产| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 国产三级黄色录像| 国产成人欧美在线观看| 妹子高潮喷水视频| 亚洲一区中文字幕在线| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 1024视频免费在线观看| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 人人妻人人澡欧美一区二区| www.www免费av| 亚洲欧美日韩高清在线视频| www日本黄色视频网| 一区二区三区精品91| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产精品久久久av美女十八| 制服诱惑二区| av电影中文网址| 丰满的人妻完整版| 国产极品粉嫩免费观看在线| 亚洲色图av天堂| 波多野结衣高清作品| 免费在线观看亚洲国产| 熟女电影av网| 国产黄色小视频在线观看| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 麻豆久久精品国产亚洲av| or卡值多少钱| 中文在线观看免费www的网站 | or卡值多少钱| 天堂影院成人在线观看| 搡老岳熟女国产| 一边摸一边抽搐一进一小说| 国产1区2区3区精品| 久久国产乱子伦精品免费另类| 1024视频免费在线观看| 亚洲一区二区三区不卡视频| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 久久久国产成人精品二区| 亚洲中文字幕日韩| 精品免费久久久久久久清纯| 91大片在线观看| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 成人18禁在线播放| 国产av在哪里看| 男女视频在线观看网站免费 | 少妇粗大呻吟视频| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 亚洲在线自拍视频| 国产在线观看jvid| 亚洲成人久久爱视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 88av欧美| 午夜久久久在线观看| 色哟哟哟哟哟哟| 精品国产乱码久久久久久男人| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 日本免费一区二区三区高清不卡| www.www免费av| 韩国av一区二区三区四区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 久9热在线精品视频| 天天一区二区日本电影三级| 色综合站精品国产| xxx96com| 午夜福利一区二区在线看| 久久香蕉激情| 在线观看66精品国产| 淫秽高清视频在线观看| 国产精品一区二区免费欧美| avwww免费| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 日韩精品中文字幕看吧| 露出奶头的视频| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 免费一级毛片在线播放高清视频| 午夜福利高清视频| 天天添夜夜摸| 桃色一区二区三区在线观看| 免费一级毛片在线播放高清视频| 一区二区三区高清视频在线| 夜夜爽天天搞| 美国免费a级毛片| 日韩欧美三级三区| 亚洲国产精品久久男人天堂| 国产野战对白在线观看| 男人操女人黄网站| 熟女电影av网| а√天堂www在线а√下载| 国产成人av激情在线播放| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 淫秽高清视频在线观看| 青草久久国产| 法律面前人人平等表现在哪些方面| svipshipincom国产片| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲精品在线观看二区| 国产主播在线观看一区二区| 色播亚洲综合网| 99久久综合精品五月天人人| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 91成人精品电影| 欧美激情高清一区二区三区| 婷婷丁香在线五月| 又紧又爽又黄一区二区| 一区二区日韩欧美中文字幕| 麻豆av在线久日| 级片在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 99热只有精品国产| 久9热在线精品视频| 国产激情欧美一区二区| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 欧美丝袜亚洲另类 | 好男人在线观看高清免费视频 | 91国产中文字幕| 天天一区二区日本电影三级| 香蕉丝袜av| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 一a级毛片在线观看| 无人区码免费观看不卡| 日韩欧美 国产精品| 亚洲五月天丁香| 亚洲av片天天在线观看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 日韩欧美在线二视频| 午夜福利在线在线| 美女 人体艺术 gogo| 亚洲三区欧美一区| 最近最新免费中文字幕在线| 白带黄色成豆腐渣| 国产高清有码在线观看视频 | 亚洲自偷自拍图片 自拍| 99在线人妻在线中文字幕| 中文字幕最新亚洲高清| 久久久久久九九精品二区国产 | 视频区欧美日本亚洲| 免费观看人在逋| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 色播在线永久视频| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 搡老妇女老女人老熟妇| 亚洲国产中文字幕在线视频| 老司机在亚洲福利影院| 免费电影在线观看免费观看| 一区二区三区精品91| 窝窝影院91人妻| 久久欧美精品欧美久久欧美| а√天堂www在线а√下载| 少妇的丰满在线观看| 久久国产精品影院| 午夜亚洲福利在线播放| 国产伦在线观看视频一区| 国产午夜精品久久久久久| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 无遮挡黄片免费观看| 欧美日韩一级在线毛片| 老汉色∧v一级毛片| 视频在线观看一区二区三区| 成年版毛片免费区| 最近最新中文字幕大全免费视频| 亚洲九九香蕉| 精品国产乱子伦一区二区三区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 精品电影一区二区在线| 麻豆成人av在线观看| 在线永久观看黄色视频| 久99久视频精品免费| 国产99久久九九免费精品| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产精品久久久人人做人人爽| 丝袜美腿诱惑在线| 美女午夜性视频免费| 国产精品一区二区免费欧美| 久久精品91蜜桃| 香蕉丝袜av| 久久国产亚洲av麻豆专区| 草草在线视频免费看| 热99re8久久精品国产| 色老头精品视频在线观看| 在线观看66精品国产| 国内精品久久久久精免费| 欧美一区二区精品小视频在线| 99国产综合亚洲精品| 亚洲avbb在线观看| 久久久久久人人人人人| 日本免费a在线| 久久伊人香网站| 精品国产亚洲在线| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 欧美丝袜亚洲另类 | 亚洲精品美女久久av网站| 欧美色视频一区免费| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 国产私拍福利视频在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 亚洲国产欧美网| 草草在线视频免费看| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 欧美性长视频在线观看| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 丁香六月欧美| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 国产蜜桃级精品一区二区三区| 成人三级做爰电影| 美女免费视频网站| 欧美中文综合在线视频| 欧美黑人精品巨大| 亚洲国产精品久久男人天堂| 久久精品国产清高在天天线| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 制服丝袜大香蕉在线| 精品高清国产在线一区| 极品教师在线免费播放| 亚洲成a人片在线一区二区| 成人特级黄色片久久久久久久| 久久亚洲真实| 亚洲熟女毛片儿| 在线观看午夜福利视频| 成人特级黄色片久久久久久久| 黄片大片在线免费观看| 在线观看www视频免费| 嫁个100分男人电影在线观看| 在线观看免费视频日本深夜| 在线观看午夜福利视频| 国产视频一区二区在线看| 免费看十八禁软件| 久久香蕉精品热| 日韩高清综合在线| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 一级作爱视频免费观看| 大型黄色视频在线免费观看| 日韩有码中文字幕| 婷婷精品国产亚洲av在线| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 桃红色精品国产亚洲av| 日本成人三级电影网站| 嫁个100分男人电影在线观看| 9191精品国产免费久久| 丝袜美腿诱惑在线| 少妇熟女aⅴ在线视频| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产高清有码在线观看视频 | 亚洲三区欧美一区| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 搡老妇女老女人老熟妇| 白带黄色成豆腐渣| 俺也久久电影网| 欧美精品亚洲一区二区| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 给我免费播放毛片高清在线观看| 日韩欧美 国产精品| 99在线视频只有这里精品首页| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 99在线视频只有这里精品首页| 女同久久另类99精品国产91| 日韩高清综合在线| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产成人影院久久av| 国产亚洲av高清不卡| 在线观看午夜福利视频| 亚洲精品中文字幕在线视频| 美女 人体艺术 gogo| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 久久狼人影院| 黑人欧美特级aaaaaa片| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 叶爱在线成人免费视频播放| 国产免费男女视频| 中亚洲国语对白在线视频| 麻豆成人av在线观看| 久久午夜亚洲精品久久| 嫩草影视91久久| 桃色一区二区三区在线观看| 久久亚洲精品不卡| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产一区二区激情短视频| 亚洲国产精品久久男人天堂| 一区二区日韩欧美中文字幕| 欧美久久黑人一区二区| av有码第一页| 欧美国产精品va在线观看不卡| 成人午夜高清在线视频 | 欧美成狂野欧美在线观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 美女 人体艺术 gogo| 成人三级黄色视频| 欧美国产日韩亚洲一区| 国产精品二区激情视频| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 国产单亲对白刺激| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 中文在线观看免费www的网站 | 欧美色视频一区免费| 18禁观看日本| 欧美丝袜亚洲另类 | 午夜福利18| 校园春色视频在线观看| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 极品教师在线免费播放| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 精品欧美国产一区二区三| 自线自在国产av| 国产单亲对白刺激| 免费av毛片视频| 怎么达到女性高潮| 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| 欧美国产精品va在线观看不卡| 最近最新免费中文字幕在线| 午夜视频精品福利| 女人被狂操c到高潮| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 91老司机精品| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲五月婷婷丁香| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 老司机福利观看| 久久天堂一区二区三区四区| 免费一级毛片在线播放高清视频| 黄频高清免费视频| 亚洲成人免费电影在线观看| 一进一出抽搐动态| av在线播放免费不卡| 观看免费一级毛片| 淫秽高清视频在线观看| 国产精品一区二区精品视频观看| 久久午夜亚洲精品久久| 免费看a级黄色片| 日本三级黄在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 免费观看精品视频网站| 免费看美女性在线毛片视频| 少妇 在线观看| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 中文字幕av电影在线播放| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 欧美成人午夜精品| 可以在线观看的亚洲视频| 亚洲国产精品999在线| 国产av一区在线观看免费| 老汉色av国产亚洲站长工具| 日韩国内少妇激情av| 久久精品91无色码中文字幕| 一区二区三区高清视频在线| 91麻豆av在线| 欧美黄色片欧美黄色片| 91九色精品人成在线观看| 中亚洲国语对白在线视频| 成人av一区二区三区在线看| 欧美成人免费av一区二区三区| 久久中文看片网| 人人妻人人看人人澡| 一级片免费观看大全| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 女人被狂操c到高潮| 欧美激情 高清一区二区三区| 99国产精品99久久久久| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲精品国产区一区二| 最近在线观看免费完整版| 国产一区二区三区视频了| 国产av又大| 国产精品综合久久久久久久免费| 国产麻豆成人av免费视频| 欧美+亚洲+日韩+国产| 婷婷丁香在线五月| 波多野结衣高清作品| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 国产成人影院久久av| 此物有八面人人有两片| svipshipincom国产片| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 成人国产综合亚洲| 日本一区二区免费在线视频| 一区福利在线观看| 可以在线观看毛片的网站| 国产黄色小视频在线观看| 999久久久精品免费观看国产| av片东京热男人的天堂| 香蕉av资源在线| 搡老熟女国产l中国老女人| 一边摸一边抽搐一进一小说| 最好的美女福利视频网| 级片在线观看| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 久久久精品欧美日韩精品| 国产视频一区二区在线看| e午夜精品久久久久久久| 一进一出好大好爽视频| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 一进一出抽搐gif免费好疼| 国产单亲对白刺激| 亚洲精品美女久久av网站| 欧美精品啪啪一区二区三区| 欧美日韩福利视频一区二区| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 国产乱人伦免费视频| 免费在线观看黄色视频的| av欧美777| 看黄色毛片网站| 欧美成人一区二区免费高清观看 | 悠悠久久av| 91麻豆av在线| 啦啦啦 在线观看视频| 亚洲av五月六月丁香网| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 他把我摸到了高潮在线观看| 在线观看舔阴道视频| 黄片大片在线免费观看| 亚洲欧美日韩无卡精品| 午夜免费鲁丝| 欧美zozozo另类| 日韩精品青青久久久久久| 高清在线国产一区| 91av网站免费观看| 国产一级毛片七仙女欲春2 | 久久精品影院6| 亚洲色图av天堂| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 在线永久观看黄色视频| 欧美乱色亚洲激情| 久9热在线精品视频| 日韩欧美一区视频在线观看| 在线观看舔阴道视频| 制服诱惑二区| 久久亚洲精品不卡| 欧美乱码精品一区二区三区| 午夜福利视频1000在线观看| 国产又爽黄色视频| 免费一级毛片在线播放高清视频| www.www免费av| 久久国产乱子伦精品免费另类| 国产99久久九九免费精品| 久久亚洲真实| 91成人精品电影| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲国产精品成人综合色| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 99久久综合精品五月天人人| 啦啦啦 在线观看视频| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| x7x7x7水蜜桃| 波多野结衣高清作品| 手机成人av网站| 夜夜夜夜夜久久久久| 亚洲国产欧洲综合997久久, | 可以在线观看的亚洲视频| 丰满的人妻完整版| 国产免费男女视频| 国产国语露脸激情在线看| 国产一卡二卡三卡精品| www日本在线高清视频| 日本一区二区免费在线视频| 国产91精品成人一区二区三区| 99国产精品一区二区三区| 可以在线观看的亚洲视频| 香蕉av资源在线|