核酸探針技術(shù)在食品檢驗(yàn)中的應(yīng)用

趙嶸

（山西省疾病預(yù)防控制中心 山西太原 030012）

1 前言

微生物泛濫不僅會(huì)出現(xiàn)多種致病菌，更會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的食品安全事故，嚴(yán)重時(shí)還會(huì)威脅人們的生命安全。核酸探針檢測(cè)技術(shù)不僅具有極高的精準(zhǔn)度，更能降低食品檢測(cè)經(jīng)費(fèi)與時(shí)間，便捷的檢測(cè)方式使其得到廣泛應(yīng)用并迅速發(fā)展。

2 核酸探針基本概述

對(duì)核酸探針這一全新檢測(cè)方式加以分析，此種檢測(cè)方式的主要部分為RNA 探針，RNA 探針帶有指示標(biāo)記，能夠與被檢測(cè)食品核苷酸序列的一段單鏈cDNA 或是cRNA 分子相互結(jié)合[1]。 在檢測(cè)過程中，主要以特異性cDNA、cRNA 與人工合成的寡核苷酸探針為主。 核酸探針應(yīng)用范圍較為廣泛，由于RNA為單鏈分子，在檢測(cè)工作中，能夠與被檢測(cè)食品靶序列迅速反應(yīng)，此類雜交反應(yīng)效率較高，具有較為顯著的應(yīng)用效果。

3 核酸探針的制備工作

在食品檢測(cè)工作中，借助基因檢測(cè)方式可以了解樣品的位置與序列。此類食品檢測(cè)方式，能夠在探針輔助下，在最短時(shí)間內(nèi)得到不同被檢測(cè)食品的基因信息，并判斷基因信息來源是否相同。要想確保檢測(cè)工作的順利開展，應(yīng)確保核酸探針充分發(fā)揮作用。在核酸探針制備工作中，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下2 項(xiàng)內(nèi)容。第一，應(yīng)根據(jù)所選擇食品，借助交叉反應(yīng)，對(duì)其中變化較為顯著的核酸片段進(jìn)行分析。 第二， 應(yīng)在制備前，明確食品內(nèi)部標(biāo)記物，對(duì)常見標(biāo)記物進(jìn)行分析。在當(dāng)前食品檢測(cè)工作中，主要通過32P、125I 以及35S 幾種同位素進(jìn)行分析，并以此為基礎(chǔ)，進(jìn)行核酸探針制備工作[2]。

4 核酸探針在當(dāng)前食品檢測(cè)工作中的具體應(yīng)用

4.1 應(yīng)用于DNA 與RNA 為靶向檢測(cè)方式

在食品檢測(cè)工作中，重點(diǎn)應(yīng)關(guān)注以下3 項(xiàng)指標(biāo)。第一，菌落總數(shù)檢測(cè)工作。 第二，大腸桿菌群和沙門菌的檢測(cè)工作。第三，霉菌、酵母與毒素的檢測(cè)工作。在這些檢測(cè)工作中，細(xì)菌來源種類多樣化。在具體檢測(cè)工作中，需結(jié)合DNA 遺傳序列，開展檢測(cè)工作。并在檢測(cè)過程中，遵循生物特異性，對(duì)其中的DNA 序列進(jìn)行分析與對(duì)比，進(jìn)而設(shè)計(jì)出合理的檢測(cè)方式。其次，以RNA 為靶向目標(biāo)的檢測(cè)試驗(yàn)。此種檢測(cè)方式，多以AccuProbe 基因?yàn)樘结榌3]，在檢測(cè)工作中借助熒光物質(zhì)，將標(biāo)記特異性單鏈作為檢測(cè)探針，應(yīng)用此種檢測(cè)方式，能夠與待測(cè)細(xì)菌中的核糖體形成RNA 互補(bǔ)，進(jìn)而形成相對(duì)穩(wěn)定的 DNA 與 RNA 雜交體[4]。 在具體檢測(cè)工作中，應(yīng)選擇適合檢測(cè)樣品的試驗(yàn)試劑，借助試劑將多余探針去除。在試驗(yàn)后續(xù)階段，可以通過發(fā)光儀器設(shè)備，做好雜交標(biāo)記工作。 借助核酸探針，以RNA 為靶向目標(biāo)的檢測(cè)方式相對(duì)簡(jiǎn)單，檢測(cè)用時(shí)較短，檢測(cè)正確率較高，應(yīng)得到重視與推廣。

4.2 核酸探針應(yīng)用于水產(chǎn)品檢測(cè)工作

隨著食品種類不斷增加，核酸探針檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)得到較為廣泛的應(yīng)用，普遍應(yīng)用于基因測(cè)序、食品檢測(cè)工作中。在以往的檢測(cè)工作中，顯微鏡檢測(cè)方式存在較大誤差，難以保證檢測(cè)結(jié)果的精確度。再加上不規(guī)范操作的影響，或是使用檢測(cè)試劑不合理，缺乏檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)，這些因素都會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。 因此，可以借助核酸探針檢測(cè)方式，彌補(bǔ)傳統(tǒng)檢測(cè)方式的不足，應(yīng)用科學(xué)檢測(cè)原理，不斷提升檢測(cè)結(jié)果的可信度。例如，在水資源與水產(chǎn)品檢測(cè)工作中，應(yīng)以核酸檢測(cè)為基礎(chǔ)，對(duì)導(dǎo)致腹瀉的大腸桿菌進(jìn)行檢測(cè)，在實(shí)際檢測(cè)工作中，可以借助ST 基因片段，判斷水產(chǎn)品中是否含有此類物質(zhì)。為確保相關(guān)水產(chǎn)品質(zhì)量與安全，應(yīng)在水產(chǎn)品銷售前，對(duì)水產(chǎn)品進(jìn)行檢測(cè)。在水產(chǎn)品檢測(cè)工作中，可以應(yīng)用核酸探針檢測(cè)方式，對(duì)水產(chǎn)品存在的過量微生物、細(xì)菌以及蠕蟲進(jìn)行檢測(cè)與分析。 結(jié)合核酸探針檢測(cè)所得技術(shù)數(shù)據(jù)，明確水產(chǎn)品中的生物特點(diǎn)，才能有效鑒別其中的有害成分，最終提升水產(chǎn)品檢測(cè)質(zhì)量。 要想維護(hù)水產(chǎn)品市場(chǎng)穩(wěn)定發(fā)展，為消費(fèi)者提供更為優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品，勢(shì)必要做好水產(chǎn)品檢測(cè)工作。

4.3 核酸探針應(yīng)用于肉制品檢測(cè)

在肉制品檢測(cè)工作中，常會(huì)檢測(cè)出牛巴貝斯蟲，此種寄生蟲具有較高傳染性，牛巴貝斯蟲病為原蟲病，多由泰勒焦蟲感染所致。 由于此類寄生蟲寄生于病畜血細(xì)胞中，其檢測(cè)難度較大，為保證食品安全，禁止病畜出現(xiàn)在市場(chǎng)中，應(yīng)借助DNA 探針檢測(cè)方式，以核酸探針檢測(cè)為主，并結(jié)合皂素處理方式，解決不能回收全部蟲體的問題，進(jìn)而提升核酸探針檢測(cè)的有效性和靈敏度。 首先，在檢測(cè)工作中，應(yīng)對(duì)畜禽血樣進(jìn)行收集與處理，將血樣置于37℃水浴處理，確保血樣融化。吸取 100 μL 血樣，在血樣中加水至 500 μL，冰浴10 min，以3 000 r/min 進(jìn)行離心處理，離心時(shí)間10 min。當(dāng)血樣中的變性血紅蛋白逐漸沉淀后，將上述被測(cè)物質(zhì)轉(zhuǎn)移至另一離心管中。與此同時(shí)，應(yīng)對(duì)正常畜禽血液進(jìn)行處理，借助健康畜禽白細(xì)胞對(duì)被測(cè)樣品進(jìn)行冷藏與稀釋。每個(gè)稀釋后的血樣，相當(dāng)于原血樣中的50 μL。 對(duì)這一血樣加以分析，稀釋過后的病畜血樣蟲量較大。因此，為保證檢測(cè)結(jié)果精確度，在本次檢測(cè)工作中，最終確定檢測(cè)稀釋度為500 μL。

在血樣處理工作中，應(yīng)采取以下3 種方式，對(duì)血樣進(jìn)行處理。 （1）皂素處理方法，在上述血樣中加入皂素，將皂素濃度控制在0.15%，并在處理完成后，在其中加入 10 mg 氯化鈉（NaCl）與 0.5 mg 乙二胺四乙酸（EDTA）。 將血樣濃度控制在 150 mM 與 10 mM中。在后續(xù)試驗(yàn)中，將血樣在室內(nèi)放置15 min，在1×104r/min 下進(jìn)行離心處理，并將離心時(shí)間控制在5 min。棄上相，并加入50 μL 去離子水，做好沉淀處理工作。 （2）可以借助乙酸處理方式，在上述稀釋液中加入細(xì)胞裂解液[5]，并補(bǔ)加 10 mg NaCl，在沉淀過程中，借助 TEPH7.6 懸浮液，5 000 rpm 離心 5 min，棄上相，采取重復(fù)洗滌方式，得到去離子的懸浮沉淀物質(zhì)。 （3）蟲體消化方式，在提取蟲體 DNA 后，應(yīng)用乙醇過濾，借助離心方式，收取蟲體DNA。 在完成上述步驟后，借助點(diǎn)雜交方式進(jìn)行試驗(yàn)，并對(duì)核酸探針檢測(cè)結(jié)果加以分析，得到精準(zhǔn)檢驗(yàn)結(jié)果，保證食品安全與質(zhì)量。

5 討論

食品安全問題尤為重要，近些年，食品安全問題頻發(fā)，嚴(yán)重影響人們的健康與生活。在當(dāng)前食品檢測(cè)過程中，常見的是微生物污染問題，應(yīng)借助核酸探針檢測(cè)方式，及時(shí)發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品內(nèi)部存在的問題，從源頭上加以管控，最大限度降低質(zhì)量問題，為更多食品安全檢測(cè)工作的開展打下堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。