外泌體在惡性腫瘤中的研究進(jìn)展

鄭玉軍 姜巍 陳東妍 王雷 李顏君 代璐璐 黃磊 王明吉

生物體內(nèi)所有細(xì)胞都是通過(guò)直接接觸或者由細(xì)胞因子、趨化因子等分泌蛋白介導(dǎo)進(jìn)行信息傳遞。近年來(lái)，作為擔(dān)任這種細(xì)胞間信息傳遞的新因子，細(xì)胞外囊泡（extracellular vesicles, EVs）受到了大家的關(guān)注?？茖W(xué)家發(fā)現(xiàn)，EVs是由細(xì)胞分泌的具有磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)的囊泡，能夠通過(guò)其攜帶的生物大分子（蛋白質(zhì)、RNA、DNA及細(xì)胞因子）調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)特性，參與細(xì)胞的生理和病理過(guò)程[1,2]。根據(jù)其生物學(xué)表型主要分為3種類型：微泡、凋亡小體和外泌體。微泡是由直接向外的細(xì)胞膜出芽形成，凋亡小體是由凋亡細(xì)胞膜裂解的碎片構(gòu)成，外泌體則起源于細(xì)胞的內(nèi)吞過(guò)程。外泌體在過(guò)去30年中對(duì)細(xì)胞生物學(xué)發(fā)展具有著革命性貢獻(xiàn)。外泌體通過(guò)調(diào)節(jié)細(xì)胞與細(xì)胞之間的各種生物過(guò)程，已成為細(xì)胞間通訊的關(guān)鍵介質(zhì)，由于其獨(dú)特的結(jié)構(gòu)及生物特性，引起學(xué)者們廣泛關(guān)注。

本文針對(duì)外泌體生物結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及其在惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展和臨床診斷治療中的作用進(jìn)行綜述。

1 外泌體的結(jié)構(gòu)及生物學(xué)特性

外泌體是EVs一個(gè)重要的亞群，最早可追溯到1983年，由Johnstone等[3]在研究網(wǎng)織紅細(xì)胞分化形成成熟紅細(xì)胞的過(guò)程中提出，并于1987年在超速離心下正式得到這種囊泡，命名為外泌體，是由細(xì)胞內(nèi)多泡體與細(xì)胞膜融合而釋放到細(xì)胞外、直徑40 nm-100 nm、密度1.13 g/mL-1.19 g/mL的膜性囊泡狀小體[4]。形態(tài)呈扁形或球形小體，有些為杯狀；在體液中以球形為主。腫瘤細(xì)胞中過(guò)度表達(dá)的某些蛋白質(zhì)在外泌體中也可能會(huì)出現(xiàn)，根據(jù)不同的細(xì)胞來(lái)源，外泌體可表達(dá)獨(dú)特的生物蛋白[5]，腫瘤細(xì)胞外泌體（tumor derived exosomes, Tex）攜帶大量的mRNA及微小RNA（microRNA,miRNA），在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。外泌體中DNA的相關(guān)報(bào)道較少。

外泌體最初被認(rèn)為是一種用來(lái)清除細(xì)胞中廢物的“垃圾袋”，在生理及病理狀態(tài)下，可以由各種細(xì)胞包括免疫細(xì)胞、干細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞主動(dòng)分泌到細(xì)胞外，并可將源自“母體”細(xì)胞的大量生物分子運(yùn)載至其他細(xì)胞，與腫瘤的發(fā)病機(jī)制密切相關(guān)。其生物學(xué)特性包括：第一，由于其體積微小，能夠避開單核巨噬細(xì)胞對(duì)其的吞噬，且能穿過(guò)血管壁到細(xì)胞外基質(zhì)，因而廣泛存在于人體各種體液中，包括血液、唾液、尿液、腦脊液及胸腹水；其次，由于其具有磷脂雙分子層結(jié)構(gòu)，生物學(xué)相對(duì)穩(wěn)定，難于降解。外泌體與靶細(xì)胞間的信息傳遞主要通過(guò)3條途徑實(shí)現(xiàn)：受體-配體相互作用；質(zhì)膜直接融合；吞噬作用內(nèi)吞。腫瘤細(xì)胞較正常細(xì)胞分泌更多外泌體，分析Tex成分可以反應(yīng)其“母體”細(xì)胞的分化及功能狀態(tài)，其大小及表面蛋白具有高度異質(zhì)性，即使是由同一個(gè)細(xì)胞分泌，因?yàn)椴煌只癄顟B(tài)，Tex成分亦可不同，這種獨(dú)特的分子特征用于與不同腫瘤及正常細(xì)胞的鑒別。由于外泌體在腫瘤微環(huán)境中的細(xì)胞間通訊作用，對(duì)于腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移、免疫逃避及耐藥性等均發(fā)揮重要作用。

2 外泌體的檢測(cè)

外泌體相關(guān)檢測(cè)目前包括分離純化、物理特性鑒定及下游功能研究的分析。研究腫瘤患者體液Tex，必須從大的EVs及正常細(xì)胞外泌體中分離出來(lái)。需要有效的方法捕獲Tex并進(jìn)行定量分析。外泌體的分離純化技術(shù)主要包括超速離心法、密度梯度離心法、色譜法、免疫磁珠法等，在正常細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)基上清液、血液、唾液等體液中檢測(cè)并分離、純化外泌體。外泌體的物理特性鑒定技術(shù)主要包括電鏡觀察、動(dòng)態(tài)光散射及納米微粒追蹤分析以及可調(diào)諧電阻脈沖傳感檢測(cè)技術(shù)。外泌體蛋白質(zhì)的分析技術(shù)主要有酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）、蛋白印跡和質(zhì)譜分析等；核酸的分析技術(shù)主要有二代測(cè)序、基因芯片、實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerase chain reaction, PCR）等。隨著外泌體參與腫瘤發(fā)生發(fā)展的報(bào)道增多，通過(guò)Tex中攜帶的RNA及蛋白質(zhì)等分子信息進(jìn)行診斷和預(yù)后判斷成為新的研究熱點(diǎn)。

3 外泌體在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用

3.1 外泌體和腫瘤微環(huán)境 外泌體在調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境中具有重要作用，包括改變其他細(xì)胞的生物學(xué)行為、免疫調(diào)節(jié)和促血管生成作用等?？茖W(xué)家們發(fā)現(xiàn)，在很多的腫瘤組織中浸潤(rùn)著正常的免疫細(xì)胞，而臨床認(rèn)為慢性炎癥會(huì)增加發(fā)生腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)。同時(shí)，成纖維細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等細(xì)胞構(gòu)成的腫瘤微環(huán)境，有助于腫瘤細(xì)胞的增殖。此外，對(duì)腫瘤異質(zhì)性的研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤的異質(zhì)性包括腫瘤細(xì)胞基因異質(zhì)性、腫瘤微環(huán)境的異質(zhì)性及腫瘤納米微環(huán)境的異質(zhì)性。Tex具有促腫瘤及抗腫瘤形成的作用，而基質(zhì)細(xì)胞來(lái)源的外泌體亦有促進(jìn)或限制腫瘤進(jìn)展的作用。

關(guān)于腫瘤來(lái)源外泌體對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞（endothelial cells,ECs）作用的大多數(shù)研究都集中在促血管生成作用上。例如，來(lái)自膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的細(xì)胞外泌體會(huì)刺激ECs的增殖。經(jīng)腫瘤轉(zhuǎn)染的胰腺細(xì)胞系釋放的外泌體會(huì)刺激ECs小管生成。然而，越來(lái)越多的證據(jù)表明，腫瘤細(xì)胞還通過(guò)與ECs的直接作用或通過(guò)外泌體破壞了血管的完整性。這種血管完整性的破壞可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞在遠(yuǎn)處擴(kuò)散和生長(zhǎng)。Lin等[6]的研究認(rèn)為，腫瘤細(xì)胞來(lái)源的外泌體通過(guò)觸發(fā)ECs內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激并破壞其完整性來(lái)促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移，而這種基于外泌體的作用不依賴于miRNA。

Chen等[7]的研究顯示：外泌體長(zhǎng)鏈非編碼R NA MRPL23-AS1可促進(jìn)涎腺腺樣囊性癌（salivary adnoid cystic carcinoma, SACC）的肺轉(zhuǎn)移，MRPL23-AS1通過(guò)與zeste同源物2（Zeste homolog 2, EZH2）增強(qiáng)子形成RNA-蛋白質(zhì)復(fù)合物來(lái)正向調(diào)節(jié)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial to mesenchymal transition, EMT）。MRPL23-AS1增加EZH2和H3K27me3在E-鈣黏蛋白啟動(dòng)子區(qū)域的結(jié)合。此外，從SACC患者血漿中分離的外泌體中MRPL23-AS1水平較高，外泌體MRPL23-AS1以“外泌體分泌”方式影響肺微血管ECs。富含MRPL23-AS1的外泌體增加了微血管的通透性，并促進(jìn)了體內(nèi)SACC的肺轉(zhuǎn)移。

腫瘤組織內(nèi)乏氧狀態(tài)下釋放的外泌體，刺激周圍血管形成，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移。惡性黑色素瘤外泌體的miRNA被ECs吸收后，激活JAK-STAT信號(hào)通路促進(jìn)腫瘤血管生成及血管滲透性增加[8]。Tex亦可破壞ECs結(jié)構(gòu)的完整性，外泌體miR-105下調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞的緊密結(jié)合蛋白ZO-1，從而提高血管的滲透性，促進(jìn)腫瘤播散[9]。如肺癌細(xì)胞外泌體（lung cancer cell-derived exosome, LCC-exosome）中的miR-210通過(guò)調(diào)節(jié)基質(zhì)細(xì)胞中酪氨酸受體激酶A3（Ephrin A3）的含量，促進(jìn)腫瘤血管的生成[10]；而LCC-exosome中的miR-23a則可以通過(guò)激活脯氨酰羥化酶（prolylhydroxylase）及抑制緊密結(jié)合蛋白ZO-1來(lái)促進(jìn)肺癌的生血管作用[11]。

腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞（tumor associated fibroblasts,TAFs）是許多腫瘤，包括結(jié)腸、胰腺和乳腺腫瘤微環(huán)境中最突出的細(xì)胞類型，并在腫瘤間質(zhì)相互作用中發(fā)揮關(guān)鍵作用。TAFs形成的內(nèi)在機(jī)制似乎與成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞（通過(guò)EMT）、周細(xì)胞、骨髓循環(huán)成纖維細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞分化的肌成纖維細(xì)胞有關(guān)[12]。Tex分泌多種分子誘導(dǎo)成纖維細(xì)胞向肌纖維細(xì)胞分化，肌成纖維細(xì)胞則可以調(diào)節(jié)腫瘤微環(huán)境（如細(xì)胞外基質(zhì)的降解和細(xì)胞外透明質(zhì)酸產(chǎn)量增加）促進(jìn)癌細(xì)胞的侵襲[13]。富含轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1（transforming growth factor β1, TGFβ1）蛋白的Tex可以將靜息狀態(tài)的成纖維細(xì)胞活化形成肌成纖維細(xì)胞，從而促進(jìn)腫瘤血管新生以及腫瘤的生長(zhǎng)，而單純的可溶性TGFβ1雖然可以激活成纖維細(xì)胞，但卻沒(méi)有促進(jìn)血管新生和腫瘤生長(zhǎng)的作用[14]。反之，TAF源性外泌體亦可促進(jìn)腫瘤進(jìn)展，Hu等[15]發(fā)現(xiàn)TAF外泌體與結(jié)直腸癌干細(xì)胞的化療耐藥有關(guān)，Boelens等[16]提示TAF外泌體增加乳腺癌細(xì)胞的治療耐藥。

3.2 外泌體和腫瘤免疫 由于Tex在腫瘤微環(huán)境中的異質(zhì)性，其免疫活性從抗原呈遞到免疫分化[17,18]是復(fù)雜動(dòng)態(tài)的，具有雙重作用，既可以發(fā)揮抗腫瘤免疫的作用，又可幫助腫瘤細(xì)胞免疫逃逸。

Wolfers等[19]發(fā)現(xiàn)，Tex可將攜帶的腫瘤相關(guān)抗原轉(zhuǎn)運(yùn)至樹突細(xì)胞（dendritic cells, DCs），DCs攝取抗原后，引發(fā)CD8+T細(xì)胞依賴的抗腫瘤免疫效應(yīng)，亦可經(jīng)彈力蛋白HSP70呈遞直接激活自然殺傷細(xì)胞（natural killer, NK）。此外，Tex轉(zhuǎn)運(yùn)的miRNA可能像配體一樣通過(guò)結(jié)合Toll樣受體（Toll-like receptor, TLR）觸發(fā)炎癥反應(yīng)[20]。盡管上述外泌體的抗腫瘤免疫活性，但其亦通過(guò)以下幾個(gè)方式誘導(dǎo)免疫逃逸：①誘導(dǎo)IL-6表達(dá)抑制骨髓DCs祖細(xì)胞，阻止DCs的成熟[21]；②下調(diào)NK細(xì)胞亞群（group 2, member D,NKG2D），抑制NK細(xì)胞的增殖及功能。Lundholm等[22]發(fā)現(xiàn)，前列腺癌細(xì)胞外泌體可以下調(diào)CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的活化受體；③包膜表面含有腫瘤壞死因子超家族配體：腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor, TNF）、凋亡相關(guān)因子配體（factor related apoptosis ligand, FasL）和凋亡誘導(dǎo)配體（TNF-related apoptosis-inducing ligand receptor, TRAIL）誘導(dǎo)Fas+T細(xì)胞凋亡[23]；④控制調(diào)節(jié)及效應(yīng)T細(xì)胞（T regulatory cells, Tregs）的轉(zhuǎn)錄，研究[24]表明Tex包含多種對(duì)免疫細(xì)胞有抑制功能的生物分子，同時(shí)可以誘導(dǎo)效應(yīng)T細(xì)胞轉(zhuǎn)化為Treg細(xì)胞，并促進(jìn)Treg細(xì)胞的擴(kuò)增。肺癌細(xì)胞起源的miRNA-214可以促進(jìn)Treg細(xì)胞的擴(kuò)增，同時(shí)提高Treg細(xì)胞內(nèi)IL-10的水平，而miRNA-214很可能依賴外泌體途徑而發(fā)揮作用[25]。

總之，我們期待外泌體的抗腫瘤活性，深入了解Tex可有助于研發(fā)新的有效的抗腫瘤治療。目前正在進(jìn)行的臨床研究包括應(yīng)用DC源性外泌體激活腫瘤（如非小細(xì)胞肺癌）患者抗腫瘤免疫[26]。

3.3 外泌體和腫瘤轉(zhuǎn)移 腫瘤在轉(zhuǎn)移過(guò)程中，外泌體通過(guò)纖維連接蛋白促進(jìn)細(xì)胞骨架重塑、侵襲性偽足形成、遷徙性增加，以利于腫瘤的轉(zhuǎn)移。再通過(guò)膜型基質(zhì)金屬蛋白酶（membrane type matrix metalloprotease, MT1-M M P）促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的分解，使細(xì)胞外基質(zhì)及基底膜重塑、血管新生及血管滲透，來(lái)促進(jìn)腫瘤轉(zhuǎn)移。此外，研究[27]發(fā)現(xiàn)循環(huán)血液中的外泌體富含整合素二聚體，可預(yù)測(cè)乳腺癌和胰腺癌細(xì)胞在體內(nèi)轉(zhuǎn)移的親器官性，αvβ5整合素決定了對(duì)肝臟、α6β4·α6β1整合素決定了對(duì)肺部的指向性。2008年，A1-Nedawi等[28]首次發(fā)現(xiàn)表皮生長(zhǎng)因子受體vIII變異體（epithelial growth factor receptor variant III, EGFRvIII）的膠質(zhì)瘤細(xì)胞，可以通過(guò)釋放富含突變受體蛋白EGFRvIII的外泌體，賦予野生型膠質(zhì)瘤細(xì)胞更強(qiáng)的侵襲能力。富含EGFRvIII的外泌體進(jìn)入野生型膠質(zhì)瘤細(xì)胞后，激活EGFRvIII調(diào)節(jié)的下游通路，如VEGF、BCLXLp27，從而增強(qiáng)受體細(xì)胞侵襲能力。應(yīng)翔等[29,30]研究表明，卵巢上皮性腫瘤來(lái)源的外泌體在細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)抑制蛋白3/信號(hào)傳導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子3（suppressor of cytokine signaling 3/signal transducer and activator of transcription,SOCS3/STAT3）旁路的參與下，能夠富集miR-222-3p并傳遞給巨噬細(xì)胞M2表型的分化，促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞的遷移和轉(zhuǎn)移。沈琳[31]團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)，胃癌患者的惡性腹水來(lái)源的外泌體能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞腹膜擴(kuò)散，并揭示了這些外泌體的miR NA表達(dá)特征。

總之，外泌體通過(guò)激活腫瘤相關(guān)信號(hào)通路、誘導(dǎo)免疫耐受、重塑細(xì)胞外基質(zhì)、增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞侵襲性和調(diào)控腫瘤微環(huán)境促進(jìn)腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

4 外泌體在腫瘤中的臨床應(yīng)用

根據(jù)“腫瘤細(xì)胞會(huì)分泌更多的外泌體”、“外泌體中含有腫瘤特異性抗原，及外泌體能運(yùn)輸這些抗原”等的研究，外泌體作為一種新的診斷和治療的靶標(biāo)受到廣泛的關(guān)注。臨床上，檢測(cè)外泌體用于疾病的早期篩查、無(wú)創(chuàng)診斷、療效監(jiān)控、輔助用藥以及作為腫瘤治療的藥物載體。

4.1 腫瘤的診斷 Tex作為液體活檢廣泛用于腫瘤的診斷，包括前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、腦膠質(zhì)瘤及惡性黑色素瘤。外泌體中特異性核酸如EGFRvIII，是腦膠質(zhì)瘤的可靠標(biāo)志物[28]，血清中miR-21可診斷食管晚期鱗狀細(xì)胞癌[32]，血清miR-141水平升高提示轉(zhuǎn)移性前列腺癌[33]，分析尿液中miR譜可以診斷膀胱癌[34]。Munagala等[35]在對(duì)小鼠模型研究中發(fā)現(xiàn)，肺癌復(fù)發(fā)的小鼠腫瘤細(xì)胞中miRNA-21和miRNA-155水平相較于原發(fā)肺癌小鼠明顯上調(diào)，這兩種miRNA在復(fù)發(fā)肺癌小鼠外泌體中含量也有所增加。Cazzoli等[36]在肺腺癌患者的外周血液中發(fā)現(xiàn)miR-378、miR-502-5p、miR-629、miR-200b-5p和miR-100水平較肺部肉芽腫和健康患者明顯升高。外泌體DNA檢測(cè)可以揭示腫瘤特異性突變[37]，如胰腺導(dǎo)管腺癌（pancreatic ductal adenocarcinoma, PDAC）驅(qū)動(dòng)基因突變。外泌體蛋白亦可用于腫瘤的檢測(cè)，如肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體（hepatocyte growth factor receptor, MET）及磷酸化MET（Tyr1349）在III期、IV期惡性黑色素瘤中比健康人群明顯升高[8]。孫楠[38]發(fā)現(xiàn)外泌體中14-3-3ζ蛋白在肺鱗癌診斷中顯示出較高的靈敏度和特異度，有望成為肺鱗癌診斷的標(biāo)志物。2015美國(guó)MD安德森癌癥中心的研究發(fā)現(xiàn)通過(guò)大量的胰腺癌患者血清樣本分析發(fā)現(xiàn)，相比正常人，胰腺癌患者血清中磷脂酰肌醇蛋白聚糖1（glypican-1, GPC1）陽(yáng)性外泌體顯著增高。進(jìn)一步研究[39]發(fā)現(xiàn)，GPC1陽(yáng)性外泌體在早期胰腺癌患者的血清中豐度顯著高于正常人群，且具有較高的準(zhǔn)確性和敏感性。另外，不同惡性程度的腫瘤細(xì)胞分泌的外泌體成分也不同。比如，與低度惡性漿液性卵巢癌細(xì)胞來(lái)源的外泌體相比，高度惡性漿液性卵巢癌來(lái)源的外泌體更能促進(jìn)腫瘤血管生成[40]。有研究[41]發(fā)現(xiàn)血漿樣本中EVs miR NA譜可以鑒別肺磨玻璃結(jié)節(jié)的良惡性。

4.2 外泌體在腫瘤治療中的作用 基于外泌體在腫瘤微環(huán)境及發(fā)生發(fā)展中的作用，外泌體在抗癌治療方面具有重大意義。一方面，Tex攜帶多種腫瘤相關(guān)因子，可以作為治療靶點(diǎn)，通過(guò)抑制外泌體的分泌或消除血液循環(huán)中的外泌體治療腫瘤。比如抑制TexmiRs對(duì)上皮細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)，可以減少腫瘤血管形成及轉(zhuǎn)移[42]；另一方面，外泌體可以作為轉(zhuǎn)運(yùn)各種抗癌藥物（如miRNAs和siRNAs等）的載體。外泌體作為藥物載體有多個(gè)優(yōu)點(diǎn)：①外泌體來(lái)自自體腫瘤細(xì)胞，比人工轉(zhuǎn)運(yùn)載體具有更少的免疫原性；②外泌體有磷脂雙分子層，可直接與靶細(xì)胞膜融合，從而提高包裹的藥物在細(xì)胞中的內(nèi)化；③外泌體具有較小的尺寸，避免被單核吞噬細(xì)胞吞噬，并促進(jìn)其在腫瘤血管中的外滲及在腫瘤組織中的擴(kuò)散。

另外，外泌體作為抗腫瘤治療的納米載體，已經(jīng)成功運(yùn)載基因類藥物、抗癌藥物、抗炎藥物及其他類型藥物，其中miRNA在基因類藥物運(yùn)輸中應(yīng)用最廣泛。miR-122是已知的肝細(xì)胞癌（hepatocellular carcinoma, HCC）特異性的抑癌基因[43]。HCC對(duì)傳統(tǒng)的化療藥物有著較高的耐藥性，因此，Lou等[44]應(yīng)用間充質(zhì)干細(xì)胞（mesenchymal stem cell,MSC）來(lái)源的外泌體運(yùn)輸miR-122，在體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)分別證實(shí)了miR-122通過(guò)改變其靶基因的表達(dá)，增加了HCC細(xì)胞的自噬和細(xì)胞周期的阻滯，抑制了HCC的增殖。相比較于索拉菲尼的單獨(dú)給藥，聯(lián)合miR-122給藥的抑制效果更明顯，增加了HCC的化療敏感性。另外，Pascucci等[45]將高濃度的紫杉醇（paclitaxel, PTX）加入到骨髓細(xì)胞來(lái)源的MSC培養(yǎng)中，MSC攝取并分泌含有PTX的外泌體，通過(guò)外泌體將PTX運(yùn)輸至人胰腺癌細(xì)胞中，體內(nèi)、外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果均表明外泌體可有效地運(yùn)輸PTX靶向至腫瘤細(xì)胞，并發(fā)揮其抗癌作用。

4.3 腫瘤外泌體和治療耐藥 研究[46]發(fā)現(xiàn)從耐藥癌細(xì)胞中分離出的外泌體，可以將耐藥P-糖蛋白轉(zhuǎn)移到藥物敏感細(xì)胞中，從而傳播耐藥性。化療后患者Tex中可見(jiàn)到順鉑及阿霉素[47,48]。另外，外泌體攜帶特定的miRs調(diào)控細(xì)胞周期，使敏感的癌細(xì)胞發(fā)生耐藥并且誘導(dǎo)抗凋亡。試驗(yàn)[49]發(fā)現(xiàn)，LCC來(lái)源的外泌體接觸順鉑后，可以加速未接觸順鉑的LCC對(duì)順鉑產(chǎn)生耐藥性。進(jìn)一步的研究[50]表明，這種現(xiàn)象的產(chǎn)生與LCC來(lái)源的外泌體中的某些miRNAs密切相關(guān)。根除這些外泌體可以控制癌細(xì)胞的侵襲。此外，纖維母細(xì)胞外泌體通過(guò)激活STAT1依賴的抗病毒及Notch3信號(hào)通路，使乳腺癌細(xì)胞對(duì)放化療耐藥[16]。對(duì)多烯紫杉醇或阿霉素耐藥的乳腺癌細(xì)胞，從其培養(yǎng)液中分離出的外泌體，可以使對(duì)化療藥物敏感的人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7也產(chǎn)生耐藥性[51]。HER-2過(guò)表達(dá)乳腺癌患者HER-2陽(yáng)性外泌體能夠抑制曲妥珠單抗的抗增殖活性[52]；因此，清除HER-2陽(yáng)性外泌體，可恢復(fù)曲妥珠單抗的抗腫瘤活性[53]。清除腫瘤患者血中外泌體亦可減少免疫耐受[54]。

5 展望

將來(lái)的研究聚焦在癌性外泌體的異質(zhì)性以便更好的了解其擴(kuò)增克隆，從而進(jìn)行針對(duì)性治療。血清外泌體RNA及DNA（液體活檢），將用于腫瘤的早期診斷，伴隨蛋白組學(xué)分析將提供惡性腫瘤在體內(nèi)的演變過(guò)程。應(yīng)用外泌體運(yùn)載藥物提供了一個(gè)新的治療模式。目前對(duì)于外泌體的研究正如火如荼，相信在不久的將來(lái)我們會(huì)了解外泌體在健康及疾病中更多的功能。不可否認(rèn)，目前外泌體研究的整個(gè)流程中成本都很高，從一定程度上限制了它的研究和臨床應(yīng)用，但是相信隨著外泌體標(biāo)準(zhǔn)化分離提純及檢測(cè)平臺(tái)的建立，外泌體在腫瘤的診斷和治療領(lǐng)域?qū)⒕哂蟹浅V闊的應(yīng)用前景。