烏蕨的不同提取組分治療大鼠急性咽喉炎模型初步研究*

陳樂 胡燕珍 吳先昊 何小群 張媛媛 趙詩云

（江西省中醫(yī)藥研究院 南昌330046）

急性咽炎是耳鼻喉科常見疾病，病變部位為咽黏膜，是一種可累及黏膜下及淋巴組織的急性炎癥，常繼發(fā)于急性鼻炎或急性扁桃體炎癥之后[1]。烏蕨[Stenoloma chusanum（Linn.）Ching]是鱗始蕨科（陵始蕨科）烏蕨屬植物[2]，又名大葉金花草、大金花草、小葉野雞尾、烏韭、雉雞尾、蜢蚱參、細葉鳳凰尾等，有清熱解毒、止血生肌、活血利濕等功效；主治感冒發(fā)熱、癰瘡腫毒、咳嗽、腸炎、濕熱帶下、肝炎、疼腮、口瘡、燙火傷、毒傷、狂犬咬傷、皮膚濕疹、吐血、尿血、便血、痢疾和外傷出血[3]。在第四次全國中藥資源普查中，我們的普查隊員發(fā)現(xiàn)，在民間采用烏蕨治療咽喉炎效果很好。我院工作人員和部分普查隊員出現(xiàn)咽喉炎癥后親身試用，發(fā)現(xiàn)烏蕨鮮品或干品代茶飲治療咽喉炎的效果的確優(yōu)異。本研究對烏蕨治療急性咽喉炎的有效部位進行了初步研究?，F(xiàn)報道如下：

1 材料與方法

1.1 動物 Wistar大鼠50只，180～220 g，雌雄各半，購入后在動物房分籠飼養(yǎng)。購于江西中醫(yī)藥大學實驗動物中心，許可證號為SYXK（贛）2014-0008。

1.2 受試藥與試劑 烏蕨藥材由我院中藥資源普查隊成員2018年8～9月在江西省安義縣、上饒廣豐區(qū)等地采集，清洗、干燥后備用。取400 g干燥樣品，剪碎，加水煎煮2次，濃縮至400 ml，分別用正丁醇和乙酸乙酯萃取得到正丁醇組分、乙酸乙酯組分和水提取剩余組分，減壓回收有機溶劑后，再將各組分的干浸膏分別用0.5%羧甲基纖維素鈉和生理鹽水稀釋成含生藥4 g/ml的溶液，裝入喉頭噴霧器中備用。25%氨水、蒸餾水均為自制。

1.3 實驗儀器 喉頭噴霧器（江蘇平安醫(yī)療器械有限公司）；奧林巴斯BX53顯微鏡；2 000 ml梨形分液漏斗；TLS-2000A電子秤（上海醫(yī)療器械集團）。

1.4 實驗方法

1.4.1 治療組 將15%的氨水裝入喉頭噴霧器內，于第1～3天上午、下午，各噴大鼠咽部1次，3撳/次；每日觀察所有個體的咽部情況及狀態(tài)。造模成功標準：觀察到大鼠咽部黏膜呈暗紅色，光澤度欠佳，黏膜分泌物增加。第4天開始，用制備好的各組分溶液分次進行噴霧治療，均給藥10 ml/d，治療4 d后，第10天處死后，取咽部黏膜及其下組織作病理切片，觀察超微結構。

1.4.2 模型組 第1～3天上午、下午，用15%的氨水各噴其咽部1次，每次用噴霧器噴3撳；每日觀察大鼠的咽部情況及狀態(tài)。造模成功標準：觀察到大鼠咽部黏膜呈暗紅色，光澤度欠佳，黏膜分泌物增加。第4天開始，不再噴霧，讓其自然恢復，第10天處死后，取咽部黏膜及其下組織作病理切片，觀察超微結構[4～5]。

1.4.3 空白組 第1～9天上午、下午，分別用噴霧器噴生理鹽水1次，10 ml/d；第10天處死后，取咽部黏膜及其下組織作病理切片，觀察超微結構。

1.5 觀察指標 比較各組大鼠炎細胞浸潤程度和咽組織黏膜上皮增生程度的病理評分。炎細胞浸潤程度判定標準如下，正常：無炎細胞浸潤，計0分；基本正常：炎細胞浸潤偶見，計1分；輕度：炎細胞浸潤散在，計2分；重度：大量炎細胞浸潤，計3分。黏膜上皮增生程度判定標準如下，正常：咽組織黏膜上皮無增生，計0分；基本正常：咽組織黏膜上皮偶見增生，計1分；輕度：咽組織黏膜上皮部分增生，計2分；重度：咽組織黏膜上皮明顯增生，計3分[6～7]。

1.6 統(tǒng)計學處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件對評分數(shù)據(jù)進行處理，計量資料以（±s）表示，采用t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

空白組大鼠咽部組織的黏膜上皮無增生，無炎細胞浸潤；乙酸乙酯組和水提取剩余組黏膜上皮細胞增生及炎細胞浸潤程度積分顯著低于模型組，差異顯著，P＜0.05。見表1。

表1 各組黏膜上皮細胞增生及炎細胞浸潤程度積分比較（分，±s）

表1 各組黏膜上皮細胞增生及炎細胞浸潤程度積分比較（分，±s）

注：與模型組相比較，*P＜0.05。

組別 n 黏膜上皮細胞增生積分 炎細胞浸潤程度積分空白組模型組乙酸乙酯組正丁醇組水提取剩余組10 10 10 10 10 0.34±0.05 2.45±0.45 1.56±0.24*2.33±0.03 1.48±0.32*0.00±0.00 1.72±0.75 0.93±0.53*1.61±0.48 0.87±0.57*

3 討論

急性咽炎是一種常見的耳鼻喉科疾病，易反復發(fā)作，給患者帶來不適感。在我院承擔的第四次全國中藥資源普查中，發(fā)現(xiàn)在民間常采用烏蕨治療咽喉炎。我院工作人員和部分普查隊員出現(xiàn)咽喉炎癥后親身試用，發(fā)現(xiàn)烏蕨鮮品或干品代茶飲治療咽喉炎的效果的確優(yōu)異。國內已經(jīng)有關于烏蕨的抗炎作用的研究，蔡建秀等[8]研究發(fā)現(xiàn)，烏蕨總黃酮及水提液均能減輕二甲苯致小鼠的耳腫脹，縮短出血時間。陳明等[9]研究表明，烏蕨提取物可顯著抑制冰醋酸導致的小鼠腹腔毛細血管通透性增高，顯著降低小鼠血清中環(huán)氧化酶-2（COX-2）、前列腺素E2（PGE2）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）和一氧化氮（NO）水平。筆者課題組在之前的研究中也對烏蕨、金粉蕨和骨碎補等三種蕨類的抗炎效果進行了初步研究，發(fā)現(xiàn)烏蕨水煎煮液有抗炎的效果。但是，關于烏蕨治療咽喉炎的研究尚未見報道，本研究在前期基礎研究和部分普查隊員的親身嘗試經(jīng)驗的基礎上，采用大鼠急性咽喉炎模型對烏蕨的抗咽喉炎效果進行了初步研究。結果顯示，烏蕨乙酸乙酯組分和水提取剩余組分可顯著改善大鼠急性咽喉炎癥狀。