淺談片仔癀保肝作用研究

陳志亮

中藥片仔癀因其藥理作用廣泛,療效明顯,毒副作用小,著眼于整體調(diào)節(jié),具有多層次,多靶點(diǎn)的優(yōu)點(diǎn),廣泛應(yīng)用于保肝護(hù)肝。近年來,中醫(yī)藥治療肝病研究日益深入,大量實(shí)驗(yàn)藥理研究及臨床療效觀察證實(shí),中醫(yī)藥在肝病保肝護(hù)肝方面有良好療效和獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)［1,2］。中藥治療肝病及其作用機(jī)制已成為該疾病領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)之一。片仔癀的主要成分為三七、蛇膽、牛黃、麝香,三七散瘀止血,行滯通脈；蛇膽清熱解毒；牛黃泄火清熱,同奏清肝利膽之效；麝香活血開竅,消腫止痛,具有清熱解毒、化瘀、消腫止痛的功效,臨床上用于治療急慢性病毒性肝炎、肝癌等療效顯著［3-5］。其組方配伍與肝病中醫(yī)藥辨證論治中清熱、化瘀、散結(jié)等治法非常吻合［6］。

1 片仔癀保肝藥效臨床研究

近年來,多項(xiàng)研究顯示,片仔癀對(duì)于四氯化碳、高脂飲食、急性酒精灌胃等動(dòng)物模型均具有良好的保肝藥效作用,可顯著降低血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)水平的升高,改善炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等病理組織學(xué)病變［7-10］。研究顯示,片仔癀對(duì)于高脂飲食導(dǎo)致的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠模型,能明顯降低 AST、ALT、γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(γ-GT)水平及甘油三酯(TG)含量,能明顯改善肝細(xì)胞脂肪變性,減少肝細(xì)胞壞死和炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),并能調(diào)控脂代謝關(guān)鍵信號(hào)因子法尼醇X 受體(FXR)、靶基因小異二聚體伴侶(SHP)和固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1c(SREBP-1c)的表達(dá)［9］,說明片仔癀可能通過調(diào)控脂質(zhì)代謝發(fā)揮防治NAFLD 的作用,為進(jìn)一步深入研究其作用機(jī)制提供了研究方向。片仔癀除了對(duì)上述動(dòng)物模型具有良好的保肝護(hù)肝作用,其對(duì)腦梗死大鼠模型、多發(fā)性硬化癥實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓炎(EAE)模型、大腸桿菌內(nèi)毒素或干酵母所致新西蘭兔發(fā)熱模型、葡聚糖硫酸鈉(DSS)誘導(dǎo)腸炎模型也顯示了良好的抗炎藥效作用。研究發(fā)現(xiàn),其可不同程度的降低這些疾病模型血清中的白細(xì)胞介素1β(IL-1β)、白細(xì)胞介素6(IL-6)、白細(xì)胞介素17A(IL-17A)、白細(xì)胞介素23(IL-23)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)的含量,減輕相關(guān)病灶的炎癥病理過程［11-15］。此外,研究還發(fā)現(xiàn),片仔癀及其復(fù)方制劑能顯著抑制急性或者慢性酒精性肝損傷模型糖脂代謝中關(guān)鍵基因過氧化物酶體增殖物激活受體(PPARγ)、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2(SREBP2)、3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶A 還原酶a(HMGCRa)及促炎因子IL-β和MCP-1 的表達(dá)水平［10,16］,從另一個(gè)角度闡釋了片仔癀的保肝護(hù)肝以及調(diào)控脂質(zhì)代謝的作用。近期研究發(fā)現(xiàn),片仔癀能顯著降低小鼠膽管結(jié)扎致肝纖維化模型血清AST,減少膠原沉積、明顯減輕肝臟細(xì)胞壞死、凋亡等病理組織學(xué)病變,其作用可能和重組人轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)表達(dá)的上調(diào)有關(guān)［17］。

上述研究提示片仔癀具有保護(hù)肝細(xì)胞、調(diào)節(jié)肝臟脂質(zhì)代謝、減少膠原沉積、減輕炎癥反應(yīng)以及減輕細(xì)胞凋亡等多重作用,而這種多途徑的藥效作用,很可能是與中藥多成分、多靶點(diǎn)的作用方式相關(guān)。

除了在動(dòng)物水平上開展相關(guān)的藥效試驗(yàn),相關(guān)臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)將有助于驗(yàn)證其臨床療效。在一個(gè)隨機(jī)陽性藥對(duì)照的多中心臨床研究中,鐘蕊等［18］發(fā)現(xiàn),慢性乙型肝炎患者經(jīng)過3 個(gè)月的片仔癀治療,其臨床消化道癥狀可以得到顯著改善,從臨床醫(yī)學(xué)角度提示片仔癀具有保肝、降酶、促進(jìn)肝細(xì)胞修復(fù)、再生等作用。在另一項(xiàng)隨機(jī)陽性藥對(duì)照的多中心臨床研究中,片仔癀對(duì)于慢性乙肝合并慢性膽囊炎患者的治療,可減輕消化道癥狀,使疼痛持續(xù)時(shí)間下降、24 h 發(fā)作次數(shù)減少,并能改善超聲下膽囊壁的毛糙程度［19］。

2 片仔癀藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究

近年來,有關(guān)片仔癀的化學(xué)成分研究受到越來越多的重視。余麗雙等［20］采用混合膠束毛細(xì)管電動(dòng)色譜法(mixMs-MEKC)同時(shí)分離檢測(cè)片仔癀中的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、麝香草酚及?；悄懰徕c5 種有效成分。賴延錦等［21］則建立了高效液相色譜測(cè)定方法來測(cè)定除麝香草酚之外的其他4 種主要成分。黃秋妹和Huang 等［22-24］利用超高效液相色譜串聯(lián)三重四極桿質(zhì)譜法(UPLC-QQQ-MS)同時(shí)測(cè)定了片仔癀中包括皂苷類、膽汁酸類以及麝香酮等十多種的抗炎活性成分。Xu 等［25］利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)法同時(shí)測(cè)定大鼠血漿中六種活性成分,并分析了其藥代動(dòng)力學(xué)數(shù)據(jù)。這些有關(guān)化學(xué)成分以及代謝方面的數(shù)據(jù),既可以為進(jìn)一步研究片仔癀保肝藥效作用的物質(zhì)基礎(chǔ)提供了前期研究基礎(chǔ),也可以為產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

3 片仔癀的潛在作用機(jī)制探討

雖然片仔癀具有良好的保肝作用,其藥效成分及物質(zhì)基礎(chǔ)也在一定程度上得到了闡釋,但其具體的作用機(jī)制仍不是很清楚。最近研究發(fā)現(xiàn),片仔癀可以降低高脂+酒精誘導(dǎo)的肝損傷模型大鼠血清ALT、AST、白蛋白(ALB)、總膽紅素(TBIL),降低TG、血清總膽固醇(TCH),能夠維持肝臟結(jié)構(gòu),保護(hù)肝細(xì)胞形態(tài),減少凋亡壞死細(xì)胞,減輕炎性細(xì)胞浸潤(rùn),改善脂肪變性,可以顯著降低血同型半胱氨酸(Hcy)濃度,能下調(diào)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激(ERS)分子標(biāo)記物葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78(GRP78)、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白94(GRP94)、磷酸化真核起始因子2α(p-eIF2α)、天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-9(caspase-9)和天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶-12(caspase-12)的mRNA和蛋白表達(dá),該研究首次從動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的角度證明了片仔癀對(duì)肥胖+慢性酒精性肝損傷的防治作用,并提示這種保護(hù)作用可能與調(diào)節(jié)Hcy、影響內(nèi)質(zhì)網(wǎng)類似激酶/真核生物翻譯起始因子-2α(PERK/eIF-2α)信號(hào)通路介導(dǎo)的ERS 有關(guān)［26］。此外,另一項(xiàng)研究表明三七總皂苷能顯著抑制毒胡蘿卜素引起的huh-7 細(xì)胞活性氧(ROS)生成、細(xì)胞凋亡、磷酸化c-Jun表達(dá),提高細(xì)胞絲蘇氨酸蛋白激酶(Akt)和細(xì)胞增殖核抗原(PCNA)水平,具有降低ERS 的作用,能顯著降低衰老大鼠肝臟ERS 相關(guān)因子GRP78、p-eIF2α、p-PERK 及炎癥相關(guān)因子p 核轉(zhuǎn)錄因子κB(p-NF-κB)、TNF-α、IL-1β 的蛋白表達(dá)［27,28］,提示了片仔癀對(duì)ERS 的藥效作用物質(zhì)基礎(chǔ)及潛在的作用靶標(biāo)。

此外,研究發(fā)現(xiàn),片仔癀可通過抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信號(hào)通路誘導(dǎo)人骨肉瘤U2OS 細(xì)胞凋亡、抑制人骨肉瘤耐藥MG63_ADM 細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞增殖［29-31］,PI3K/Akt/mTOR信號(hào)傳導(dǎo)通路與自噬密切相關(guān),在調(diào)控細(xì)胞凋亡、增殖等方面具有重要的作用。研究還表明PI3K/Akt/mTOR 信號(hào)通路與NAFLD、肝纖維化發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［32,33］,提示片仔癀可能可以通過調(diào)控自噬相關(guān)信號(hào)通路來發(fā)揮作用。事實(shí)上,已有研究表明三七中的活性成分三七總皂苷、人參皂苷(s)Rh2等能促進(jìn)多種細(xì)胞發(fā)生自噬［34,35］,進(jìn)一步提示了片仔癀對(duì)自噬的潛在作用及藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。總之,片仔癀起作用的藥效物質(zhì)和分子機(jī)制十分復(fù)雜,其作用機(jī)制可能和調(diào)控ERS 和自噬相關(guān)信號(hào)通路密切相關(guān)。

5 小結(jié)

綜上所述,片仔癀具有良好的保肝護(hù)肝的作用,具有保肝降酶、降脂、抗炎、抗氧化、抗纖維化的多靶點(diǎn)、多途徑的作用特點(diǎn),值得進(jìn)一步開展深入的機(jī)制探索研究及臨床驗(yàn)證試驗(yàn)。未來隨著科研技術(shù)的進(jìn)步,基于譜效學(xué)、基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、代謝組學(xué)等方向的研究,將有助于進(jìn)一步深入闡釋片仔癀的作用機(jī)理、藥效物質(zhì)基礎(chǔ),有助于更好的基于高級(jí)別高水平循證醫(yī)學(xué)證據(jù)來挖掘其優(yōu)勢(shì)特色的臨床療效,有望為更好的做好其質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。