宿主細(xì)胞抗登革病毒的應(yīng)答

張 萍

（中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院免疫學(xué)教研室，廣東廣州 510080）

登革病毒（dengue virus，DENV）隸屬于黃病毒屬，為有包膜的單股正鏈RNA病毒，依抗原性不同可分為四個(gè)血清型（dENV1-4）。登革病毒經(jīng)蚊媒叮咬傳播，引起人類登革熱（dengue fever，DF）、登革出血熱（dengue hemorrhagic fever，DHF）和登革休克綜合征（dengue shock syndrome，DSS）［1］。初次感染登革病毒的患者通常表現(xiàn)為較溫和的自限性疾病登革熱，約有2%～20%的感染者，特別是二次感染不同血清型病毒的感染者，可發(fā)展嚴(yán)重的DHF/DSS，臨床表現(xiàn)為急性出血、血小板減少、局部或全身血管滲透性增加，死亡率較高。近年來，登革病毒在熱帶及亞熱帶地區(qū)廣泛流行，感染人數(shù)逐年攀升。每年感染人數(shù)近4億人，9千6百萬例出現(xiàn)登革熱癥狀，50萬例需住院治療，2萬5千例死亡［1-2］。日前，登革病毒病已經(jīng)成為世界上感染人數(shù)最多、地理分布最廣、威脅最嚴(yán)重的蟲媒傳染病之一。

登革病毒經(jīng)蚊蟲叮咬進(jìn)入人體，固有免疫細(xì)胞單核巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞是主要的靶細(xì)胞；在人體復(fù)制、擴(kuò)增與傳播后，登革病毒還可感染其它多個(gè)組織器官和細(xì)胞。細(xì)胞在病毒入侵后，迅速激活多條應(yīng)答通路，應(yīng)對(duì)和抵御病毒的感染、復(fù)制與傳播。目前研究較為透徹的應(yīng)答包括固有免疫應(yīng)答（innate immune response）、適應(yīng)性免疫應(yīng)答（adaptive immune response）、細(xì)胞死亡（cell death）、非折疊蛋白反應(yīng)（unfolded protein response，UPR）、自噬（autophagy）以及應(yīng)激顆粒（stress granule，SG）形成等。本文將從登革病毒的分子生物學(xué)、和細(xì)胞抗病毒感染的應(yīng)答進(jìn)行綜述。

1 登革病毒的分子生物學(xué)

1.1 登革病毒的復(fù)制周期

登革病毒基因組是單正鏈RNA，編碼含3個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白（C、PrM、E）和7個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白（NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5）。病毒粒子與細(xì)胞表面受體分子結(jié)合、內(nèi)吞、脫殼，釋放基因組RNA，隨機(jī)編碼多聚蛋白前體；多聚蛋白前體經(jīng)細(xì)胞和病毒蛋白酶剪切后成為獨(dú)立的結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白。在多個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白的作用下，病毒可促使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)變化，形成囊泡結(jié)構(gòu)；病毒非結(jié)構(gòu)蛋白聚集在囊泡內(nèi)，組成復(fù)制復(fù)合物，進(jìn)行RNA復(fù)制和蛋白翻譯。最終病毒RNA與結(jié)構(gòu)蛋白組裝、出芽、成熟，子代病毒粒子釋放至細(xì)胞外［1-3］。

1.2 登革病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白

登革病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白不僅參與病毒的復(fù)制過程，還是激活細(xì)胞應(yīng)答的重要分子。NS1蛋白是唯一的病毒分泌蛋白，在胞外以六聚體的形式存在。最新研究發(fā)現(xiàn)NS1可以作為一種病原相關(guān)分子模式，被免疫細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞的TLR4受體識(shí)別，活化固有免疫信號(hào)通路產(chǎn)生大量的炎性因子，破壞內(nèi)皮細(xì)胞層的完整性，是引起登革熱患者血管滲漏的關(guān)鍵蛋白［4］。NS2A與NS4A相互作用，誘使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，形成病毒復(fù)制需要的囊膜結(jié)構(gòu)。NS2B3蛋白酶不僅剪切病毒的多聚蛋白，還可剪切宿主蛋白，以拮抗細(xì)胞的防御機(jī)制。此外，NS3蛋白還具有NTP酶、RTP酶活性，與NS5一起參與病毒基因組RNA的復(fù)制。NS4B是一個(gè)跨膜蛋白，協(xié)助雙鏈RNA的解旋。NS5蛋白具有甲基轉(zhuǎn)移酶活性和RNA聚合酶（RdRp）活性，是RNA復(fù)制的關(guān)鍵酶［1］。

2 登革病毒感染后的細(xì)胞應(yīng)答

2.1 固有免疫應(yīng)答

2.1.1 固有免疫應(yīng)答是抗登革病毒的第一道防線 固有免疫應(yīng)答不僅是宿主抗病毒感染的第一道防線，直接抵御病毒的早期感染，并促進(jìn)獲得性免疫的激活與分化。臨床上，大多數(shù)登革病毒感染者只在較短時(shí)間內(nèi)呈現(xiàn)一個(gè)自限性癥狀，提示正是機(jī)體早期的固有免疫應(yīng)答，有效控制了病毒的復(fù)制、傳播與致?。?］。雖然登革病毒感染令干擾素受體敲除的小鼠死亡，但野生型小鼠卻全部存活，提示干擾素足以幫助小鼠抵抗病毒的感染與致病。在體外實(shí)驗(yàn)中，我們對(duì)單核細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和肝癌細(xì)胞中進(jìn)行干擾素預(yù)處理，登革病毒的復(fù)制和擴(kuò)增急劇下降［6］；誘生干擾素的佐劑PIKA也具有抗登革病毒的效應(yīng)，提示PIKA是登革病毒疫苗的一個(gè)潛在佐劑［7］。此外，我們還發(fā)現(xiàn)固有免疫應(yīng)答促進(jìn)巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的Notch受體和配體表達(dá)水平上調(diào)、并激活Notch信號(hào)通路，從而調(diào)節(jié)Th向抗胞內(nèi)病原體的Th1應(yīng)答分化［8］。

基于臨床和實(shí)驗(yàn)室的觀察，人們普遍認(rèn)為在控制登革病毒的初次感染方面，依賴于干擾素的固有免疫比依賴于B和T細(xì)胞的獲得性免疫發(fā)揮了更為重要的作用；機(jī)體針對(duì)登革病毒感染的固有免疫應(yīng)答的強(qiáng)度，尤其是干擾素的產(chǎn)生水平，與登革病毒感染的疾病程度密切相關(guān)，即是DF、還是DHF/DSS［5］。

2.1.2 固有免疫應(yīng)答通路的激活 在登革病毒感染后，細(xì)胞的多個(gè)模式識(shí)別受體（包括RIG-I、MDA-5和TLR3）識(shí)別病毒的病原相關(guān)分子模式（pathogen-associated molecule pattern，PAMP），如NS1蛋白、基因組RNA和中間復(fù)制產(chǎn)物dsRNA。隨后，活化信號(hào)由接頭蛋白（IPS-1，TRIF，TRAF，STING等）傳導(dǎo)，級(jí)聯(lián)激活I(lǐng)RF3，NF-κB，MAPK等信號(hào)通路。IRF3、p65、p38 MAPK等轉(zhuǎn)錄因子發(fā)生磷酸化后進(jìn)入細(xì)胞核，與各自的轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)域結(jié)合，協(xié)同促進(jìn)I型干擾素IFN-α/β、TNF-α等細(xì)胞因子和炎性因子的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)［5］。

2.1.3 固有免疫應(yīng)答通路的抗病毒效應(yīng) 固有免疫應(yīng)答所產(chǎn)生的IFN-α/β 并不能直接滅活病毒，而是通過調(diào)控下游的干擾素調(diào)控基因（interferon stimulated gene，ISG）的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)來發(fā)揮抗病毒效應(yīng)［5］。IFN與其受體IFNR結(jié)合后啟動(dòng)Jak-STAT信號(hào)通路，上調(diào)300多個(gè)ISG的表達(dá)，如Mx、PKR、IFITM、OAS/RNase L等。迄今為止，已證實(shí)的具有抗登革病毒的ISG編碼蛋白約10個(gè)：IFITM2和IF?ITM3破壞病毒早期進(jìn)入和脫衣殼［9］，ADAP2抑制病毒入侵［10］，viperin［11］和ISG20［9］抑制病毒RNA復(fù)制，RyDEN與 病毒RNA和細(xì)胞RBP結(jié) 合干擾病毒 蛋白翻譯［12］，TRIM69與NS3結(jié) 合并促其降解［13］，BST2［14］和ISG15［15］抑制病毒粒子釋放，OAS/RNase L等［16］。OAS1 p42，OAS1 p46和OAS3 p100的過表達(dá)可激活RNase L而抑制登革病毒的復(fù)制，但RNase L抗病毒的具體機(jī)制尚不清楚［16］。我們前期研究了經(jīng)典的ISG蛋白PKR對(duì)登革病毒復(fù)制的影響，發(fā)現(xiàn)PKR抗病毒效應(yīng)被登革病毒拮抗［17］；并進(jìn)一步觀察到登革病毒通過延遲dsRNA的產(chǎn)生與積累，從而延遲PKR與eIF2α的磷酸化［18］，這可能是PKR對(duì)病毒復(fù)制沒有抑制效應(yīng)的一個(gè)重要原因。需要指出的是，關(guān)于ISG蛋白的抗病毒功能大多是在體外細(xì)胞，通過過表達(dá)或沉默的實(shí)驗(yàn)觀察到的，這些基因在體內(nèi)是否仍有抗病毒活性還有待進(jìn)一步驗(yàn)證。

2.1.4 登革病毒對(duì)固有免疫應(yīng)答的拮抗作用 固有免疫應(yīng)答對(duì)登革病毒具有顯著的抑制作用；反過來，登革病毒為了在宿主中復(fù)制與傳播，已演化出多層次、多方面的拮抗策略，這些拮抗發(fā)生于固有免疫應(yīng)答的各個(gè)階段［19-20］。

在IFN產(chǎn)生階段，NS3和NS5蛋白在病毒基因組復(fù)制過程中，可在新合成的RNA末端形成5′端帽子，直接逃逸細(xì)胞對(duì)PAMP分子的識(shí)別［21］。NS2B/3蛋白酶剪切接頭蛋白MITA/STING，阻斷RIG-I和MDA5的信號(hào)傳遞［22-23］。本課題組首次報(bào)道了登革病毒調(diào)控并利用宿主miRNA分子（miR?NA-146a），抑制干擾素的產(chǎn)生［24］。登革病毒感染可誘導(dǎo)miR-146a的表達(dá)升高；miR-146a靶向重要的固有免疫接頭蛋白TRAF6，阻斷固有免疫信號(hào)通路，從而促進(jìn)登革病毒的復(fù)制。

在IFN調(diào)控ISG的信號(hào)通路上，登革病毒拮抗的主要靶點(diǎn)是STAT1/STAT2。NS2A、NS4A和NS4B蛋白對(duì)STAT1具有抑制效應(yīng)：NS4B通過干擾STAT1的磷酸化，抑制其入核；NS4A對(duì)NS4B的作用具有協(xié)同效應(yīng)，同時(shí)表達(dá)NS4A和NS4B可使NS4B的抑制能力大為提高［25］。NS2A、NS4A和NS4B的共表達(dá)能夠增強(qiáng)登革病毒在細(xì)胞中的復(fù)制能力，顯著下調(diào)ISG的表達(dá)［25］。此外，登革病毒NS5通過蛋白酶體途徑介導(dǎo)STAT2降解，抑制IFN-α/β信號(hào)傳遞［26］。

除了病毒蛋白，登革病毒亞基因組RNA（sub?genomic flaviviral RNA，sfRNA）也具有拮抗作用。sfRNA是登革病毒基因組RNA經(jīng)細(xì)胞XRN1蛋白酶不完全剪切后，產(chǎn)生的RNA分子。sfRNA作用像“海綿”分子一樣，通過吸收與結(jié)合細(xì)胞RNA結(jié)合蛋白G3BP1、G3BP2和CAPRIN1，抑制它們的活性并干擾ISG蛋白的翻譯，以此拮抗固有免疫應(yīng)答的效應(yīng)發(fā)揮［27］。

2.2 適應(yīng)性免疫應(yīng)答

2.2.1 適應(yīng)性免疫應(yīng)答在登革病毒感染發(fā)揮雙重作用 皮膚組織中的髓系細(xì)胞，包括樹突狀細(xì)胞（dendritic cells，DC）和朗格漢斯細(xì)胞，是登革病毒感染的主要靶細(xì)胞。它們?cè)诓《靖腥竞?，直接殺傷與清除病毒；隨后，DC細(xì)胞成熟并遷移進(jìn)入外周免疫器官。在此，DC細(xì)胞提呈抗原并激活T淋巴細(xì)胞，活化后的CD4+T主要進(jìn)行Th1分化與應(yīng)答，CD8+T細(xì)胞發(fā)揮細(xì)胞毒效應(yīng)清除感染細(xì)胞；T細(xì)胞輔助B細(xì)胞活化并分化為漿細(xì)胞，產(chǎn)生抗體［5］。棘手的是，無論是B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫應(yīng)答，還是T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答，它們?cè)诘歉锊《镜母腥九c致病機(jī)制中都發(fā)揮了雙重作用：一方面發(fā)揮清除登革病毒的作用，也可能促進(jìn)登革病毒的復(fù)制與致病。適應(yīng)性免疫應(yīng)答的負(fù)面效應(yīng)常由于不同血清型的登革病毒再次感染引起，因此也給抗登革病毒疫苗的研發(fā)帶來了極大的挑戰(zhàn)。

2.2.2 B細(xì)胞介導(dǎo)體液應(yīng)答的雙重作用 在登革病毒初次感染的4～6 d后，病人體內(nèi)即可檢測到IgM和IgG抗體。通常情況下，血清中的中和抗體可以幫助清除病毒，還可抵抗同種血清型的登革病毒的再次感染，發(fā)揮保護(hù)效應(yīng)。然而，一些非中和性抗體的存在對(duì)于再次感染的患者來說，卻是弊大于利：臨床資料表明再次感染異型血清型的登革病毒患者，出現(xiàn)登革熱重癥（DHF和DSS）的可能性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于初次感染者［28］。據(jù)此，人們提出了抗體依賴增感染效應(yīng)（antibody-dependent en?hancement，ADE）的假說，即抗體結(jié)合病毒粒子后，通過與細(xì)胞表面FcR受體結(jié)合發(fā)揮調(diào)理作用，促進(jìn)病毒的感染、復(fù)制與致?。?9］。

2.2.3 T細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞應(yīng)答的雙重作用 CD8+T細(xì)胞識(shí)別的病毒抗原表位主要在NS3，NS5和NS4B等非結(jié)構(gòu)蛋白上，而CD4+T細(xì)胞主要針對(duì)結(jié)構(gòu)蛋白與分泌蛋白NS1的抗原表位應(yīng)答［30］。某個(gè)血清型的DENV初次感染后，刺激T細(xì)胞活化、增殖與分化，效應(yīng)T細(xì)胞發(fā)揮抗病毒效應(yīng)，并分化為記憶T細(xì)胞。臨床資料表明，登革病毒感染者體內(nèi)活化的CD4+T細(xì)胞的數(shù)量與病毒控制情況具有相關(guān)性［31］，提示T細(xì)胞應(yīng)答是機(jī)體抗病毒應(yīng)答的一個(gè)重要手段。再次感染同種血清型DENV后，記憶T細(xì)胞可更快速地活化，發(fā)揮很好的保護(hù)效應(yīng)。但是，如果再次感染的病毒是異種血清型DENV，記憶T細(xì)胞仍然比針對(duì)異種血清型病毒的初始T細(xì)胞更容易被活化（抗原原罪，original antigenic sin）；由于初次感染的病毒抗原表位與再次進(jìn)入的病毒抗原表位不完全一致，因此針對(duì)初次感染病毒的記憶T細(xì)胞活化增殖后，會(huì)引起清除病毒的能力下降，并產(chǎn)生過量的細(xì)胞因子［32］。

2.3 細(xì)胞死亡

細(xì)胞死亡是多細(xì)胞生物重要的抗病毒途徑之一，病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡方式主要有三種形式：細(xì)胞凋亡（apoptosis），壞死性凋亡又稱程序性壞死（necroptosis，programmed necrosis），細(xì)胞炎性壞死或焦亡（pyroptosis）［33］。細(xì)胞凋亡是一種程序性自殺方式，通過caspase酶的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，促使染色體固縮和DNA片段化、細(xì)胞質(zhì)空泡化、形成凋亡小體；壞死性凋亡是一種新發(fā)現(xiàn)的程序性壞死方式，由RIPK3和MLKL介導(dǎo)，呈現(xiàn)壞死樣的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：細(xì)胞質(zhì)透明化、線粒體腫脹、細(xì)胞膜裂解而釋放細(xì)胞內(nèi)容物；炎性壞死主要發(fā)生于免疫細(xì)胞，由caspase-1和caspase-11介導(dǎo)產(chǎn)生炎性小體，它同時(shí)具有凋亡和壞死的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：發(fā)生核固縮、最后細(xì)胞膜裂解并釋放細(xì)胞內(nèi)容物。

細(xì)胞凋亡是目前報(bào)道最多的登革病毒誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡方式。登革病毒的多個(gè)蛋白可刺激和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的發(fā)生：C蛋白與死亡相關(guān)蛋白DAXX相互結(jié)合、進(jìn)入細(xì)胞核后可誘導(dǎo)肝細(xì)胞HepG2發(fā)生凋亡［34］；此外，M蛋白［35］和NS2B3蛋白［36］也可以誘導(dǎo)細(xì)胞發(fā)生凋亡。然而，登革病毒誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制具有細(xì)胞特異性：單核細(xì)胞的凋亡與TNF-α及其受體密切相關(guān)［37］，登革病毒通過誘導(dǎo)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力促進(jìn)其凋亡的發(fā)生［38］；登革病毒感染誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞凋亡受氧化應(yīng)激的調(diào)控，依賴于ROS產(chǎn)生［36-39］；內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡則依賴于NS2B3介導(dǎo)的NF-κB活化。我們前期發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞膜表面的硫酸乙酰肝素（heparan sulfate，HS）在登革病毒和寨卡病毒感染誘導(dǎo)的肺癌上皮細(xì)胞凋亡中具有正調(diào)控作用，敲除HS合成通路上的關(guān)鍵蛋白分子后，細(xì)胞死亡顯著下降；證實(shí)細(xì)胞凋亡是一個(gè)限制登革病毒復(fù)制的應(yīng)答［40］。

此外，登革病毒可誘導(dǎo)單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)生焦亡：在病毒感染單核細(xì)胞96 h后，可檢測到Caspase-1的剪切與IL-1β 的分泌［41］；登革病毒與CLEC5A結(jié)合后，可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞的焦亡［42］。

不難看出，登革病毒感染的細(xì)胞究竟發(fā)生何種死亡方式，是與細(xì)胞的種類、感染時(shí)間等多個(gè)因素相關(guān)。細(xì)胞死亡作為宿主抗病毒的重要應(yīng)答，在病毒的復(fù)制、傳播與致病過程中發(fā)揮了重要的作用。

2.4 自 噬

自噬是細(xì)胞對(duì)胞內(nèi)物質(zhì)進(jìn)行周轉(zhuǎn)的一個(gè)重要生理過程：細(xì)胞通過形成自噬小泡將損壞的蛋白或細(xì)胞器包裹、并與溶酶體融合，溶酶體中降解的蛋白和細(xì)胞器后的物質(zhì)又可以進(jìn)一步循環(huán)利用。自噬也被認(rèn)為是一種細(xì)胞原始的免疫應(yīng)答方式：由固有免疫應(yīng)答的模式識(shí)別受體PRR識(shí)別病原體而啟動(dòng)，自噬的效應(yīng)階段可直接清除入侵的病原體，還可調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)［43］。

早在2008年，Lee等［44］率先報(bào)道了在登革病毒感染后，細(xì)胞自噬通路以依賴于ATG5分子的方式被激活。令人意外的是，自噬的發(fā)生對(duì)于病毒的復(fù)制卻是促進(jìn)作用。起初，人們推測自噬為登革病毒復(fù)制提供“支架平臺(tái)”而發(fā)揮促病毒作用。但后來發(fā)現(xiàn)，自噬是通過調(diào)節(jié)細(xì)胞的脂代謝來促進(jìn)病毒復(fù)制的：吞噬體處理脂滴和甘油三酯，釋放自由脂肪酸，最終促進(jìn)細(xì)胞的β 氧化，產(chǎn)生ATP供病毒的復(fù)制［45］。

關(guān)于登革病毒誘導(dǎo)自噬的發(fā)生機(jī)制，目前尚不明確。有文獻(xiàn)［46］報(bào)道NS4A蛋白可促進(jìn)自噬的發(fā)生，并抑制細(xì)胞的死亡；也有文獻(xiàn)［47］報(bào)道NS1也可以誘導(dǎo)自噬，并促進(jìn)血管的滲漏，增強(qiáng)免疫病理；而Lee等［48］認(rèn)為ER壓力與UPR反應(yīng)是誘導(dǎo)體內(nèi)和體外自噬發(fā)生的必要條件。

2.5 非折疊蛋白反應(yīng)

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是細(xì)胞參與脂質(zhì)生成、碳水化合物代謝、鈣離子穩(wěn)定、蛋白合成與翻譯后加工的重要場所。當(dāng)細(xì)胞中出現(xiàn)大量的未折疊蛋白，會(huì)引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的壓力。為了緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力并防止細(xì)胞死亡，細(xì)胞會(huì)啟動(dòng)未折疊蛋白反應(yīng)（unfolded protein response，UPR）。UPR途徑主要包括三條通路，分別由三個(gè)不同的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜蛋白IRE1、PERK和ATF6蛋白來啟動(dòng)。這些UPR通路活化后，具有不同的效應(yīng)機(jī)制，如PERK磷酸化eIF2α后抑制新蛋白的翻譯，來緩解內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力［49］。

登革病毒在環(huán)核周的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)進(jìn)行復(fù)制，合成大量的病毒蛋白，可引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)壓力并激活UPR［50-51］。有趣的是，登革病毒對(duì)細(xì)胞的UPR具有精細(xì)的時(shí)間調(diào)控：在感染早期，病毒誘導(dǎo)但又迅速阻斷PERK/eIF2α通路，因此病毒蛋白的翻譯不會(huì)被遏制；在感染中晚期，IRE1/XBP1和ATF6通路相繼被活化。登革病毒對(duì)UPR反應(yīng)的精細(xì)調(diào)控，提示病毒既可逃脫UPR對(duì)翻譯的抑制，又可阻止細(xì)胞的過早凋亡，從而延長了其在細(xì)胞中的復(fù)制時(shí)間［51］。還有研究表明，登革病毒甚至利用UPR反應(yīng)來促進(jìn)自噬，促進(jìn)病毒復(fù)制與致病性［48-49］。

2.6 應(yīng)激顆粒形成

細(xì)胞的翻譯元件在外界環(huán)境壓力下會(huì)發(fā)生應(yīng)激失活、翻譯終止，失活的翻譯起始復(fù)合物與核酸結(jié)合蛋白（RNA binding protein，RBP）在細(xì)胞質(zhì)中聚集，形成顆粒復(fù)合物，此為應(yīng)激顆粒。PKR、GCN2、HRI、PERK分別感知病毒感染、氨基酸饑餓、熱激和胞質(zhì)缺鐵、平展或錯(cuò)誤折疊蛋白堆積壓力等環(huán)境變化，磷酸化eIF2α后誘導(dǎo)SG形成。在病毒感染情況下，PKR與病毒的復(fù)制中間產(chǎn)物dsRNA結(jié)合、構(gòu)象改變后自我磷酸化，進(jìn)一步磷酸化eIF2α，誘導(dǎo)SG形成［52］。

顯而易見，SG形成對(duì)病毒蛋白的翻譯具有阻斷效應(yīng)，不利于病毒在細(xì)胞中繁殖。已有報(bào)道［53］，登革病毒通過基因組RNA的3′-UTR的莖環(huán)結(jié)構(gòu)與應(yīng)激顆粒組分TIA-1結(jié)合，并將其招募入病毒復(fù)制復(fù)合物，抑制SG的形成。我們［18］還發(fā)現(xiàn)，在登革病毒感染后6 h，應(yīng)激顆粒組分蛋白G3BP1會(huì)聚集在胞漿的類似SG的顆粒中，該顆粒具有抗病毒作用。并且，在登革病毒感染后18 h，我們才能檢測到dsRNA的存在，以致PKR與eIF2α 磷酸化只有在病毒感染的晚期才能被檢測到。這些研究表明登革病毒已進(jìn)化出多種策略，拮抗細(xì)胞的應(yīng)激顆粒形成。

3 總結(jié)與展望

細(xì)胞在登革病毒感染后，通過啟動(dòng)了多條不同的信號(hào)通路進(jìn)行應(yīng)答。這些應(yīng)答通路之間存在錯(cuò)綜復(fù)雜的關(guān)系，相互促進(jìn)和相互制約。例如，固有免疫應(yīng)答誘導(dǎo)產(chǎn)生的干擾素，促進(jìn)適應(yīng)性免疫應(yīng)答的活化與分化，還可以促細(xì)胞死亡；ER壓力與UPR反應(yīng)通過活化AMPK、JNK/p38通路分別影響自噬與細(xì)胞死亡；自噬負(fù)調(diào)控著固有免疫應(yīng)答與細(xì)胞死亡［54］等。有趣的是，細(xì)胞的“哨兵”蛋白們?cè)诙鄠€(gè)應(yīng)答中均扮演了重要的角色，如PKR在與病毒dsRNA結(jié)合活化并磷酸化eIF2α 后，既調(diào)控固有免疫信號(hào)通路，又調(diào)控了細(xì)胞死亡和應(yīng)激顆粒的形成［52］。

為了適應(yīng)細(xì)胞錯(cuò)綜復(fù)雜的環(huán)境，登革病毒亦對(duì)關(guān)鍵的宿主蛋白產(chǎn)生了拮抗。例如登革病毒延遲產(chǎn)生PAMP分子dsRNA［18］，并在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上形成囊膜結(jié)構(gòu)將病毒蛋白和RNA分子與胞漿中的PRR隔離［55］。此外，登革病毒更是直接利用一些細(xì)胞應(yīng)答，如UPR和自噬，來完成其復(fù)制周期。顯然，細(xì)胞與登革病毒之間的斗爭結(jié)局，直接決定了宿主抗病毒狀態(tài)的建立與疾病的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)歸。對(duì)這些細(xì)胞應(yīng)答的發(fā)生和調(diào)控機(jī)制的闡明，將有助于新的抗病毒策略的發(fā)展。