金線蓮不同組織DNA提取方法比較

劉泊鈺 蘇春蘭 陳森蘭 龍祥玲 楊榆 楊金蘭 蘇建睦 朱惠

摘要：金線蓮是中國傳統(tǒng)中藥，具有清熱涼血、除濕解毒等功效。進(jìn)行金線蓮分子育種及遺傳轉(zhuǎn)化需獲得高質(zhì)量DNA，本研究比較分析3種提取方法對金線蓮根莖葉DNA提取結(jié)果表明：SDS法對金線蓮根莖葉DNA的提取效果不好，使用CTAB法可獲得高質(zhì)量的金線蓮莖段DNA，使用試劑盒法可獲得高質(zhì)量金線蓮根、葉DNA。

關(guān)鍵詞：金線蓮;基因組;提取方法;CTAB

金線蓮是蘭科開唇蘭屬多年生草本珍稀藥用植物，主要分布在熱帶和亞熱帶地區(qū)，在我國以福建、臺灣、江西和浙江等省份為主。金線蓮是中國傳統(tǒng)珍貴藥材，全身藥用，味平，性甘，具有清熱涼血、除濕解毒等功效，可治療肺熱咳嗽、風(fēng)濕骨痛、糖尿病、膀胱炎等疾病，普遍用于醫(yī)療、保健、美容及飲食等方面。

目前，對金線蓮的研究主要集中在活性成分分析及組培快繁，在分子育種及品種改良方面研究較少。進(jìn)行分子育種及品種改良研究過程中，植物DNA的提取是必不可少的一步，植物DNA的質(zhì)量直接影響下一步實(shí)驗(yàn)的進(jìn)展。因此，本研究開展以金線蓮為材料的基因組提取方法研究，旨在比較分析金線蓮不同部位DNA提取效果及不同提取方法對金線蓮DNA提取的效果，為金線蓮分子育種及遺傳轉(zhuǎn)化提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)所用植物材料來自玉林師范學(xué)院生物與制藥學(xué)院組織培養(yǎng)室培養(yǎng)的健康金線蓮組培苗。

1.2試驗(yàn)方法

植物基因組提取方法為：CTAB法，SDS法，試劑盒法。分別使用3種方法提取金線蓮根、莖、葉DNA，用凝膠電泳檢測DNA完整性，用Nan-oDrop One超微量分光光度計(jì)檢測DNA的濃度。

2試驗(yàn)結(jié)果

2.1凝膠電泳檢測結(jié)果

圖1為瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA完整性的結(jié)果，由圖1可知，對于金線蓮的根來說，試劑盒法提取金線蓮根DNA效果最好，其次是CTAB法，SDS法提取效果最差;對于金線蓮莖來說，CTAB法提取的效果最好，其次是試劑盒法，SDS法能提取出少量DNA;對于金線蓮葉片，試劑盒提取的效果最好，CTAB法和SDS法提取的效果都不好。在所有方法中，除了使用試劑盒法提取葉片時(shí)無RNA污染外，其余方法均有少量RNA污染。

2.2分光光度計(jì)檢測DNA濃度

所有DNA樣品經(jīng)過分光光度計(jì)檢測結(jié)果如表1所示，濃度最高的是CTAB法提取金線蓮莖的DNA，

達(dá)到611.77ng/ul;其次是試劑盒法提取的根DNA，濃度為333.51ng/ul;濃度最低的是SDS法提取的金線蓮葉片DNA，僅為69.49ng/ul。純度最高的方法是試劑盒法，其次是CTAB法;在3種方法中，SDS法的效果最差，提取的濃度低、純度低。

3討論

綜上所述，CTAB法提取金線蓮莖段可獲得較高的DNA濃度和純度，使用試劑盒法可快速獲得高濃度金線蓮葉片和根DNA，SDS法不適合金線蓮根莖葉DNA提取。金線蓮化學(xué)成分中多糖類物質(zhì)含量較多，CTAB作為陽離子去污劑，特別對多糖的去除效果尤為明顯;趙喜華等通過SDS法提取杜鵑屬DNA發(fā)現(xiàn)，SDS法對多糖及一些次生代謝物的提取，其DNA提取效果不明顯，與本研究結(jié)論一致。試劑盒法能夠決速獲得植物基因組DNA，并能夠達(dá)到一定的純度，且耗費(fèi)的時(shí)間較短。但若需要更高的濃度和純度，建議使用CTAB法。

（收稿：2020一01一04）