-80℃保存自制血漿用于血漿糾正實(shí)驗(yàn)對(duì)檢測(cè)PT 與APTT 延長(zhǎng)的價(jià)值研究

謝小妤 王海疆 吳顯勁

臨床上出現(xiàn)PT 和APTT 延長(zhǎng)的患者案例比較常見(jiàn),究其原因,臨床上多認(rèn)為其與凝血因子缺乏、存在特異性的抗凝血因子或非特異性的抗凝物質(zhì)(比如副蛋白或磷脂抗體)等有主要關(guān)系［1,2］。出現(xiàn)以上病情特征患者臨床上多會(huì)形成狼瘡抗凝物質(zhì)的血栓傾向和因凝血因子缺乏為主因的缺血傾向［3］。通常針對(duì)以上兩種傾向的臨床治療方案,首先需要對(duì)具體凝血因子、特異性或非特異性的抗凝物質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)確認(rèn),以得出具體的血栓形成和出血傾向主要問(wèn)題所在,然后進(jìn)行相應(yīng)治療［4,5］。但對(duì)于一般經(jīng)濟(jì)相對(duì)落后和看醫(yī)條件有限的地區(qū)或醫(yī)療機(jī)構(gòu),并不具備成熟配套的檢測(cè)設(shè)備和能力條件,鑒于此,作者首先選取40 份PT 或APTT 延長(zhǎng)的血漿標(biāo)本,分別與正常混合血漿和-80℃保持的自制血漿進(jìn)行混合并即時(shí)檢測(cè),同時(shí)在37℃孵育1 h 后再次檢測(cè),對(duì)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比分析,以探討-80℃保存自制血漿用于血漿糾正試驗(yàn)對(duì)檢測(cè)PT 與APTT 延長(zhǎng)的臨床應(yīng)用價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019 年1～3 月本院40 份PT 或APTT延長(zhǎng)的血漿標(biāo)本,分別與正?；旌涎獫{和-80℃保存的自制血漿按1∶1 比例進(jìn)行混合,與正?；旌涎獫{的混合作為對(duì)照組,與-80℃保存的自制血漿混合作為研究組。納入標(biāo)準(zhǔn)：所選病例經(jīng)臨床檢測(cè)均PT≥18.0 s 或APPT≥52.0 s,同時(shí)也符合纖維蛋白原(FIB)≥2.0 g/L 和凝血酶時(shí)間(TT)正常。在40 份血漿樣本中,18 份為男性標(biāo)本,22 份為女性標(biāo)本,患者年齡4～85 歲,平均年齡(55.42±18.92)歲；其中15 份血漿標(biāo)本來(lái)自手術(shù)科室,25 份來(lái)自非手術(shù)科室；經(jīng)檢測(cè),12 份為單獨(dú)PT 延長(zhǎng),13 份為單獨(dú)APTT 延長(zhǎng),15 份為PT 和APTT均延長(zhǎng)。本研究符合本院倫理學(xué)原則并經(jīng)審批通過(guò)。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集 采用0.109 mol/L 的枸櫞酸鈉抗凝真空采血管采集患者血液樣本3 ml,之后進(jìn)行充分搖勻,然后進(jìn)行離心處理,時(shí)間設(shè)置為10 min,速率設(shè)置為3000 r/min,最后對(duì)取得的血漿標(biāo)本分別進(jìn)行TT、FIB、PT 和APTT 的檢測(cè),并做好記錄。所用采集管由BD 公司提供。

1.2.2 使用儀器及試劑 本研究使用的全自動(dòng)血凝分析儀由日本Sysmex 公司生產(chǎn),型號(hào)為sysmex cs5100,并采用原廠配套的原裝試劑,具體有正常混合血漿,另外室內(nèi)質(zhì)控品和定標(biāo)品均由Sysmex 公司所提供,同時(shí)都嚴(yán)格遵照相關(guān)說(shuō)明書進(jìn)行規(guī)范操作,所用試劑均經(jīng)核實(shí)確認(rèn)在有效期內(nèi)。所有的標(biāo)本也都在室內(nèi)質(zhì)控及在控的狀態(tài)下進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.3 自制混合血漿 首先收集19 份以上經(jīng)TT、FIB、PT 和APTT 檢測(cè),所得結(jié)果屬于正常的無(wú)脂濁、溶血及黃疸的非孕婦血漿標(biāo)本,然后進(jìn)行充分混勻,緊接著進(jìn)行離心10 min,速率設(shè)置為3000 r/min,選取上層血漿0.8 ml,對(duì)TT、FIB、PT 和APTT 這4 項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行測(cè)定,在確保4 項(xiàng)檢測(cè)結(jié)果均處于正常范圍內(nèi)后,再置于37℃環(huán)境孵育1 h,然后再次對(duì)以上4 項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè),并對(duì)檢測(cè)指標(biāo)均處正常值范圍的血漿標(biāo)本進(jìn)行取樣,選取上層血漿,放置在-80℃的冰箱內(nèi),留作后續(xù)試驗(yàn)。

1.2.4 血漿糾正試驗(yàn) 分別選取200 μl 的異常血漿與正?；旌涎獫{和-80℃保存的自制混合血漿按1︰1 比例進(jìn)行充分混合,混合均勻后即刻進(jìn)行PT 和APTT 的測(cè)定,對(duì)結(jié)果進(jìn)行觀察記錄,隨后在37℃環(huán)境下孵育1 h,再次對(duì)PT 和APTT進(jìn)行測(cè)定,并觀察記錄。

1.3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 計(jì)算40 份血漿標(biāo)本可被正?；旌涎獫{糾正的比例情況,比較兩組的糾正率。血漿糾正率(%)=(糾正前的測(cè)定值-糾正后的測(cè)定值)/糾正前的測(cè)定值×100%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血漿糾正試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果 35 份標(biāo)本能立即被正?；旌涎獫{糾正,占比87.50%；4 份標(biāo)本未能被立即糾正,并且孵育前、后所測(cè)得的結(jié)果沒(méi)變,占比10.00%；1 份標(biāo)本除了未被糾正,同時(shí)孵育后測(cè)定時(shí)間比孵育前更長(zhǎng),占比2.50%。

2.2 兩組在血漿糾正試驗(yàn)中的結(jié)果比較 研究組孵育前、后APTT 均長(zhǎng)于對(duì)照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；兩組孵育前、后在PT 延長(zhǎng)糾正試驗(yàn)中的糾正率、APTT 延長(zhǎng)試驗(yàn)中的糾正率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表1。

表1 兩組在血漿糾正試驗(yàn)中的結(jié)果比較(±s)

表1 兩組在血漿糾正試驗(yàn)中的結(jié)果比較(±s)

注：與對(duì)照組比較,aP＜0.05

3 討論

臨床上常見(jiàn)的PT 和APTT 延長(zhǎng)一般會(huì)形成狼瘡抗凝物質(zhì)的血栓傾向和因凝血因子缺乏為主因的缺血傾向,針對(duì)出現(xiàn)這兩種傾向的患者臨床治療方案首要的是要對(duì)PT 和APTT 延長(zhǎng)的原因進(jìn)行查找［6］。相關(guān)研究表明［7,8］,造成PT和APTT 延長(zhǎng)的原因主要是與凝血因子缺乏、存在特異性的抗凝血因子或非特異性的抗凝物質(zhì)(比如副蛋白或磷脂抗體)等有關(guān),比如曾使用抗凝藥物治療、凝血因子Ⅻ缺乏、蛋白C 缺乏、采血時(shí)抗凝劑與血液標(biāo)本比例的差異等都會(huì)造成PT 和APTT 的延長(zhǎng)。關(guān)于以上相關(guān)因素指標(biāo)異樣的檢測(cè)往往也受限于檢測(cè)儀器和檢查條件的限制,并不能很好的進(jìn)行全方面、大范圍的落實(shí),特別對(duì)于一些基礎(chǔ)較差、經(jīng)濟(jì)條件受限的地區(qū)和單位,出于成本費(fèi)用的考慮,無(wú)法依靠完善的設(shè)備和技術(shù)做到相關(guān)有效指標(biāo)的測(cè)定［9］。一直以來(lái),血漿糾正試驗(yàn)是臨床檢測(cè)分析PT 和APTT 延長(zhǎng)的重要方法［10］。鑒于此,本研究嘗試采取自制血漿樣本與正?；旌涎獫{進(jìn)行相關(guān)檢測(cè)對(duì)比研究,具體采取的是-80℃保存自制血漿和正常混合血漿分別與異樣血漿進(jìn)行混合測(cè)定,同時(shí)包括在37℃環(huán)境孵育1 h 后進(jìn)行二次測(cè)定,對(duì)相關(guān)指標(biāo)結(jié)果進(jìn)行觀察分析,最終對(duì)能被正?；旌涎獫{糾正的比例及具體糾正率進(jìn)行統(tǒng)計(jì),得出相關(guān)對(duì)比情況,以觀察-80℃保存自制血漿用于血漿糾正試驗(yàn)對(duì)檢測(cè)PT 與APTT 延長(zhǎng)的臨床表現(xiàn)。

研究結(jié)果表明,有87.50%的標(biāo)本血漿能被正?；旌涎獫{立即糾正；-80℃保存的自制血漿在孵育前在PT 的糾正試驗(yàn)中的糾正率要高于正?；旌涎獫{的糾正率,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),另外在孵育后的糾正略低于正?；旌涎獫{,但也基本接近,這表明-80℃保存自制血漿可作為正?；旌涎獫{的替代身份進(jìn)行PT 延長(zhǎng)糾正試驗(yàn)；同時(shí)在APTT的糾正試驗(yàn)中,-80℃保存的自制血漿孵育前、后的糾正率與正?；旌涎獫{的糾正率也基本相接近,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),同樣也表明-80℃保存的自制血漿可替代正?；旌涎獫{進(jìn)行APTT 延長(zhǎng)的糾正試驗(yàn)。究其原因,主要是因?yàn)?80℃的深凍保存狀態(tài)下,可以有效維持新鮮血漿的相關(guān)凝血性質(zhì),保持新鮮狀態(tài),使其等同于新鮮的血漿,從而保證血漿中的抗凝物質(zhì)活性和凝血因子能維持較長(zhǎng)時(shí)間,溫志紅等［11］的研究就曾證實(shí)過(guò)上述觀點(diǎn)。另外從本研究結(jié)果也可以看出,-80℃保存的自制血漿在PT 孵育后以及在APTT孵育前、后的糾正率均低于正常混合血漿的糾正率,雖然差異并不突出,但也說(shuō)明,-80℃保存的自制血漿雖然能很大程度上保持血漿的新鮮,以致維持血漿中的因子活性,但相對(duì)于商用的正?；旌涎獫{還是要略差一些。但從成本方面,-80℃保存的自制血漿較商用混合血漿低,避免了諸多的商業(yè)操作,自制過(guò)程中節(jié)省了資源,減少了相關(guān)流程,從而降低了成本。當(dāng)然,從本研究試驗(yàn)結(jié)果來(lái)看,-80℃保存自制血漿完全可替代正?；旌涎獫{進(jìn)行PT 和APTT 延長(zhǎng)的糾正試驗(yàn),特別是對(duì)于一些經(jīng)濟(jì)條件受限的單位,不失為一種有效且實(shí)用的方案。

綜上所述,-80℃保存自制血漿可替代商品化的正?；旌涎獫{用于血漿糾正試驗(yàn)對(duì)PT 與APTT 延長(zhǎng)的檢測(cè),其成本低,且使用方便,對(duì)于預(yù)算開支相對(duì)緊張的基層單位和經(jīng)濟(jì)條件不足的地區(qū)值得推廣應(yīng)用。