4種水產(chǎn)藥物對(duì)河川沙塘鱧幼魚的急性毒性試驗(yàn)

劉國興 鄭友 李春寧 彭剛 郝忱 丁淑燕 史楊白

摘要?采用半靜水生物測(cè)定法研究苯扎溴銨、硫醚沙星、阿維菌素和二硫氰基甲烷對(duì)平均體質(zhì)量（0.26±0.09）g河川沙塘鱧（Odontobutis potamophila）幼魚的急性毒性。試驗(yàn)結(jié)果表明，4種水產(chǎn)藥物對(duì)河川沙塘鱧幼魚的24 h半致死濃度（LC50）分別為3.23、36.39、0.39、7.74 mg/L;48 h LC50分別為1.34、22.37、0.24、4.32 mg/L;96 h LC50分別為0.27、11.24、0.11、2.67 mg/L。4種水產(chǎn)藥物對(duì)河川沙塘鱧幼魚的毒性大小順序依次為阿維菌素、苯扎溴銨、二硫氰基甲烷、硫醚沙星。硫醚沙星和二硫氰基甲烷對(duì)河川沙塘鱧幼魚的安全濃度（SC）分別為2.54和0.40 mg/L，均高于常規(guī)用量，可以在河川沙塘鱧育苗過程中使用。但河川沙塘鱧幼魚對(duì)苯扎溴銨和阿維菌素較為敏感，這2種藥物應(yīng)謹(jǐn)慎使用。

關(guān)鍵詞?河川沙塘鱧;水產(chǎn)藥物;急性毒性;半致死濃度（LC50）;安全濃度（SC）

中圖分類號(hào)?X?174文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼?A

文章編號(hào)?0517-6611（2019）23-0103-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.23.030

開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

Acute Toxicity of Four Aquacultural Drugs to Juvenile Dark Sleeper （Odontobutis potamophila）

LIU Guo?xing1，2， ZHENG You1，2， LI Chun?ning1 et al

（ 1. Freshwater Fishery Research Institute of Jiangsu Province， Nanjing， Jiangsu 210017; 2.The Jiangsu Provincial Infrastructure for Conservation and Utilization of Agricultural Germplasm， Nanjing， Jiangsu 210014 ）

Abstract?The acute toxicity of benzalkonium bromide， sulfide gatifloxacin， abamectin and dithiocyano?methane to juvenile dark sleeper （Odontobutis potamophila） with average body weight of （0.26±0.09） g was studied by semi?static bioassay method. The results showed that the 24 h median lethal concentrations （LC50） of four aquacultural drugs were 3.23、36.39、0.39 and 7.74 mg/L， respectively. The 48 h LC50 were 1.34， 22.37， 0.24 and 4.32 mg/L， respectively. The 96 h LC50 were 0.27， 11.24， 0.11 and 2.67 mg/L， respectively. The toxicity profile of the four aquacultural drugs found for O. potamophila juveniles was abamectin > benzalkonium bromide > dithiocyano?methane > sulfide gatifloxacin. The safe concentrations （SC） of sulfide gatifloxacin and dithiocyano?methane were 2.54， 0.40 mg/L， respectively. Both were higher than conventional doses， therefore they could be used in seed?rearing of O. potamophila. However， O. potamophila juveniles were sensitive to benzalkonium bromide and abamectin， so these drugs should be used carefully.

Key words?Odontobutis potamophila;Aquacultural drug;Acute toxicity;Median lethal concentration （LC50）;Safe concentration （SC）

河川沙塘鱧（Odontobutis potamophila）俗稱塘鱧魚、虎頭鯊、土布魚等，隸屬鱸形目（Perciformes）、塘鱧科（Eleotridae）、沙塘鱧屬（Odontobutis），廣泛分布于長(zhǎng)江中下游及其支流、錢塘江水系和閩江水系，偶見于黃河水系[1]。河川沙塘鱧為小型底棲肉食性魚類，主要以小型魚類和甲殼類為食，喜棲息于河灣、湖泊的淺水區(qū)[2]。該魚含肉率高、味道鮮美，深受廣大消費(fèi)者的喜愛，已成為極具發(fā)展?jié)摿Φ乃a(chǎn)養(yǎng)殖新品種[3-4]。

近年來，隨著市場(chǎng)需求的快速增長(zhǎng)，河川沙塘鱧的養(yǎng)殖面積不斷擴(kuò)大，江蘇、浙江和上海等多個(gè)省市的養(yǎng)殖區(qū)先后開展了混養(yǎng)和套養(yǎng)[5]。在養(yǎng)殖過程中，出于疾病防治目的，水產(chǎn)藥物的使用機(jī)會(huì)隨之增多，經(jīng)驗(yàn)性、隨意性用藥以及過量用藥等現(xiàn)象時(shí)有發(fā)生[6]。已有報(bào)道表明，魚的種類不同、生長(zhǎng)發(fā)育階段不同對(duì)水產(chǎn)藥物的敏感性均存在一定差異[7-8]。通過急性毒性試驗(yàn)確定水產(chǎn)藥物的安全濃度和毒性等級(jí)，篩選出適宜使用的水產(chǎn)藥物并獲取其安全用量，對(duì)于引導(dǎo)養(yǎng)殖從業(yè)者做到科學(xué)管理、精準(zhǔn)用藥以及提高水產(chǎn)品質(zhì)量安全水平具有重要的現(xiàn)實(shí)意義[9]。筆者以河川沙塘鱧幼魚為受試對(duì)象，研究了苯扎溴銨、硫醚沙星、阿維菌素和二硫氰基甲烷對(duì)其的急性毒性效應(yīng)，旨在為河川沙塘鱧人工育苗和養(yǎng)殖實(shí)踐提供參考資料。

1?材料與方法

1.1?試驗(yàn)動(dòng)物

試驗(yàn)動(dòng)物由江蘇省淡水水產(chǎn)研究所揚(yáng)中基地提供，為自然產(chǎn)卵、人工孵化的同一批次的河川沙塘鱧幼魚，體質(zhì)量（0.26±0.09）g，體長(zhǎng)（2.20±0.24）cm。幼魚帶回實(shí)驗(yàn)室后，將其放入方形暫養(yǎng)箱（1 m×1 m）馴養(yǎng)7 d。馴養(yǎng)用水為連續(xù)曝氣48 h以上的自來水，水溫（25±1）°C，pH 8.26±0.13，溶解氧≥5 mg/L。每日08：00足量投喂紅線蟲，次日投喂前，采用虹吸法吸除殘餌和糞便，然后換水1/5。試驗(yàn)前1 d停止投喂，挑選規(guī)格整齊、體質(zhì)健康、體表光滑和反應(yīng)靈敏的幼魚作為受試對(duì)象。

1.2?試驗(yàn)藥物

試驗(yàn)藥物均為水產(chǎn)養(yǎng)殖常用藥物：苯扎溴銨（商品名：苯扎溴銨溶液，有效質(zhì)量分?jǐn)?shù)45%，常州市武進(jìn)動(dòng)物藥品有限公司）、硫醚沙星（商品名：硫醚沙星，有效質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%，山西華坤生物科技有限公司）、阿維菌素（商品名：混殺特，有效質(zhì)量分?jǐn)?shù)1%，北京和健生物技術(shù)開發(fā)有限公司）、二硫氰基甲烷（商品名：克菌特，有效質(zhì)量分?jǐn)?shù)4%，北京益水源生物科技有限公司）。試驗(yàn)前將各種藥物分別配制成質(zhì)量濃度為1 000 mg/L的母液，試驗(yàn)時(shí)按比例稀釋至設(shè)定濃度，所有藥液現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.3?試驗(yàn)方法

采用半靜水生物測(cè)定法，開展急性毒性試驗(yàn)[10]。試驗(yàn)期間不投喂，每24 h更換1次試驗(yàn)液。試驗(yàn)用水、水溫、pH和溶解氧與馴養(yǎng)條件一致。參照試驗(yàn)藥物的常用劑量，適當(dāng)增加或降低藥物質(zhì)量濃度進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，觀察幼魚行為變化、中毒癥狀和死亡情況。根據(jù)預(yù)試驗(yàn)結(jié)果，確定正式試驗(yàn)的藥物質(zhì)量濃度。按照等對(duì)數(shù)間距設(shè)置5個(gè)試驗(yàn)組，同時(shí)設(shè)1個(gè)對(duì)照組（表1）。每組3個(gè)平行，共18個(gè)試驗(yàn)水箱（30 cm×20 cm×15 cm）。每個(gè)試驗(yàn)水箱放入6尾幼魚，試驗(yàn)液為6 L。試驗(yàn)開始8 h連續(xù)觀察幼魚的活動(dòng)狀況和死亡情況，及時(shí)撈出死亡幼魚，準(zhǔn)確記錄24、48和96 h各組幼魚的死亡尾數(shù)。判斷幼魚死亡的標(biāo)準(zhǔn)是使用鑷子觸碰幼魚尾部，魚體無反應(yīng)即定義為死亡[7]。

1.4?數(shù)據(jù)處理

數(shù)據(jù)使用SPSS 22.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用直線內(nèi)插法求出苯扎溴銨、硫醚沙星、阿維菌素和二硫氰基甲烷對(duì)河川沙塘鱧幼魚24、48和96 h的半致死濃度（LC50）。安全濃度（SC）的計(jì)算公式[11]：SC=0.3×48 h LC50/（24 h LC50/48 h LC50）2。

2?結(jié)果與分析

2.1?苯扎溴銨對(duì)河川沙塘鱧幼魚的急性毒性試驗(yàn)

苯扎溴銨對(duì)河川沙塘鱧幼魚的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果如表2所示。對(duì)照組河川沙塘鱧幼魚在96 h內(nèi)無死亡。隨著苯扎溴銨質(zhì)量濃度的增加和處理時(shí)間的延長(zhǎng)，苯扎溴銨對(duì)河川沙塘鱧幼魚的毒害作用增強(qiáng)，其死亡率逐漸升高。苯扎溴銨質(zhì)量濃度為6.00 mg/L時(shí)，2 h后可見河川沙塘鱧幼魚游動(dòng)乏力，對(duì)外界刺激反應(yīng)遲緩，24 h死亡率為66.66%，96 h死亡率達(dá)10000%。苯扎溴銨對(duì)河川沙塘鱧幼魚的LC50和SC如表3所示。根據(jù)表2中的數(shù)據(jù)，建立24、48和96 h的苯扎溴銨質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)（x）與河川沙塘鱧幼魚死亡率（y）之間的直線回歸方程。根據(jù)方程求出苯扎溴銨對(duì)河川沙塘鱧幼魚24、48和96 h的LC50分別為3.23、1.34和0.27 mg/L，SC為0.07 mg/L。

2.2?硫醚沙星對(duì)河川沙塘鱧幼魚的急性毒性試驗(yàn)

硫醚沙星對(duì)河川沙塘鱧幼魚的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果如表4所示。同一硫醚沙星質(zhì)量濃度條件下，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，河川沙塘鱧幼魚的死亡率逐漸升高。同一處理時(shí)間下，隨著硫醚沙星質(zhì)量濃度的增加，河川沙塘鱧幼魚的死亡率亦逐漸升高。硫醚沙星質(zhì)量濃度為5.00 mg/L、處理96 h時(shí)，河川沙塘鱧幼魚的死亡率為22.22%。硫醚沙星質(zhì)量濃度為55.00 mg/L、處理96 h時(shí)，河川沙塘鱧幼魚的死亡率達(dá)10000%。硫醚沙星對(duì)河川沙塘鱧幼魚的LC50和SC如表3所示。采用直線內(nèi)插法對(duì)表4中的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，求出硫醚沙星對(duì)河川沙塘鱧幼魚24、48和96 h的LC50分別為36.39、22.37和11.24 mg/L，SC為2.54 mg/L。

2.3?阿維菌素對(duì)河川沙塘鱧幼魚的急性毒性試驗(yàn)

阿維菌素對(duì)河川沙塘鱧幼魚的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果如表5所示。試驗(yàn)初期各試驗(yàn)組的河川沙塘鱧幼魚便表現(xiàn)為不同程度的急促游動(dòng)、上下竄跳。隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，河川沙塘鱧幼魚游動(dòng)減緩，呼吸頻率降低，對(duì)外界刺激反應(yīng)遲鈍。死亡個(gè)體體表黏液增多，體色發(fā)白，魚體僵直。對(duì)照組河川沙塘鱧幼魚在96 h內(nèi)無死亡。阿維菌素質(zhì)量濃度為0.80 mg/L時(shí)，5 h后河川沙塘鱧幼魚出現(xiàn)死亡，24 h的死亡率為61.11%，96 h的死亡率達(dá)100.00%。阿維菌素對(duì)河川沙塘鱧幼魚的LC50和SC如表3所示。河川沙塘鱧幼魚的死亡率與阿維菌素質(zhì)量濃度呈正相關(guān)（P<0.05），即隨著阿維菌素質(zhì)量濃度的增加，河川沙塘鱧幼魚的死亡率升高。對(duì)表5中的數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，求出阿維菌素對(duì)河川沙塘鱧幼魚24、48和96 h的LC50分別為0.39、0.24和0.11 mg/L，SC為0.03 mg/L。

2.4?二硫氰基甲烷對(duì)河川沙塘鱧幼魚的急性毒性試驗(yàn)

二硫氰基甲烷對(duì)河川沙塘鱧幼魚的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果如表6所示。對(duì)照組河川沙塘鱧幼魚在96 h內(nèi)無死亡。隨著二硫氰基甲烷質(zhì)量濃度的增加，其毒性作用逐漸增強(qiáng)，河川沙塘鱧幼魚的死亡率明顯升高。同一二硫氰基甲烷質(zhì)量濃度條件下，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)，河川沙塘鱧幼魚的死亡率亦逐漸升高。二硫氰基甲烷質(zhì)量濃度為1.00 mg/L時(shí)，24 h內(nèi)河川沙塘鱧幼魚未死亡，96 h的死亡率為22.22%。二硫氰基甲烷質(zhì)量濃度為10.00 mg/L時(shí)，24 h內(nèi)河川沙塘鱧幼魚的死亡率為61.11%，96 h的死亡率達(dá)100.00%。二硫氰基甲烷對(duì)河川沙塘鱧幼魚的LC50和SC如表3所示。根據(jù)表6中的數(shù)據(jù)，對(duì)河川沙塘鱧幼魚的死亡率和二硫氰基甲烷質(zhì)量濃度進(jìn)行回歸分析，以二硫氰基甲烷質(zhì)量濃度對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，以河川沙塘鱧幼魚死亡率為縱坐標(biāo)，得出回歸方程。依據(jù)方程求出二硫氰基甲烷對(duì)河川沙塘鱧幼魚24、48和96 h的LC50分別為7.74、4.32和2.67 mg/L，SC為0.40 mg/L。

3?討論與結(jié)論

半致死濃度（LC50）常用來衡量藥物對(duì)試驗(yàn)魚毒性的大小，其值與藥物的毒性呈負(fù)相關(guān)，即LC50值越小，藥物的毒性越大[12-13]。根據(jù)《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》規(guī)定，農(nóng)藥對(duì)魚類的毒性評(píng)價(jià)通常按96 h LC50的大小劃分為4個(gè)等級(jí)，>10.0 mg/L為低毒，1.0～10.0 mg/L為中毒，0.1～1.0 mg/L為高毒，<0.1 mg/L為劇毒[11]。試驗(yàn)顯示，苯扎溴銨、硫醚沙星、阿維菌素和二硫氰基甲烷對(duì)河川沙塘鱧幼魚96 h的LC50分別為0.27、11.24、0.11和2.67 mg/L，這4種水產(chǎn)藥物對(duì)河川沙塘鱧幼魚的毒性大小順序依次為阿維菌素、苯扎溴銨、二硫氰基甲烷、硫醚沙星。參考藥物對(duì)魚類的毒性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，阿維菌素和苯扎溴銨對(duì)河川沙塘鱧幼魚是高毒藥物，二硫氰基甲烷是中毒藥物，硫醚沙星是低毒藥物。

苯扎溴銨為一種季銨鹽陽離子表面活性廣譜殺菌劑，廣泛用于養(yǎng)殖水體的消毒以及防治嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）、弧菌（Vibrio）等細(xì)菌性疾病和聚縮蟲、鐘蟲等固著類纖毛蟲疾病[6]。該試驗(yàn)結(jié)果表明，苯扎溴銨對(duì)平均體質(zhì)量為（0.26±0.09）g的河川沙塘鱧幼魚的毒性屬于高毒，SC為007 mg/L，低于生產(chǎn)廠商推薦的常規(guī)治療與預(yù)防用量（0.10～0.15 mg/L）。在河川沙塘鱧育苗過程中應(yīng)謹(jǐn)慎或不宜使用苯扎溴銨。而苯扎溴銨對(duì)團(tuán)頭魴（Megalobrama amblycephala）幼魚、草魚（Ctenopharyngodon idellus）幼魚SC分別為0.38、1.23 mg/L[14]，均遠(yuǎn)高于該試驗(yàn)結(jié)果，這可能是不同魚類對(duì)同種藥物的敏感性不同造成的[7]。

硫醚沙星是一種刺激性較強(qiáng)的藥物，對(duì)引發(fā)魚體水霉病的真菌具有良好的殺滅作用，同時(shí)對(duì)嗜水氣單胞菌（A.hydrophila）、鰻弧菌（V.anguillarum）和遲緩愛德華氏菌（Edwardsiella tarda）等細(xì)菌具有殺滅或抑制作用[15]。該試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)于河川沙塘鱧幼魚而言，硫醚沙星屬于低毒藥物。硫醚沙星對(duì)河川沙塘鱧幼魚SC為2.54 mg/L，遠(yuǎn)高于生產(chǎn)廠商推薦的常規(guī)用量（0.12～0.22 mg/L），說明按照生產(chǎn)廠商推薦的潑灑濃度，硫醚沙星可以在河川沙塘鱧育苗和養(yǎng)殖生產(chǎn)中使用。

阿維菌素是由放線菌產(chǎn)生的一類大環(huán)內(nèi)酯抗生素，是一種高效、廣譜的新型驅(qū)蟲藥[16]。已有報(bào)道指出，阿維菌素在土壤中可以迅速降解，對(duì)人低毒，對(duì)魚類和蜜蜂高毒[17]。在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，阿維菌素主要用于殺滅魚體或鰓部寄生的中華鳋、錨頭鳋、車輪蟲、指環(huán)蟲和線蟲幼體等寄生蟲[18]。該試驗(yàn)中，阿維菌素對(duì)河川沙塘鱧幼魚24、48和96 h的LC50分別為0.39、0.24和0.11 mg/L，SC為0.03 mg/L。該試驗(yàn)結(jié)果表明，阿維菌素對(duì)河川沙塘鱧幼魚屬于高毒，且其SC低于生產(chǎn)廠商推薦的用量（0.03～0.05 mg/L）。在河川沙塘鱧苗種培育階段應(yīng)謹(jǐn)慎或不宜使用阿維菌素。

二硫氰基甲烷（MBT）分子式為C3H2N2S2，為白色或淺黃色的針狀晶體，微溶于水，在酸性條件下穩(wěn)定，是一種高效殺藻殺菌化學(xué)藥物，其對(duì)水霉病的防治效果較好[19]。它的作用原理為二硫氰基甲烷在分解過程中產(chǎn)生的硫氰酸根，阻礙了病原微生物呼吸鏈中的電子傳遞，從而導(dǎo)致病原微生物的死亡[20]。該試驗(yàn)結(jié)果表明，二硫氰基甲烷對(duì)河川沙塘鱧幼魚屬中毒藥物，SC為0.40 mg/L，高于生產(chǎn)廠商推薦的常規(guī)用量（0.15～0.18 mg/L），說明二硫氰基甲烷可作為河川沙塘鱧育苗過程中的病害防治藥物。但考慮到二硫氰基甲烷在酸性條件下相對(duì)穩(wěn)定，在堿性條件下能夠迅速水解，故在利用二硫氰基甲烷預(yù)防和控制河川沙塘鱧的疾病時(shí)，必須從多因素考慮才可實(shí)現(xiàn)預(yù)期的防治效果，并將其可能的危害降至最低[20]。

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