AHP-CRITIC混合加權(quán)法優(yōu)選風(fēng)濕痹痛膏提取工藝

李蕓 戴海蓉 楊秀娟 馬東妮 張楓帆 杜小正

摘要：目的 ?確定指標(biāo)權(quán)重，優(yōu)選風(fēng)濕痹痛膏的最佳提取工藝。方法 ?以出膏率及芍藥苷、單酯型烏頭堿含量為考察指標(biāo)，采用層次分析法（AHP）、基于指標(biāo)相關(guān)性的權(quán)重確定方法（CRITIC）、AHP-CRITIC混合加權(quán)法確定權(quán)重系數(shù)，結(jié)合正交試驗(yàn)優(yōu)選風(fēng)濕痹痛膏復(fù)方提取工藝最佳參數(shù)。結(jié)果 ?采用AHP-CRITIC混合加權(quán)法確定的權(quán)重系數(shù)更符合實(shí)際，按該權(quán)重系數(shù)進(jìn)行綜合評分，優(yōu)選的最佳提取工藝為：加6倍量的水，提取1.5 h，提取2次。結(jié)論 ?AHP-CRITIC混合加權(quán)法較單一方法更全面、合理，所確定的提取工藝穩(wěn)定可行，可為風(fēng)濕痹痛膏的研制開發(fā)提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：風(fēng)濕痹痛膏;層次分析法;CRITIC;AHP-CRITIC混合加權(quán)法;單酯型烏頭堿;芍藥苷;出膏率;提取工藝

中圖分類號：R283.5 ???文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A ???文章編號：1005-5304（2019）12-0079-05

DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2019.12.017 ?開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識碼（OSID）：

Extraction Process of Fengshi Bitong?Paste Based on AHP-CRITIC Mixed Weighting Method

LI Yun， DAI Hairong，YANG Xiujuan， MA Dongni， ZHANG Fengfan， DU Xiaozheng

Gansu University of Chinese Medicine， Lanzhou 730000， China

????Abstract： Objective?To optimize the extraction process of Fengshi Bitong?Paste based on determining the index weight. Methods?Using the ratio of dry extraction and the content of paeoniflorin and monoester aconitine as comprehensive evaluation indexes， the weight coefficient was determined by analytic hierarchy process （AHP）， criteria importance through intercriteria correlation （CRITIC） method， and mixed weighted AHP-CRITIC. And the best?coefficient of extraction process of Fengshi Bitong?Paste was optimized by orthogonal test. Results?The weight coefficient determined by mixed weighted AHP-CRITIC conform to reality. According to the weighting coefficient determined by comprehensive evaluation， the optimal process parameters were as follow： adding 6 times of water， extracting 1.5 hours， and extracting 2 times. Conclusion?Mixed weighted AHP-CRITIC is more comprehensive and reasonable than the single weighting method. The determined extraction process is stable and feasible， which provides a reference for the research and development of Fengshi Bitong?Paste.

????Keywords：?Fengshi Bitong?Paste; analytic hierarchy process （AHP）; criteria importance through intercriteria correlation （CRITIC）; mixed weighted AHP-CRITIC; monoester aconitine; paeoniflorin; ratio of dry extraction; extraction process

風(fēng)濕痹痛膏由甘肅省名中醫(yī)何天有《何氏藥物輔灸療法》中的“風(fēng)濕痹痛散”^[1]衍化而來，以該方為基礎(chǔ)，結(jié)合現(xiàn)代研究及臨床實(shí)踐，加土鱉蟲、馬錢子等，處方由制草烏、炒白芍、醋延胡索、雷公藤等7味藥組成，具有祛風(fēng)散寒、勝濕止痛、舒筋活絡(luò)、活血通絡(luò)功效^[2-3]。前期研究表明，該方可有效緩解肢體關(guān)節(jié)酸楚疼痛、屈伸不利等。藥理研究表明，芍藥苷、烏頭堿等成分均具有鎮(zhèn)痛抗炎、緩解炎性疼痛的作用，臨床多用于治療類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等風(fēng)濕痹證^[4-5]。因此，本研究以芍藥苷、烏頭堿含量及出膏率為考察指標(biāo)，采用層次分析法（AHP）、基于指標(biāo)相關(guān)性的權(quán)重確定方法（CRITIC）、AHP-CRITIC混合加權(quán)法確定權(quán)重系數(shù)，對正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行綜合評分，并根據(jù)評定結(jié)果分析篩選最佳權(quán)重系數(shù)，進(jìn)而對最佳權(quán)重系數(shù)所評估分?jǐn)?shù)進(jìn)行方差分析，優(yōu)選風(fēng)濕痹痛膏提取工藝，為其制劑工藝研究及臨床使用提供依據(jù)。

1 ?儀器與試藥

Agilent 1100 Series型高效液相色譜儀（美國Agilent科技有限公司），DAD檢測器;BSA224S電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）;BT125D型十萬分之一電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器有限公司）;Milli-Q超純水系統(tǒng)（德國墨克生命科學(xué)公司）;KDM型調(diào)溫電熱套（山東鄄城華魯電熱儀器有限公司）;KQ-500DE型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;SHB-ⅢA循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）;DHG-9240A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科技有限公司）。

制草烏、黑順片、土鱉蟲、醋延胡索、雷公藤、制馬錢子、炒白芍飲片均購自蘭州佛慈養(yǎng)生堂，經(jīng)甘肅中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院楊錫倉主任中藥師鑒定，符合2015年版《中華人民共和國藥典》各藥項(xiàng)下規(guī)定。芍藥苷、苯甲酰烏頭堿、苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰次烏頭堿原堿對照品（HPLC純度≥98.00%，批號分別為CHB160512、CHB170324、CHB171203、CHB170324），成都克洛瑪生物科技有限公司;乙腈、甲醇均為色譜純;95%乙醇為分析純;水為超純水（Milli-Q超純水系統(tǒng)制備）。

2 ?方法與結(jié)果

2.1 ?評價(jià)指標(biāo)的建立

2.1.1 ?出膏率

將處方水提液濃縮至稠浸膏，按2015年版《中華人民共和國藥典》（四部）通則0601相對密度測定法第一法比重瓶法、0831干燥失重測定法測定比重及干燥失重^[6]，計(jì)算出膏率。

2.1.2 ?芍藥苷含量測定

2.1.2.1 ?色譜條件

參照2015年版《中華人民共和國藥典》（一部）炒白芍項(xiàng)下含量測定方法，采用Aglient Extend SB- C18色譜柱，流動相為0.1%磷酸-乙腈（86∶14），柱溫25 ℃，檢測波長230 nm，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量10 μL^[7]。

2.1.2.2 ?對照品溶液制備

精密稱取芍藥苷對照品25.00 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，即得1.00 mg/mL的芍藥苷對照品溶液。

2.1.2.3 ?供試品溶液制備

取提取浸膏適量，精密稱定，加50%甲醇50 mL，超聲處理（功率300 W，頻率50 kHz，溫度25 ℃）20 min，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得。

2.1.2.4 ?陰性對照溶液制備

取處方中除炒白芍外的其他藥物飲片，按提取工藝制備，得炒白芍陰性對照品，按供試品溶液制備方法制備，即得。

2.1.2.5 ?專屬性試驗(yàn)

精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀測定，結(jié)果陰性對照無干擾，表明方法專屬性好。

2.1.2.6 ?線性關(guān)系考察

分別精密吸取上述對照品溶液1、2、4、6、8 mL，置10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度線，以濃度對峰面積進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=10 428X+263.48（r=0.999 5），表明芍藥苷在0.005～0.800 mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.1.2.7 ?精密度試驗(yàn)

精密吸取芍藥苷對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，測定并計(jì)算芍藥苷峰面積，結(jié)果RSD=0.57%，表明儀器精密度良好。

2.1.2.8 ?重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取1號樣品6份，制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，結(jié)果芍藥苷含量RSD=1.62%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.2.9 ?穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取1號樣品，制備供試品溶液，按上述色譜條件，分別于0、0.5、2、4、8、12、24 h測定，結(jié)果芍藥苷峰面積RSD=1.13%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.2.10 ?加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取1號樣品適量，共6份，置50 mL量瓶中，按1∶1比例加入對照品適量，制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，結(jié)果平均回收率為102.5%，RSD=1.73%。

2.1.2.11 ?樣品測定

將正交試驗(yàn)所得浸膏樣品按上述方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣分析，以標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算各樣品中芍藥苷含量。

2.1.3 ?單酯型烏頭堿含量測定

2.1.3.1 ?色譜條件

參照2015年版《中華人民共和國藥典》（一部）制草烏項(xiàng)下含量測定方法。采用Aglient Extend SB- C18色譜柱，以0.l mol/L醋酸銨溶液為流動相A，以乙腈-四氫呋喃（25∶15）為流動相B，梯度洗脫（0 min，15%B;48 min，26%B;49 min，35%B;58 min，35%B;65 min，15%B），柱溫25 ℃，檢測波長235 nm，流速1.0 mL/min，進(jìn)樣量20 μL^[7]。

2.1.3.2 ?對照品溶液制備

取苯甲酰烏頭原堿0.491 mg、苯甲酰新烏頭原堿0.584 mg、苯甲酰次烏頭原堿0.506 mg，精密稱定，加異丙醇-三氯甲烷（1∶1）混合溶液，分別制成每1 mL含苯甲酰烏頭原堿491 μg、苯甲酰新烏頭原堿584 μg和苯甲酰次烏頭原堿506 μg的混合對照品溶液。

2.1.3.3 ?供試品溶液制備

取正交試驗(yàn)所得浸膏適量，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加氨試液3 mL，精密加入異丙醇-乙酸乙酯（1∶1）混合溶液50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理（功率300 W，頻率40 kHz，水溫<25 ℃）30 min，放冷，再稱定質(zhì)量，用異丙醇-乙酸乙酯（1∶1）混合溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，過濾。精密量取續(xù)濾液25 mL，40 ℃以下減壓回收溶劑至干，殘?jiān)芗尤氘惐?三氯甲烷（1∶1）混合溶液2 mL溶解，過濾，取續(xù)濾液，即得。

2.1.3.4 ?陰性對照溶液制備

取處方中除制草烏、黑順片外的其他藥物飲片，按提取工藝制備，得制草烏、黑順片陰性對照品，按供試品溶液制備方法制備，即得。

2.1.3.5 ?專屬性試驗(yàn)

精密吸取上述對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，結(jié)果陰性對照無干擾，表明方法專屬性好。

2.1.3.6 ?精密度試驗(yàn)

精密吸取混合對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰新烏頭原堿和苯甲酰次烏頭原堿的峰面積RSD分別為0.37%、0.71%、0.66%，表明儀器精密度良好。

2.1.3.7 ?重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取樣品6份，制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰新烏頭原堿和苯甲酰次烏頭原堿含量RSD分別為4.36%、3.09%、3.50%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.1.3.8 ?穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密稱取樣品，制備供試品溶液，按上述色譜條件，分別于0、2、4、8、12、24 h測定，結(jié)果苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰新烏頭原堿和苯甲酰次烏頭原堿峰面積RSD分別為3.11%、2.48%、2.56%，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.1.3.9 ?加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取樣品適量，共6份，置具塞錐形瓶中，分別加入適量對照品，制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，結(jié)果苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰新烏頭原堿和苯甲酰次烏頭原堿的平均回收率分別為103.74%、93.55%、96.31%，RSD分別為3.73%、4.05%、2.99%。

2.1.3.10 ?樣品測定

將正交試驗(yàn)所得浸膏樣品按上述方法制備供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣分析，采用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算各樣品中苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰新烏頭原堿和苯甲酰次烏頭原堿的含量。Cx=Cr×Ax/Ar（Cx為樣品濃度，Cr為對照品濃度，Ax為樣品峰面積，Ar為對照品峰面積）。三者之和為單酯型烏頭堿含量。

2.2 ?原料飲片中有效成分含量測定

分別取炒白芍、黑順片、制草烏飲片，按2015年版《中華人民共和國藥典》各藥含量測定項(xiàng)下方法，檢測芍藥苷、單酯型烏頭堿含量，平行3份，結(jié)果芍藥苷、單酯型烏頭堿含量分別為1.674 0%、0.015 3%、0.029 8%。

2.3 ?提取工藝優(yōu)選

在前期單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)，以加水量（A）、提取時(shí)間（B）、提取次數(shù)（C）為考察因素，采用L₉（3⁴）正交設(shè)計(jì)安排試驗(yàn)，因素水平見表1，試驗(yàn)安排及結(jié)果見表2。

2.4 ?指標(biāo)權(quán)重的確立

2.4.1 ?層次分析法確定權(quán)重

根據(jù)風(fēng)濕痹痛膏藥味君臣佐使配伍規(guī)律、各藥味所含成分的理化性質(zhì)、藥物吸收特點(diǎn)及各成分藥理作用強(qiáng)弱，將芍藥苷含量、單酯型烏頭堿含量和出膏率作為權(quán)重指標(biāo)予以量化，即將3個(gè)指標(biāo)分為3個(gè)層次，并確定各指標(biāo)的優(yōu)先順序?yàn)樯炙庈蘸?單酯型烏頭堿含量>出膏率，構(gòu)建成對比較的優(yōu)先判斷矩陣，同時(shí)賦予各指標(biāo)相對評分，見表3。

由表3得到芍藥苷含量、單酯型烏頭堿含量和出膏率的權(quán)重系數(shù)分別為0.539 6、0.297 0、0.163 4，一致性比例因子（CR）=0.007 9，CR<0.10即指標(biāo)比較的優(yōu)先判斷矩陣具有滿意的一致性，所得權(quán)重系數(shù)有效^[8]。

2.4.2 ?CRITIC確定權(quán)重

由于提取過程中藥味成分間的相互作用，復(fù)方中各成分對總體效果的貢獻(xiàn)不同。CRITIC是一種客觀的權(quán)重賦值方法^[9]。將正交試驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)進(jìn)行線性差值歸一化處理[指標(biāo)成分=（實(shí)測值-最小值）/（最大值-最小值）]，計(jì)算各指標(biāo)對比強(qiáng)度（si）、沖突性（δi）、綜合權(quán)重（ci）與權(quán)重（ω），計(jì)算得到芍藥苷含量、單酯型烏頭堿含量和出膏率的權(quán)重系數(shù)分別為0.263 7、0.368 0、0.368 2，見表4。

2.4.3 ?AHP-CRITIC混合加權(quán)法確定權(quán)重

根據(jù)風(fēng)濕痹痛膏主治功效及組方比例的特點(diǎn)，AHP量化了評價(jià)指標(biāo)兩兩比較判斷的優(yōu)先信息，主觀評價(jià)各指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)，基本體現(xiàn)了復(fù)方君臣佐使關(guān)系及各成分對總體效果的貢獻(xiàn);CRITIC客觀評價(jià)了相應(yīng)指標(biāo)的權(quán)重系數(shù)，不僅考慮各樣本數(shù)據(jù)的變異性對賦權(quán)的影響，還考慮了各指標(biāo)間的沖突性，使賦權(quán)更加客觀。進(jìn)一步將這2種方法結(jié)合，計(jì)算綜合權(quán)重（ω_綜合ij）。ω_綜合ij=ω_AHP-ijω_CRITIC-ij/∑ω_AHP-ijω_CRITIC-ij。經(jīng)計(jì)算，芍藥苷含量、單酯型烏頭堿含量和出膏率的綜合權(quán)重系數(shù)分別為0.456 4、0.350 6、0.193 0。

2.5 ?綜合評價(jià)結(jié)果比較

分別用AHP、CRITIC及AHP-CRITIC混合加權(quán)法計(jì)算得到的權(quán)重系數(shù)對結(jié)果進(jìn)行綜合評分，結(jié)果見表5。直觀分析顯示3種方法計(jì)算所得綜合評分結(jié)果差異不大;相關(guān)系數(shù)分析顯示，AHP與AHP-CRITIC混合加權(quán)法的相關(guān)系數(shù)為0.953，CRITIC與AHP-CRITIC混合加權(quán)法的相關(guān)系數(shù)為0.623，AHP與CRITIC的相關(guān)系數(shù)為0.366，三者相關(guān)性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;就權(quán)重系數(shù)而言，AHP與CRITIC的相關(guān)系數(shù)為0.937，兩者相關(guān)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.113），說明2種方法所反映的信息不具有疊加性，比較發(fā)現(xiàn)，AHP-CRITIC混合加權(quán)法從主客觀兩方面考慮，所體現(xiàn)的信息更為全面，較單一方法更合理、更符合實(shí)際。

2.6 ?提取工藝的確定

根據(jù)AHP-CRITIC混合加權(quán)法計(jì)算得到的權(quán)重系數(shù)進(jìn)行綜合評分，采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理，直觀分析見表6，方差分析見表7。直觀分析可見，影響提取工藝的主次因素為A>B>C;方差分析結(jié)果表明，加水量、提取次數(shù)和提取時(shí)間對其均具有顯著影響（P<0.05）。最終得到的最佳條件為A₁B₂C₂，即加6倍量水，提取1.5 h，提取2次。

2.7 ?驗(yàn)證試驗(yàn)

取處方飲片73 g，以所得最佳提取工藝進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，測定出膏率及芍藥苷、單酯型烏頭堿含量，計(jì)算轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見表8。所得工藝簡便、穩(wěn)定、可行。

3 ?討論

本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)風(fēng)濕痹痛膏中單酯型烏頭堿轉(zhuǎn)移率略低，可能是復(fù)方中藥物配伍相互影響所致。有研究顯示，川烏與白芍共煎后，烏頭堿煎出量降低，芍藥苷煎出量增加^[10-11]，與本研究結(jié)果一致。中藥復(fù)方成分復(fù)雜，優(yōu)選提取工藝不能以單一成分作為指標(biāo)^[12-13]，目前多以指標(biāo)成分含量、出膏率、藥理活性等多指標(biāo)綜合評價(jià)優(yōu)選工藝參數(shù)。本方中白芍用量較大，鎮(zhèn)痛作用較強(qiáng)，因此選擇芍藥苷含量為評價(jià)指標(biāo)。制草烏為方中君藥，具有祛風(fēng)除濕功效，烏頭堿為其有效成分，炮制后主要含單酯型生物堿，故選其作為評價(jià)指標(biāo)。此外，出膏率是控制制劑質(zhì)量的重要指標(biāo)，用于控制提取藥液的濃縮程度。因此，本研究綜合選用上述指標(biāo)，可較合理地評價(jià)風(fēng)濕痹痛膏的提取工藝。AHP-CRITIC混合加權(quán)法綜合考慮主客觀兩方面因素^[14-15]，克服了單一方法賦權(quán)的主觀性和片面性?？蔀轱L(fēng)濕痹痛膏的水提工藝建立較為全面、合理的綜合評價(jià)體系。

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（收稿日期：2019-01-10）

（修回日期：2019-03-19;編輯：陳靜）