一株西藏綿羊鏈球菌的分離與鑒定

達(dá)娃卓瑪

（西藏自治區(qū)拉薩市堆龍德慶區(qū)獸醫(yī)站，西藏 拉薩 851400）

羊鏈球菌病（Streptococcusovis）又稱為羊敗血性鏈球菌病，是危害綿羊、山羊的嚴(yán)重疫病，廣泛分布于我國(guó)多個(gè)省市[1]。但由于不同地區(qū)流行的血清型不同，各血清之間相互免疫能力不強(qiáng)等特點(diǎn)[2],羊鏈球菌時(shí)有發(fā)生。

2018年4月，西藏某村綿羊出現(xiàn)發(fā)熱，精神沉郁，后期出現(xiàn)了食欲廢絕，呼吸困難，下頜淋巴結(jié)、最終死亡。

1 材料與方法

1.1 病料

2018年4月，西藏某村采集疑似羊鏈球菌病料：肺臟、肝臟、脾臟和淋巴結(jié)，保存至-20℃，待檢。

1.2 主要試劑

氨芐西林、青霉素、頭孢氨芐、氧氟沙星、環(huán)丙沙星、諾氟沙星、頭孢唑啉、新霉素、多西環(huán)素、慶大霉素、卡那霉素等 11 種抗菌藥物均購(gòu)自杭州微生物試劑有限公司。

1.3 細(xì)菌的分離培養(yǎng)及純培養(yǎng)

將肺臟、肝臟、脾臟和淋巴結(jié)接種于血平板上，置37 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18 h；挑取疑似的單個(gè)菌落進(jìn)行細(xì)菌純培養(yǎng)。

1.4 染色鏡檢

將純培養(yǎng)后的單個(gè)菌落涂在干凈的載玻片上進(jìn)行干燥固定后細(xì)菌革蘭氏染色，鏡檢。

1.5 生化試驗(yàn)

挑取菌落接種于葡萄糖、乳糖、麥芽糖、果糖、山梨醇、甘露醇），精氨酸、七葉苷、V-P、還原硝酸鹽等生化培養(yǎng)基上進(jìn)行細(xì)菌鑒定。

1.6 藥敏試驗(yàn)

用滅菌涂棒將培養(yǎng)的菌液均勻涂布于血平板上，藥敏紙片貼壓于血平板上，37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌的分離培養(yǎng)

從肝臟中分離出1株大小一致透明、淡灰色圓形小菌落。

2.2 染色鏡檢

對(duì)純化后的菌落進(jìn)行革蘭染色，鏡檢，分離菌株呈藍(lán)紫色，為 圓形或卵圓形，排列成長(zhǎng)鏈狀或成對(duì)排列（見圖 1）。

圖1 細(xì)菌染色結(jié)果

2.3 生化試驗(yàn)結(jié)果

與相關(guān)教材進(jìn)行比對(duì)，其生化特性與牛摩拉菌的生化特性基本一致（見表1），初步確定該菌為牛摩拉菌。

表1 生化特性

2.4 藥敏試驗(yàn)

選用 11種獸醫(yī)臨床中常用的抗菌藥物，采用K-B紙片法進(jìn)行耐藥檢測(cè)。結(jié)果顯示，分離菌株對(duì)所選用的抗菌藥物有不同程度的耐藥現(xiàn)象（見表2）。

表2 藥敏試驗(yàn)判定標(biāo)準(zhǔn)

3 討論

羊鏈球菌病在西藏地區(qū)已經(jīng)有相關(guān)報(bào)道[3-4]，本試驗(yàn)從西藏地區(qū)某村病死綿羊體內(nèi)分離到一株革蘭氏陽性球菌，經(jīng)臨床癥狀及實(shí)驗(yàn)室診斷為羊鏈球菌。

本次分離的菌株對(duì)常用抗菌藥物存在一定的耐藥性現(xiàn)象。其中頭孢氨芐、頭孢唑啉、青霉素、新霉素和多西環(huán)素產(chǎn)生耐藥，對(duì)氨芐西林、慶大霉素、卡那霉素中介，對(duì)氧氟沙星、環(huán)丙沙星和諾氟沙星敏感?？梢娢鞑鼐d羊鏈球菌耐藥性較為嚴(yán)重，可能該地區(qū)飼養(yǎng)綿羊過程中存在抗生素使用不當(dāng)?shù)默F(xiàn)象，因此，需要大力宣傳抗生素耐藥相關(guān)專業(yè)知識(shí)，讓農(nóng)戶掌握合理使用抗菌藥物方法，大幅提升知曉率。