PRG凝膠在兔LARS人工韌帶重建前交叉韌帶術(shù)后骨韌帶愈合中的應(yīng)用及安全性研究

朱艷玲

廣東省佛山市第五人民醫(yī)院外一科，廣東 佛山 528211

關(guān)節(jié)鏡下前交叉韌帶(Anterior Cruciate Ligaments,ACL)重建術(shù)是臨床上常用的治療廣泛，廣泛用于ACL損傷、糾正膝關(guān)節(jié)不穩(wěn)及延緩膝關(guān)節(jié)退行性病變中。手術(shù)過程中常用的移植物包括：自體肌腱、同種異體肌腱、人工韌帶等。自體骨雖然能滿足臨床治療需要，但是遠(yuǎn)期療效欠佳，并發(fā)癥發(fā)生率較高；而同種異體肌腱則受到取材的影響，導(dǎo)致異物排斥反應(yīng)發(fā)生率較高，容易增加感染傳染性疾病發(fā)生率。而前交叉韌帶則能恢復(fù)膝關(guān)節(jié)穩(wěn)定性、功能，避免關(guān)節(jié)及其他結(jié)構(gòu)繼發(fā)性損傷[1]。因此，手術(shù)過程中選擇合適的移植物對(duì)提高生物相容性、可靠的力學(xué)性能具有重要的作用。臨床研究表明[2]：在富血小板血漿中加入激活劑后能形成膠凍狀半固體，其主要結(jié)構(gòu)為纖維蛋白網(wǎng)和血小板等，能通過脫顆作用，釋放多種對(duì)細(xì)胞趨勢、增殖及多向分化作用的生長因子。因此，本文以病例隨機(jī)對(duì)照展開，探討PRG凝膠在兔LARS人工韌帶重建前交叉韌帶術(shù)后骨韌帶愈合中的應(yīng)用效果，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料選擇家兔30只作為對(duì)象，所有家兔均完成前交叉韌帶動(dòng)物模型建立，隨機(jī)數(shù)字表分為對(duì)照組(n=15)和觀察組(n=15)。入組健康成年家兔檢疫合格，雌雄不限，體重(2.5～3.6)kg，平均(2.94±0.56)kg。動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK-(吉)2007-0003，所選動(dòng)物均由醫(yī)學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，健康成年家兔常規(guī)飼養(yǎng)，自由攝食、飲水，光照12h，建模前12h禁食。

1.2 儀器與設(shè)備本研究中所需儀器、設(shè)備及試劑見表1。

表1 儀器與設(shè)備

1.3 方法所有家兔均完成前交叉韌帶動(dòng)物模型建立：①手術(shù)入路。采用單側(cè)膝關(guān)節(jié)髕旁內(nèi)側(cè)入路，逐層切開到關(guān)節(jié)腔，切除髕下脂肪，充分暴露前交叉韌帶脛骨部位。對(duì)照組僅植入LARS人工韌帶，觀察組在對(duì)照組基礎(chǔ)上聯(lián)合PRG凝膠治療，將上、下止點(diǎn)之間全部韌帶組織、表面覆蓋滑膜組織切除；②建立脛骨隧道。選擇脛骨平臺(tái)內(nèi)、外側(cè)8mm作為進(jìn)入點(diǎn)，以交叉韌帶足印后方內(nèi)側(cè)踝間嵴前側(cè)作為手術(shù)出口，借助LARS人工韌帶專用脛骨定位器完成定位，給予克氏針1.8mm構(gòu)建隧道，采用LARS人工韌帶專用平頭空心鉆沿著克氏針鉆完成脛骨隧道構(gòu)建[3]；③確定股骨隧道。結(jié)合家兔情況在踝間窩后方5mm部位，在10:30～11:00部位保持膝關(guān)節(jié)90°屈曲，利用克氏針將股骨鉆通，沿著克氏針方向依次切開皮膚，套入LARS人工韌帶，并完成軟組織、股骨骨皮質(zhì)分離，構(gòu)建股骨隧道[4]。④LARS人工韌帶的安裝。上述手術(shù)操作完畢后，利用LARS人工韌帶將LARS人工到從脛骨隧道傳入，并從股骨隧道穿出，利用引導(dǎo)鋼絲將LARS從脛骨隧道向股骨隧道拉出，結(jié)合每一位家兔情況調(diào)整關(guān)節(jié)腔內(nèi)韌帶纖維長度，保持自由纖維旋轉(zhuǎn)。手術(shù)完畢后利用LARS金屬鈦固定螺釘進(jìn)行固定，切除多于的人工韌帶。

1.4 觀察指標(biāo)①掃描電鏡觀察纖維組織。兩組家兔處理30個(gè)月后取韌帶植入部位，放置在3%甲醛溶液中，連續(xù)進(jìn)行48h固定，經(jīng)蒸餾水沖洗后放置在CO2臨界點(diǎn)干燥易的壓力腔內(nèi)完成干燥，噴金后掃描電鏡下觀察組織形態(tài)[5]。②組織學(xué)。兩組家兔處理30個(gè)月后取韌帶植入部位，放置在3%甲醛溶液中，連續(xù)進(jìn)行48h固定，石蠟包埋后制備5um切片，行HE染色[6]。③安全性。記錄兩組家兔治療過程中安全性。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析采用SPSS18.0軟件處理，計(jì)數(shù)資料采用[例(%)]表示，進(jìn)行χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料采用(±s)表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組掃描電鏡觀察纖維組織比較兩組家兔均完成手術(shù)治療，且掃描電鏡下均可見明顯致密的纖維組織，觀察組LARS人工韌帶表面覆蓋較多自體組織，且高放大倍率下可見人工韌帶自體纖維組織緊密、均勻排列；而對(duì)照組自體纖維組織相對(duì)較少，排列缺乏規(guī)律性，見圖1。

圖1 兩組掃描電鏡結(jié)果(×200)

2.2 兩組組織學(xué)結(jié)果比較兩組處理30個(gè)月后，兩組LARS人工韌帶關(guān)節(jié)腔內(nèi)游離的部分與骨隧道內(nèi)部均被自體組織包繞，且多為長梭形排列，存在少許纖維組織；HE染色下觀察組排列具有一定的規(guī)律性，存在少許毛細(xì)血管浸潤生長，未見壞死組織；對(duì)照組排列缺乏規(guī)律性，可見少許壞死組織，見圖2。

圖2 兩組HE染色比較(×100)

2.3 兩組安全性比較兩組家兔手術(shù)后切口未見感染，家兔均未出現(xiàn)發(fā)熱癥狀，切口良好，膝關(guān)節(jié)無腫脹、積液；術(shù)后3周家兔均能正常負(fù)重行走，步態(tài)、步速正常。

3 討論

前交叉韌帶重建是前交叉韌帶斷裂主要方法，通過手術(shù)能完成韌帶的重建，但是術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率較高，難以達(dá)到預(yù)期的修復(fù)效果[7]。本研究中，以家兔作為對(duì)象，借助LARS人工韌帶完成前交叉韌帶重建，并給予PRG凝膠進(jìn)行干預(yù)，結(jié)果表明：家兔經(jīng)PRG凝膠干預(yù)后活動(dòng)度恢復(fù)正常，且術(shù)后4周能爬坡，是相對(duì)理想的治療方法。PRG凝膠最早于1984年由國外學(xué)者從血漿中提取獲得，且經(jīng)激活后能誘導(dǎo)血小板釋放多種生長因子[8]。國內(nèi)學(xué)者[9]對(duì)PRG成分進(jìn)行分析，結(jié)果表明：PRG中含有機(jī)體損傷修復(fù)所需的多種生長因子，包括：血小板衍生生長因子、血管內(nèi)皮生長因子及成纖維細(xì)胞生長因子的。本研究中，將PRG用于兔LARS人工韌帶重建前交叉韌帶術(shù)后骨韌帶愈合中有助于促進(jìn)家兔韌帶部位修復(fù)，能獲得良好的修復(fù)效果。本研究中，兩組家兔均完成手術(shù)治療，且掃描電鏡下均可見明顯致密的纖維組織，觀察組LARS人工韌帶表面覆蓋較多自體組織，且高放大倍率下可見人工韌帶自體纖維組織緊密、均勻排列；而對(duì)照組自體纖維組織相對(duì)較少，排列缺乏規(guī)律性。國內(nèi)學(xué)者研究表明：在PRG中加入促凝劑后，不僅能激活血小板釋放大量生長因子，亦可激活纖維蛋白使其形成具備三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠，更加有助于細(xì)胞的增殖、分化及黏附，從而發(fā)胡良好的生物學(xué)作用[10]。本研究中，兩組處理30個(gè)月后，兩組LARS人工韌帶關(guān)節(jié)腔內(nèi)游離的部分與骨隧道內(nèi)部均被自體組織包繞，且多為長梭形排列，存在少許纖維組織；HE染色下觀察組排列具有一定的規(guī)律性，存在少許毛細(xì)血管浸潤生長，未見壞死組織；對(duì)照組排列缺乏規(guī)律性，可見少許壞死組織。

綜上所述，將PRG凝膠用于兔LARS人工韌帶重建前交叉韌帶術(shù)后骨韌帶愈合中能促進(jìn)纖維組織誘導(dǎo)能力，可促進(jìn)骨組織愈合，安全性較高，值得推廣應(yīng)用。