張 悅,周 萌,王 楮,劉嬌嬌,張晨曦,張 雪,張麗媛
(黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)食品學(xué)院,黑龍江大慶 163319)
三嗪除草劑是目前很多國家廣泛使用的除草劑,在全世界范圍內(nèi)應(yīng)用越來越多[1-2],很多研究者針對三嗪除草劑的毒性進(jìn)行研究,發(fā)現(xiàn)并證明他們對環(huán)境和人類具有很大的危害[3-5],這類除草劑會危害人體、動植物和水生生物的健康,造成免疫系統(tǒng)的破壞,甚至致癌。很多國家已經(jīng)將三嗪除草劑列入內(nèi)分泌干擾化合物名單。因此,三嗪類除草劑對人類和環(huán)境的潛在危害不容忽視[6-7]。很多國家已經(jīng)制定了最大殘留限量,在歐盟,玉米、蔬菜,以及農(nóng)作物上的殺蟲劑最大殘留限量有明確的法律規(guī)定(歐盟指令2002/32/EC,法規(guī) (EC) 396號 /2005,2008/149/EC委員會指令和委員會法規(guī)(歐盟)212號/2013),除草劑的最大殘留限量為0.05~0.10 mg/kg。環(huán)境保護(hù)署規(guī)定,大多數(shù)農(nóng)產(chǎn)品的除草劑最大殘留限量為0.25 mg/kg。最大殘留限量是進(jìn)出口農(nóng)產(chǎn)品檢測的重要指標(biāo)[8]。因此,有效的控制和檢測三嗪類除草劑殘留量是非常重要的。
采用離子液體[9-10]泡沫浮選技術(shù)有機(jī)溶劑萃取蕎麥汁樣品中的4種除草劑,包括草凈津、敵草凈、密草通、特丁津。目前,對除草劑的提取和研究主要集中于環(huán)境樣品,而對蕎麥汁樣品的研究很少。高效液相色譜法用于測定4種三嗪除草劑,離子液體作為提取溶劑和發(fā)泡劑,研究和優(yōu)化各種試驗(yàn)影響因素。
草凈津(Cyanazine)、敵草凈(Metribuzin)、密草通(Secbumeton)、特丁津(Terbuthylazine),中國藥品生物制品檢定所(北京) 提供;[C2MIM][BF4](純度 >98.0%)、[C4MIM][BF4](純度 >99.0%)、[C6MIM][BF4](純度 >98.0%)、[C8MIM][BF4](純度>99.0%)、[C2MIM][PF6](純度 >98.0%)、[C4MIM][PF6](純度 >98.0%)、[C6MIM][PF6](純度 >98.0%)、[C8MIM][PF6](純度 >97.0%)、[C6MIM]Cl(純度為98.0%) 上海成杰化工有限公司(上海) 提供;乙腈、甲醇(色譜純),Dikma科技有限公司(美國)提供;其他所有分析純試劑均由北京化工廠提供;試驗(yàn)用水為Milli-Q高純水。
用甲醇配制除草劑的標(biāo)準(zhǔn)溶液為500 μg/mL,試驗(yàn)過程中根據(jù)需要用甲醇稀釋來改變標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度,即配即用。所有的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液避光保存在溫度為4℃的環(huán)境中。
1200型高效液相色譜儀、XDB-C18型色譜柱(150 mm×4.6 mm id,3.5 μm),美國 Agilent公司產(chǎn)品。柱溫控制在30℃,樣品進(jìn)樣量為20 μL,流動相:乙腈∶水=80∶20,檢測波長為228 nm,參考波長和帶寬分別為360 nm和4 nm。氮?dú)獯蹈蓛x。
離子液體溶劑浮選原理圖見圖1。
圖1 離子液體溶劑浮選原理圖
將燕麥充分研磨,過80目篩,加水混勻,在50 mL燒杯中加入10 mL蕎麥汁樣品,隨后再加入30 μL離子液體,劇烈陣搖,得到混合液,隨后將混合液轉(zhuǎn)移到浮選瓶內(nèi),加入5 mL有機(jī)溶劑,打開載氣,設(shè)定流量200 mL/min,浮選時間10 min,隨著浮選繼續(xù),目標(biāo)分析物會隨泡沫轉(zhuǎn)移到有機(jī)相中。浮選完畢后,用注射器抽取出余下的有機(jī)溶劑,用氮?dú)獯蹈蓛x將其吹干,用乙腈溶解、過膜,用高效液相色譜儀測定。
2.1.1 離子液體類型的影響
離子液體作為提取劑和發(fā)泡劑,起到非常重要的作用。在準(zhǔn)備試驗(yàn)中,選擇了[C2MIM][BF4],[C4MIM][BF4], [C6MIM][BF4], [C8MIM][BF4], [C2MIM][PF6], [C4MIM][PF6], [C6MIM][PF6], [C8MIM][PF6]和[C6MIM]Cl共9種離子液體。經(jīng)過分析發(fā)現(xiàn),[C2MIM][BF4], [C4MIM][BF4], [C2MIM][PF6]和 [C4MIM][PF6]這4種離子液體發(fā)泡能力較低,因?yàn)殡x子液體的發(fā)泡能力取決于陽離子位上烷基鏈的長度。因此,試驗(yàn)主要 測 定 [C6MIM][BF4], [C8MIM][BF4], [C6MIM][PF6],[C8MIM][PF6]和[C6MIM]Cl對回收率的影響。選擇[C8MIM][BF4]做離子液體時,回收率最高。因此,選擇[C8MIM][BF4]做離子液體提取和發(fā)泡劑。
離子液體類型對試驗(yàn)的影響見圖2。
圖2 離子液體類型對試驗(yàn)的影響
[C8MIM][BF4]體積的影響見圖3。
圖3 [C8MIM][BF4]體積的影響
對[C8MIM][BF4]體積也進(jìn)行了研究,在 10~30 μL,回收率隨體積的增長逐漸上升;在30~50 μL,回收率基本不變。因此,離子液體的最佳體積為30 μL。
2.1.2 載氣流量的影響
載氣流量的影響見圖4。
圖4 載氣流量的影響
當(dāng)載氣流量很低時,幾乎沒有氣泡形成,導(dǎo)致低的回收率;隨著氮?dú)饬髁康脑黾?,氣泡的?shù)量和回收率也隨之增加;然而,當(dāng)流量太高時,溶液中會形成渦流,使溶劑表面的氣泡回到溶液中,導(dǎo)致低的回收率。試驗(yàn)中設(shè)置的氮?dú)饬髁繛?00 mL/min。
2.1.3 浮選時間的影響
浮選時間的影響見圖5。
圖5 浮選時間的影響
當(dāng)浮選時間太短時,三嗪除草劑不能完全從混合樣品中提取出;當(dāng)浮選時間達(dá)到10 min時,分析物的回收率達(dá)到最大值。因此,浮選時間設(shè)定為10 min。
2.1.4 有機(jī)溶劑類型的影響
有機(jī)溶劑類型的影響見圖6。
圖6 有機(jī)溶劑類型的影響
試驗(yàn)中分別采用正丁醇、環(huán)己烷、乙酸乙酯、石油醚作為有機(jī)溶劑。由圖6可知,乙酸乙酯作為有機(jī)溶劑時,回收率最高。因此,選擇乙酸乙酯作為有機(jī)溶劑進(jìn)行試驗(yàn)。
2.2.1 線性關(guān)系
以混合標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度為橫縱標(biāo),以得到的色譜圖對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)品的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
線性關(guān)系見表1。
表1 線性關(guān)系
由表1可知,4種除草劑在0.100~2.00 mg/L內(nèi)線性良好,相關(guān)系數(shù)大于0.999 2。
2.2.2 檢出限和定量限
檢出限與定量限見表2。
檢出限和定量限計算方程為:
s通過分析空白樣品時所獲得的標(biāo)準(zhǔn)偏差,k為標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率。
2.2.3 精密度和加標(biāo)回收試驗(yàn)
在蕎麥汁空白樣品中添加3個質(zhì)量濃度水平的4種除草劑的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行回收率試驗(yàn)。
蕎麥汁樣品分析結(jié)果見表3。
表3 蕎麥汁樣品分析結(jié)果
標(biāo)準(zhǔn)溶液、加標(biāo)樣品和空白樣品的典型色譜圖見圖7。
試驗(yàn)通過對離子液體溶劑浮選蕎麥汁樣品中的4種除草劑的提取條件進(jìn)行優(yōu)化,得出蕎麥汁樣品最佳浮選條件:選用[C8MIM][BF4]作為離子液體,體積為30 μL;有機(jī)溶劑為乙酸乙酯,體積5 mL;載氣流量200 mL/min;浮選時間10 min。蕎麥汁樣品加標(biāo)試驗(yàn)回收率良好、精密度較高、方法檢出限較低。該試驗(yàn)方法適用于浮選蕎麥汁中的三嗪除草劑。
圖7 標(biāo)準(zhǔn)溶液、加標(biāo)樣品和空白樣品的典型色譜圖