• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    雙向發(fā)酵提取燕麥β-葡聚糖及其理化性質研究

    2019-12-26 06:14:36吳迪邴雪王昌濤李萌趙丹張佳嬋
    食品研究與開發(fā) 2019年1期
    關鍵詞:樹花麩皮葡聚糖

    吳迪,邴雪,王昌濤,2,*,李萌,趙丹,張佳嬋

    (1.北京工商大學理學院,植物資源研究開發(fā)北京市重點實驗室,北京100048;2.北京工商大學北京食品營養(yǎng)與人類健康高精尖創(chuàng)新中心,北京100048)

    燕麥起源于我國,目前,燕麥是全球禾谷類農作物的八大糧食之一,主要種植于北半球的溫帶地區(qū)[1]。燕麥中含有豐富的蛋白質、不飽和脂肪酸、維生素、礦物質、β-葡聚糖,有益于身體健康[2]。燕麥β-葡聚糖的分子結構已經被廣泛研究[3-7],其是β-D-吡喃葡萄糖通過 30%的 β-(1→3)糖苷鍵和 70%的 β-(1→4)糖苷鍵連接而成的一種高分子、無分支、線性和黏性多糖。研究表明,燕麥β-葡聚糖具有較強的吸附小分子物質的能力,與蛋白質進行競爭,可與多酚通過氫鍵、疏水相互作用等結合,形成多糖多酚復合物,為機體提供更為持久的抗氧化能力[8]。在食品方面,燕麥β-葡聚糖不僅具有顯著的降血脂作用和減肥功效,還可以作為益生元調節(jié)機體腸道菌群結構[9]。

    所謂“雙向發(fā)酵”是指采用具有一定活性成分的中藥材或藥渣作為藥性基質來代替?zhèn)鹘y(tǒng)的營養(yǎng)基質,并把經過優(yōu)選的菌種加入其中進行微生物轉化,它們構成的發(fā)酵組合稱作藥用菌質[10]。試驗表明,雙向發(fā)酵具有增效擴用及解毒持效的作用[11]。

    藥食用真菌是指對疾病有治療、預防及抑制作用或具有保健功效的一類真菌,在我國傳統(tǒng)醫(yī)藥中占有重要的位置[12]。藥食用真菌的抗氧化活性研究一直是人們探究機體氧化抗氧化平衡的研究熱點,不少研究都表明其含有比較好的抗氧化功能[13]。近年來,藥食用真菌及其活性成分因其獨特的生物活性及安全無毒副作用而被廣泛應用。很多醫(yī)藥公司、企業(yè)、科研院所等一直致力于藥食用菌的研究工作,研制出了一系列藥品和保健品等,并已投入生產[14]。

    故本試驗選用藥食用真菌與燕麥麩皮進行雙向發(fā)酵,獲得更高產量的燕麥β-葡聚糖的同時利用燕麥麩皮,并對燕麥β-葡聚糖的提取工藝進行優(yōu)化,對其理化性質進行進一步的研究,為其在食品中的應用提供可行性參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    燕麥麩皮:張家口面粉廠;靈芝、桑黃、猴頭、紅曲霉、裂褶菌、大球蓋菇、雞樅菌、海鮮菇、黃傘、大杯傘、白玉木耳、灰樹花:中國普通微生物保藏管理中心;α-淀粉酶:上海麥克林生化科技有限公司;馬鈴薯葡萄糖水培養(yǎng)基、β-葡萄糖:青島高科技工業(yè)園海博生物技術有限公司;剛果紅:上海源葉生物有限公司;NaNO3、Na2CO3、酒石酸鉀鈉、硫酸銅(均為分析純):國藥集團化學試劑有限公司;福林酚、苯酚、濃硫酸、氯仿、正丁醇、乙醇(均為分析純):北京北化精細化學品有限責任公司。

    1.2 儀器與設備

    T6紫外分光光度計:北京普析通用儀器有限責任公司;(e2695)高效凝膠色譜、2414示差檢測器:美國沃特世公司。

    1.3 方法

    1.3.1 菌種篩選

    1.3.1.1 菌種的活化

    活化培養(yǎng)基均為馬鈴薯葡萄糖水液體培養(yǎng)基,70 mL培養(yǎng)基裝于250 mL容量瓶中,28℃,180 r/min。斜面中挑取菌落接種于液體培養(yǎng)基中,置于搖床,在適宜的條件下進行菌種的活化。

    1.3.1.2 菌種的純化

    活化的菌種按梯度稀釋進行鋪板,以便獲取單一菌落。

    1.3.1.3 菌種的擴培

    將純化后的菌種接種到馬鈴薯葡萄糖水培養(yǎng)基,在適宜溫度的搖床中培養(yǎng),當OD值=0.6時,即菌種處于對數(shù)生長期時,此時為合適的接種濃度。

    1.3.1.4 菌種的接種和發(fā)酵

    燕麥麩皮與水按照1∶25(g/mL)的比例配制,作為待擴培培養(yǎng)基,吸取已擴培的菌液2 mL接種到200 mL培養(yǎng)基中,pH=5,28℃,180 r/min在搖床中發(fā)酵。

    1.3.1.5 檢測β-葡聚糖

    每隔24小時,取發(fā)酵液,高溫高壓滅菌失活后12 000/min離心20 min,取上清液,用剛果紅法進行β-葡聚糖含量的測定。

    1.3.2 工藝優(yōu)化

    對篩選出的黃傘、大杯傘、灰樹花3種真菌分別與燕麥麩皮進行雙向發(fā)酵,隨后進行工藝優(yōu)化的探究,進行單因素試驗及正交試驗。以β-葡聚糖含量作為指標,以發(fā)酵時間、pH值、發(fā)酵溫度和燕麥麩皮與水混合的料液比作為影響因素進行單因素試驗和正交試驗。

    1.3.3 燕麥β-葡聚糖的純化

    將未經發(fā)酵的燕麥麩皮與水的混合液、黃傘與燕麥麩皮雙向發(fā)酵的發(fā)酵液、灰樹花與燕麥麩皮雙向發(fā)酵的發(fā)酵液、大杯傘與燕麥麩皮雙向發(fā)酵的發(fā)酵液通過去蛋白、去淀粉和醇沉,得到較純的燕麥β-葡聚糖。

    純化的步驟:

    1)將未經發(fā)酵的燕麥麩皮水提液及加入3種真菌的發(fā)酵液,在12 000 r/min的條件下進行離心,10分鐘后,取上清液。

    2)在取出的上清液中加入適量的耐高溫α-淀粉酶,12 000 r/min條件下進行離心,10分鐘后,取上清液進行后續(xù)試驗。

    3)在上清液中加入乙醇,含量達60%,放入4℃冰箱靜置保存過夜,取出后離心,取沉淀。

    4)重復步驟(3),將沉淀收集起來進行后續(xù)的試驗。

    5)在得到的沉淀中加入適量的去離子水進行復溶,冷凍干燥后即可得到較純的燕麥β-葡聚糖。

    1.3.4 高效凝膠色譜法測定β-葡聚糖分子量

    高效凝膠色譜法:流動相:0.15 mol/L NaNO3;凝膠柱:水溶性SB-803HQ、水溶性線性SB-806HQ;保護柱:SB-G;檢測器:激光多角度檢測器Wyatt DAWN HELEOS-II、示差檢測器Wyatt Optilab VEX;泵:LC-20AD;恒溫箱:CTO-20A。

    用流動相配制濃度1 mg/mL β-葡聚糖溶液,在室溫下溶解30 min后進樣,通過軟件ASTRA5.3.4.13得到樣品分子量。

    1.3.5 β-葡聚糖及發(fā)酵液蛋白含量測定

    將4種純化的β-葡聚糖用去離子水配制成1 g/L的溶液,并與純化之前的4種溶液一同進行蛋白含量測定,采用福林酚法。

    稱取 10 g Na2CO3、2 g NaOH、0.25 g酒石酸鉀鈉溶于500 mL去離子水中為A,0.5 g硫酸銅溶于100 mL去離子水為B,A與B按50∶1的體積比配制為試劑甲。取福林酚(sigma company)與去離子水1∶1的體積比配制成試劑乙。不同濃度的標準蛋白質溶液進行測試繪制標準曲線。在1 mL樣品溶液中加入5 mL試劑甲迅速混合放入25℃水浴10 min。逐管加入0.5 mL試劑乙,立即混合,25℃水浴反應30分鐘后在700 nm處測吸光度。

    1.3.6 β-葡聚糖及發(fā)酵液總糖含量測定

    將4種純化的β-葡聚糖用去離子水配制成1 g/L的溶液,并與純化之前的4種溶液一同進行總糖含量測定,采用苯酚硫酸法。

    準確稱取無水葡萄糖100 mg,置于100 mL容量瓶中,用去離子水進行定容,得到濃度1 g/L葡萄糖溶液作為標準溶液。取10 g苯酚,加去離子水190 mL得到濃度為5%苯酚溶液,職于棕色瓶中避光。

    標準曲線繪制:精確稱取濃度為1 g/L葡萄糖溶液1、2、3、4、5 mL,加入 50 mL 容量瓶進行定容,準確吸取2 mL該系列溶液,以去離子水做空白對照,分別置于試管中,進行比色反應,繪制標準曲線。

    樣品測定:取樣品溶液2 mL放入試管中,以2 mL去離子水做為空白對照,加1 mL濃度為5%的苯酚溶液進行混勻;加入5 mL的濃硫酸,混勻,5 min后,封管在沸水浴中反應1 h;取出后冷卻至室溫,在490 nm波長處測吸光度值。

    2 結果與分析

    2.1 菌種篩選

    剛果紅法測β-葡聚糖含量的標準曲線為y=0.003 8x+0.006 5,R2=0.998 48。12種真菌進行雙向發(fā)酵的燕麥麩皮水溶液的β-葡聚糖含量隨時間的變化見圖1。

    圖1 12種真菌雙向發(fā)酵后β-葡聚糖含量Fig.1 Content of β-glucan after bidirectional fermentation of 12 fungi

    其中黃傘、大杯傘、灰樹花3種真菌在生長過程中β-葡聚糖就釋放出來,黃傘、大杯傘在48 h達到穩(wěn)定狀態(tài),β-葡聚糖的含量分別穩(wěn)定在 287、220 μg/mL 左右,β-葡聚糖總含量為未進行雙向發(fā)酵的燕麥麩皮水溶液中的含量的近三倍和兩倍?;覙浠偤吭?2 h達到穩(wěn)定狀態(tài),β-葡聚糖的含量穩(wěn)定在184 μg/mL左右,β-葡聚糖總含量為未進行雙向發(fā)酵的燕麥麩皮水溶液中的β-葡聚糖含量的近三倍。大球蓋菇經發(fā)酵后β-葡聚糖總含量比未發(fā)酵的燕麥麩皮水溶液中的β-葡聚糖含量高,但其數(shù)據(jù)不穩(wěn)定。其余8種真菌在雙向發(fā)酵過程中β-葡聚糖被利用分解,最終含量比未發(fā)酵燕麥麩皮水溶液中的β-葡聚糖含量低。故篩選出黃傘、大杯傘、灰樹花3種真菌進行雙向發(fā)酵以達到增加β-葡聚糖含量的目的,作為后續(xù)β-葡聚糖純化以及功效評價試驗的試驗對象。

    2.2 工藝優(yōu)化

    2.2.1 黃傘燕麥雙向發(fā)酵提取β-葡聚糖工藝優(yōu)化

    2.2.1.1 單因素試驗結果

    試驗結果見表1。

    表1 不同發(fā)酵條件對黃傘與燕麥麩皮水溶液發(fā)酵中β-葡聚糖含量的影響Table 1 Effects of different fermentation conditions on the content of β-glucan in Pholiota adiposa-oat bran aqueous solution

    保持 pH=5、發(fā)酵溫度為 28℃、料液比為1∶25(g/mL),時間選取24、48、72 h,由試驗結果表明,最佳發(fā)酵時間為48 h。

    保持發(fā)酵時間為48 h,發(fā)酵溫度為28℃,料液比為 1 ∶25(g/mL),選取 pH 值為 4、5、6,由試驗結果表明,最佳發(fā)酵pH值為5。

    保持發(fā)酵時間為 48h,pH=5,料液比為 1∶25(g/mL),發(fā)酵溫度選取25、28、37℃,由試驗結果表明,最佳發(fā)酵溫度為28℃。

    保持發(fā)酵時間為48 h,發(fā)酵溫度為28℃,pH值為5,料液比選取為 1 ∶15、1 ∶20、1 ∶25(g/mL),雖然結果為料液比為1∶15(g/mL)時β-葡聚糖含量最高,但考慮原料的利用率選為最佳發(fā)酵料液比為1∶20(g/mL)。

    2.2.1.2 正交試驗結果

    單因素試驗表明,料液比選取 1∶20(g/mL)、時間48 h、pH=5、溫度28℃為黃傘與燕麥麩皮的最佳發(fā)酵條件。設計如下正交試驗,正交試驗因素水平表見表2,試驗結果見表3。

    表2 正交試驗因素水平表-黃傘、燕麥麩皮發(fā)酵Table 2 Table of orthogonal test factor-fermentation of Pholiota adiposa and oat bran

    由表3可知,4個因素對β-葡聚糖得率均有影響,影響大小為D>B>C>A,即發(fā)酵時間、料液比(g/mL)、pH值和發(fā)酵溫度;確定最佳提取工藝組合為A2B1C2D2,即發(fā)酵溫度 28 ℃、料液比 1 ∶20(g/mL)、pH=5、發(fā)酵時間48 h。用正交最佳組合進行驗證,得到β-葡聚糖得率在289 μg/mL左右,與正交試驗結果相似,故選取此組合為最佳組合。

    表3 正交試驗方案與結果-黃傘、燕麥麩皮發(fā)酵Table 3 Protocol and results of orthogonal test-fermentaion of Pholiota adiposa and oat bran

    2.2.2 大杯傘燕麥雙向發(fā)酵提取β-葡聚糖工藝優(yōu)化

    2.2.2.1 單因素試驗結果

    不同發(fā)酵條件對大杯傘與燕麥麩皮水溶液發(fā)酵中β-葡聚糖含量的影響試驗結果見表4。

    保持 pH=5、發(fā)酵溫度為 28℃、料液比為 1∶25(g/mL),時間選取24、48、72 h,由試驗結果表明,最佳發(fā)酵時間為48 h。

    表4 不同發(fā)酵條件對大杯傘與燕麥麩皮水溶液發(fā)酵中β-葡聚糖含量的影響Table 4 Effects of different fermentation conditions on the content of β-glucan in Clitocybe maxima-oat bran aqueous solution

    保持發(fā)酵時間為48 h,發(fā)酵溫度為28℃,料液比為 1 ∶25(g/mL),選取 pH 值為 4、5、6,由試驗結果表明,最佳發(fā)酵pH值為5。

    保持發(fā)酵時間為 48h,pH=5,料液比為 1∶25(g/mL),發(fā)酵溫度選取25、28、37℃,由試驗結果表明,最佳發(fā)酵溫度為28℃。

    保持發(fā)酵時間為48 h,發(fā)酵溫度為28℃,pH值為5,料液比選取為 1 ∶15、1 ∶20、1 ∶25(g/mL),雖然結果為料液比為1∶15(g/mL)時β-葡聚糖含量最高,但考慮原料的利用率選為最佳發(fā)酵料液比為1∶25(g/mL)。

    2.2.2.2 正交試驗結果

    單因素試驗表明,料液比選取 1∶25(g/mL)、時間48 h、pH=5、溫度28℃為大杯傘與燕麥麩皮的最佳發(fā)酵條件。后設計如下正交試驗,正交試驗因素水平表見表5,結果見表6。

    表5 正交試驗因素水平表-大杯傘、燕麥麩皮發(fā)酵Table 5 Table of orthogonal test factor-fermentaion of Clitocybe maxima and oat bran

    由表6可知,4個因素對β-葡聚糖得率均有影響,影響大小為B>C>A>D,即分別為料液比、pH值、發(fā)酵溫度和發(fā)酵時間;確定最佳提取工藝組合為A2B2C2D2,即發(fā)酵溫度 28 ℃、料液比 1 ∶25(g/mL)、pH=5、發(fā)酵時間48 h。用正交最佳組合進行試驗,得到β-葡聚糖得率在237 μg/mL左右,低于正交試驗組合A1B2C2D2,故選正交試驗組合A1B2C2D2為最佳組合。

    表6 正交試驗方案與結果-大杯傘、燕麥麩皮發(fā)酵Table 6 Protocol and results of orthogonal test-fermentaion of Clitocybe maxima and oat bran

    2.2.3 灰樹花燕麥雙向發(fā)酵提取β-葡聚糖工藝優(yōu)化

    2.2.3.1 單因素試驗結果

    不同發(fā)酵條件對灰樹花與燕麥麩皮發(fā)酵液β-葡聚糖含量的影響試驗結果見表7。

    表7 不同發(fā)酵條件對灰樹花與燕麥麩皮發(fā)酵液β-葡聚糖含量的影響Table 7 Effects of different fermentation conditions on the content of β-Glucan in Ramalina-oat bran aqueous solution

    保持 pH=5、發(fā)酵溫度為 28℃、料液比為 1∶25(g/mL),時間選取24、48、72 h,試驗結果表明,最佳發(fā)酵時間為72 h。

    保持發(fā)酵時間為48 h,發(fā)酵溫度為28℃,料液比為 1 ∶25(g/mL),選取 pH 值為 4、5、6,試驗結果表明,最佳發(fā)酵pH值為5。

    保持發(fā)酵時間為 48h,pH=5,料液比為 1∶25(g/mL),發(fā)酵溫度選取25、28、37℃,試驗結果表明,最佳發(fā)酵溫度為25℃。

    保持發(fā)酵時間為48 h,發(fā)酵溫度為28℃,pH值為5,料液比選取為 1 ∶15、1 ∶20、1 ∶25(g/mL),雖然料液比為1∶15(g/mL)時β-葡聚糖含量最高,但考慮原料的利用率選為最佳發(fā)酵料液比為1∶20(g/mL)。

    2.2.3.2 正交試驗結果

    通過單因素試驗表明料液比選取1:20(g/mL)、時間48 h、pH=5、溫度28℃為灰樹花與燕麥麩皮的最佳發(fā)酵條件。后設計如下正交試驗,正交試驗因素水平表見表8,結果見表9。

    表8 正交試驗因素水平表-灰樹花、燕麥麩皮發(fā)酵Table 8 Table of orthogonal test factor-fermentaion of Ramalina and oat bran

    表9 正交試驗方案與結果-灰樹花、燕麥麩皮發(fā)酵Table 9 Protocol and results of orthogonal test-fermentaion of Ramalina and oat bran

    由表9可知,4個因素對β-葡聚糖得率均有影響,影響大小為C>B>D>A,即分別為pH值、料液比、發(fā)酵時間和發(fā)酵溫度;確定最佳提取工藝組合為A2B1C2D2,即提取溫度 25℃、料液比 1 ∶20(g/mL)、pH=5、提取時間72 h。用正交最佳組合進行試驗,得到β-葡聚糖得率在192.58 μg/mL左右,與正交試驗結果類似,故選擇此組合為最佳組合。

    2.3 燕麥β-葡聚糖的純化

    2.3.1 淀粉的去除

    提取過程中,由于溫度的升高,淀粉在提取液中糊化,與β-葡聚糖一起被提取出來,故要去除淀粉。本試驗用α-淀粉酶在80℃下反應,以達到除去淀粉的目的,試驗結果見表10。

    表10 α-淀粉酶水解4種燕麥麩皮發(fā)酵液的效果Table 10 Effect of α-amylase hydrolyzed starch of four oat bran fermentation broth

    考慮到資源和淀粉清除率,在去除純燕麥麩皮提取液時α-淀粉酶加量為1%,反應時間30 min。黃傘燕麥麩皮發(fā)酵液α-淀粉酶加酶量為0.8%,反應時間30 min。大杯傘燕麥麩皮發(fā)酵液α-淀粉酶加酶量為1%,反應時間30 min?;覙浠ㄑ帑滬熎ぐl(fā)酵液α-淀粉酶加酶量為1%,反應時間30 min。

    2.3.2 蛋白的去除

    sevage法去蛋白,硫酸銅法測蛋白含量。3個條件進行單因素試驗,分別為sevage試劑中氯仿與正丁醇體積比 6 ∶1、5 ∶1、4 ∶1、3 ∶1、2 ∶1,sevage試劑的添加量為總體積的 1/6、1/5、1/4、1/3、1/2 及沖洗次數(shù) 1、2、3、4。以去蛋白前后的吸光度差值作為參考。

    1)sevage試劑中氯仿與正丁醇的比例的影響

    控制sevage試劑的添加量為1/2,沖洗次數(shù)為2,sevage試劑中氯仿與正丁醇的比例的影響見圖2。

    圖2 氯仿與正丁醇比例對不同發(fā)酵液蛋白清除率的影響Fig.2 Effect of the ratio of trichloromethane to n-butanol on the protein clearance rate of different fermentation broth

    如圖所示,sevage試劑中氯仿與正丁醇體積比為4∶1時,蛋白質的清除率達到穩(wěn)定,未經發(fā)酵的燕麥麩皮水提液蛋白質清除率在16.5%左右,黃傘燕麥發(fā)酵液的蛋白質清除率在18.75%左右,大杯傘燕麥發(fā)酵液蛋白質清除率在21%左右,灰樹花燕麥發(fā)酵液的蛋白質清除率在19.3%左右。

    2)sevage試劑的添加量的影響

    控制sevage試劑中氯仿與正丁醇體積比為4∶1,沖洗次數(shù)為2,sevage試劑的添加量的影響見圖3。

    圖3 sevage試劑添加比例對不同發(fā)酵液蛋白清除率的影響Fig.3 Effect of the addition ratio of sevag reagent on the protein clearance rate of different fermentation broth

    如圖所示,sevage試劑的添加量為總體積的1/2時,蛋白質的清除率達到穩(wěn)定,未經發(fā)酵的燕麥麩皮水提液蛋白質清除率在16.65%左右,黃傘燕麥發(fā)酵液的蛋白質清除率在18.8%左右,大杯傘燕麥發(fā)酵液蛋白質清除率在21%左右,灰樹花燕麥發(fā)酵液的蛋白質清除率在18.8%左右。

    3)沖洗次數(shù)的影響

    控制sevage試劑中氯仿與正丁醇體積比為4∶1,sevage試劑的添加量為1/2,沖洗次數(shù)的影響如圖4。

    如圖所示,沖洗次數(shù)為2次時,蛋白質的清除率達到穩(wěn)定,未經發(fā)酵的燕麥麩皮水提液蛋白質清除率在16.65%左右,黃傘燕麥發(fā)酵液的蛋白質清除率在18%左右,大杯傘燕麥發(fā)酵液蛋白質清除率在18%左右,灰樹花燕麥發(fā)酵液的蛋白質清除率在19%左右。

    圖4 沖洗次數(shù)對不同發(fā)酵液蛋白清除率的影響Fig.4 Effect of the flushes frequency on the protein clearance rate of fermentation broth

    2.3.3 醇沉的條件選擇

    乙醇濃度對提取液中的多糖沉淀性質有很大的影響,這種影響大部分取決于多糖的相對分子質量和分子的結構等。多糖分子量越大,沉淀所需的乙醇濃度就越小,并且乙醇的濃度越高,糖得率就越高,相應的β-葡聚糖的得率也就越高,結果見表11。

    表11 乙醇濃度對4種發(fā)酵液β-葡聚糖得率的影響Table 11 Effect of Ethanol concentration on β-Glucan yield of four fermentation broth

    由表可知,當乙醇濃度達到60%的時候,β-葡聚糖已完全沉淀,乙醇的濃度升高,β-葡聚糖的得率僅有可忽略不計的增長,故在純化時,選擇濃度為60%進行醇沉。

    2.4 β-葡聚糖分子量測定

    用高效凝膠色譜法測得的3種β-葡聚糖的分子量,結果見圖5。

    未經發(fā)酵的燕麥麩皮水提液純化出的燕麥β-葡聚糖的平均分子量為9.697×105。黃傘燕麥發(fā)酵純化出的β-葡聚糖的平均分子量為1.188×105,大杯傘麥發(fā)酵純化出的β-葡聚糖的平均分子量為2.279×105,灰樹花燕麥發(fā)酵純化出的β-葡聚糖的平均分子量3.516×105,平均分子量大小相比較經雙向發(fā)酵的燕麥β-葡聚糖分子量大小明顯小于未經發(fā)酵的燕麥β-葡聚糖。

    2.5 發(fā)酵液中總糖、蛋白質含量測定

    標準曲線為y=6.27x+0.258 4,R2=0.988 0??偺菧y定結果見圖6。

    圖5 不同發(fā)酵液中純化的β-葡聚糖分子量Fig.5 Molecular mass of different fermentation broth

    圖6 發(fā)酵液總糖含量測定Fig.6 Content of total sugar of the fermentation broth

    由圖6可知,雙向發(fā)酵后發(fā)酵液內總糖的含量比未經發(fā)酵的燕麥水提液含量高。未經發(fā)酵的燕麥水提液的總糖含量為11.375 g/L,黃傘燕麥發(fā)酵液總糖含量為18.05 g/L;大杯傘燕麥發(fā)酵液總糖含量為20.31 g/L,增加量最多;灰樹花燕麥發(fā)酵液總糖含量為16.82 g/L。經過純化之后的β-葡聚糖因去過淀粉并用乙醇沉淀之后,去除了大部分的糖所以總糖含量相對較少。未經發(fā)酵的燕麥β-葡聚糖1 g/L溶液的總糖含量為0.628 g/L;黃傘燕麥發(fā)酵β-葡聚糖1 g/L溶液的總糖含量為0.798 g/L,;大杯傘燕麥發(fā)酵β-葡聚糖1 g/L溶液的總糖含量為0.825 g/L;灰樹花燕麥發(fā)酵β-葡聚糖1 g/L溶液的總糖含量為0.704 g/L。

    蛋白質含量測定結果見圖7。

    圖7 發(fā)酵液及發(fā)酵純化后燕麥β葡聚糖蛋白質含量測定Fig.7 Content of the protein of the fermentation broth and the purified oat-β-Glucan

    燕麥麩皮水提液與3種發(fā)酵液因未經過純化而相對蛋白質含量較高,且發(fā)酵后的蛋白質含量比水提液高,與未發(fā)酵水提液相比,灰樹花燕麥發(fā)酵液增加蛋白質的含量更加顯著,且隨著濃度逐漸升高蛋白質含量呈逐漸升高的趨勢,其次是大杯傘燕麥發(fā)酵液、黃傘燕麥發(fā)酵液。4種β-葡聚糖的水溶液因經過純化去蛋白而含量較少,但依舊存在,是因為蛋白酶將蛋白分解成小分子肽,分子量小且溶于水,所以在純化時不宜沉淀下來,仍可以檢測出,與未發(fā)酵燕麥β-葡聚糖相比,黃傘燕麥β-葡聚糖蛋白含量最高,其次是灰樹花燕麥β-葡聚糖、大杯傘燕麥β-葡聚糖。

    3 結論

    1)利用剛果紅法,從12種藥食用真菌中篩選出雙向發(fā)酵后能使β-葡聚糖總量增加最大的3種真菌,即黃傘、大杯傘、灰樹花,其發(fā)酵穩(wěn)定后發(fā)酵液中所含β-葡聚糖為未進行雙向發(fā)酵的燕麥水溶液中的β-葡聚糖含量的近2倍~3倍。

    2)用1%的耐高溫α-淀粉酶在80℃去除淀粉30 min最為適宜,用seveg法除蛋白時sevage試劑中氯仿與正丁醇的比例為4∶1,sevage試劑的添加量為1/2,沖洗次數(shù)為2次時蛋白質的清除率達到穩(wěn)定,當乙醇濃度在60%時能將β-葡聚糖幾乎完全沉淀下來,醇沉2次效果更好。

    3)經雙向發(fā)酵的燕麥β-葡聚糖平均分子量明顯小于未經發(fā)酵的燕麥β-葡聚糖??偺羌暗鞍踪|含量發(fā)酵后比未經發(fā)酵的含量均升高。與未發(fā)酵水提液相比,灰樹花燕麥發(fā)酵液增加蛋白質的含量更加顯著,且隨著濃度逐漸升高蛋白質含量呈逐漸升高的趨勢,其次為大杯傘燕麥發(fā)酵液、黃傘燕麥發(fā)酵液。與未經發(fā)酵的燕麥水提液相比,大杯傘燕麥發(fā)酵液總糖增加量最多,其次為黃傘燕麥發(fā)酵液、灰樹花燕麥發(fā)酵液。

    猜你喜歡
    樹花麩皮葡聚糖
    感恩生活,給生命一樹花開——讀《花田半畝》有感
    井岡教育(2022年2期)2022-10-14 03:11:40
    麩皮摻假咋識別
    送你一樹花
    陌上花開文學社:播撒文學之種,靜待一樹花開
    學生天地(2019年36期)2019-08-25 08:59:44
    麩皮價格為何再次上漲?
    葡聚糖類抗病誘導劑在水稻上的試驗初報
    五種小麥麩皮烷基酚類化合物體外抗腫瘤作用及初步的機制研究
    小麥麩皮中β-葡聚糖的分離純化及組成研究
    灰樹花中鋅的存在形態(tài)分析
    (1,3)-β-D葡聚糖檢測對侵襲性真菌感染早期診斷的意義
    伦理电影免费视频| 天天一区二区日本电影三级| 国产乱人伦免费视频| av在线蜜桃| 国产av在哪里看| 长腿黑丝高跟| 成年人黄色毛片网站| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 99热精品在线国产| 人妻夜夜爽99麻豆av| 亚洲美女视频黄频| 老汉色av国产亚洲站长工具| 真人一进一出gif抽搐免费| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 久久久久性生活片| 国产av麻豆久久久久久久| 国产精品一区二区精品视频观看| 男人舔女人的私密视频| 国产三级黄色录像| 亚洲成人久久爱视频| 一本精品99久久精品77| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 露出奶头的视频| 久久性视频一级片| 制服人妻中文乱码| 成年版毛片免费区| 少妇人妻一区二区三区视频| 俄罗斯特黄特色一大片| av片东京热男人的天堂| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 一级a爱片免费观看的视频| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 麻豆成人午夜福利视频| 丁香六月欧美| 国产99白浆流出| 黄色女人牲交| 久久精品91无色码中文字幕| 天堂影院成人在线观看| 色老头精品视频在线观看| 人人妻人人澡欧美一区二区| 叶爱在线成人免费视频播放| 老司机午夜十八禁免费视频| 搡老熟女国产l中国老女人| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站 | 精品久久久久久久久久免费视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 亚洲五月婷婷丁香| 国产精品久久电影中文字幕| 特级一级黄色大片| 美女免费视频网站| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 国产伦精品一区二区三区四那| 亚洲欧美日韩东京热| 神马国产精品三级电影在线观看| 欧美黑人欧美精品刺激| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲欧洲精品一区二区精品久久久| 一级毛片高清免费大全| 日韩中文字幕欧美一区二区| 黄片小视频在线播放| 免费看美女性在线毛片视频| 欧美色欧美亚洲另类二区| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产精品98久久久久久宅男小说| 午夜福利欧美成人| 亚洲七黄色美女视频| xxxwww97欧美| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 午夜福利在线在线| 色综合站精品国产| 一进一出抽搐动态| 国产亚洲精品av在线| 亚洲 国产 在线| 九色成人免费人妻av| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 99热这里只有精品一区 | 色综合亚洲欧美另类图片| 欧美激情在线99| 免费看日本二区| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产高清视频在线播放一区| 99精品欧美一区二区三区四区| 亚洲七黄色美女视频| xxxwww97欧美| 日韩精品中文字幕看吧| 国产精品久久久久久精品电影| 免费大片18禁| 国产精品久久电影中文字幕| 国语自产精品视频在线第100页| 最好的美女福利视频网| 51午夜福利影视在线观看| 欧美黄色淫秽网站| 手机成人av网站| 少妇丰满av| 欧美激情在线99| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 51午夜福利影视在线观看| 国产成人欧美在线观看| 婷婷亚洲欧美| 国产精品,欧美在线| 十八禁人妻一区二区| 在线播放国产精品三级| 人妻夜夜爽99麻豆av| 变态另类丝袜制服| 很黄的视频免费| 黑人操中国人逼视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 美女扒开内裤让男人捅视频| 黄色日韩在线| 国产精品一区二区三区四区久久| 久久九九热精品免费| 久久人妻av系列| 亚洲国产高清在线一区二区三| 久久久成人免费电影| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲av免费在线观看| 午夜福利视频1000在线观看| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产视频一区二区在线看| 香蕉av资源在线| 桃红色精品国产亚洲av| 看黄色毛片网站| 欧美又色又爽又黄视频| 国产精品女同一区二区软件 | 亚洲自拍偷在线| 国产黄色小视频在线观看| 婷婷丁香在线五月| 女同久久另类99精品国产91| 老汉色av国产亚洲站长工具| 99久久国产精品久久久| 久久久久免费精品人妻一区二区| 亚洲国产精品999在线| 黄频高清免费视频| 天堂影院成人在线观看| 好男人电影高清在线观看| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 免费在线观看成人毛片| 日本熟妇午夜| 91麻豆精品激情在线观看国产| 免费看十八禁软件| 波多野结衣巨乳人妻| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 亚洲精华国产精华精| 国产成人啪精品午夜网站| 九九在线视频观看精品| 亚洲国产欧美人成| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 成人无遮挡网站| 国产精品一区二区免费欧美| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 日本a在线网址| 99热这里只有精品一区 | 亚洲性夜色夜夜综合| 最新在线观看一区二区三区| 99视频精品全部免费 在线 | 又黄又粗又硬又大视频| 麻豆一二三区av精品| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 香蕉丝袜av| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 午夜福利在线观看吧| 九色国产91popny在线| 国产高清视频在线播放一区| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 精品日产1卡2卡| 黄色日韩在线| 久久精品影院6| 老司机午夜十八禁免费视频| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 成在线人永久免费视频| 欧美日韩一级在线毛片| 99国产精品一区二区三区| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 精品无人区乱码1区二区| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 男人舔女人下体高潮全视频| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产av麻豆久久久久久久| 亚洲成人精品中文字幕电影| 久久九九热精品免费| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| cao死你这个sao货| 波多野结衣巨乳人妻| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 欧美三级亚洲精品| a级毛片a级免费在线| 一本久久中文字幕| 成年人黄色毛片网站| 丰满人妻一区二区三区视频av | 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产av麻豆久久久久久久| 特级一级黄色大片| 嫩草影视91久久| 宅男免费午夜| 日本 欧美在线| 成人亚洲精品av一区二区| 韩国av一区二区三区四区| 999久久久国产精品视频| 十八禁网站免费在线| 一边摸一边抽搐一进一小说| 欧美另类亚洲清纯唯美| 亚洲最大成人中文| 午夜福利18| 亚洲av电影在线进入| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 韩国av一区二区三区四区| 久久久久久人人人人人| 免费高清视频大片| 亚洲色图 男人天堂 中文字幕| 免费观看的影片在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 精品久久久久久久末码| 国产激情久久老熟女| 特级一级黄色大片| 动漫黄色视频在线观看| 制服人妻中文乱码| 亚洲专区字幕在线| 亚洲精品在线观看二区| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 一本久久中文字幕| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 曰老女人黄片| 日韩欧美精品v在线| 亚洲黑人精品在线| 中出人妻视频一区二区| 国产欧美日韩精品一区二区| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲片人在线观看| 又大又爽又粗| 欧美另类亚洲清纯唯美| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 国产99白浆流出| 国产av在哪里看| 久久久国产精品麻豆| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 一级毛片高清免费大全| 大型黄色视频在线免费观看| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 一级作爱视频免费观看| 免费观看精品视频网站| 日韩中文字幕欧美一区二区| 美女大奶头视频| 美女免费视频网站| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产精品久久久av美女十八| 香蕉av资源在线| 波多野结衣高清作品| 综合色av麻豆| 国产成人精品无人区| 久久这里只有精品19| 91老司机精品| 一本综合久久免费| 女同久久另类99精品国产91| 99久久精品热视频| 亚洲国产精品成人综合色| 特大巨黑吊av在线直播| 欧美激情久久久久久爽电影| 国产精品久久久人人做人人爽| 99久久无色码亚洲精品果冻| 日韩欧美在线二视频| 757午夜福利合集在线观看| 国产三级在线视频| 极品教师在线免费播放| 日本三级黄在线观看| 国内精品美女久久久久久| 久久香蕉国产精品| 久久久久国产一级毛片高清牌| 特级一级黄色大片| 男人舔女人下体高潮全视频| 啪啪无遮挡十八禁网站| 性欧美人与动物交配| 91九色精品人成在线观看| 日本免费一区二区三区高清不卡| 美女大奶头视频| 欧美日韩乱码在线| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 老司机午夜十八禁免费视频| 在线观看舔阴道视频| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 听说在线观看完整版免费高清| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 看黄色毛片网站| 在线视频色国产色| 99久久无色码亚洲精品果冻| xxx96com| 午夜福利高清视频| 一个人免费在线观看的高清视频| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 欧美一级a爱片免费观看看| 精品电影一区二区在线| 欧美日韩乱码在线| 国产单亲对白刺激| 日本熟妇午夜| 老汉色av国产亚洲站长工具| 无人区码免费观看不卡| 国产精品99久久久久久久久| 欧美在线黄色| 在线观看午夜福利视频| 免费观看精品视频网站| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 免费看美女性在线毛片视频| 午夜日韩欧美国产| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 欧美中文综合在线视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 在线免费观看不下载黄p国产 | 亚洲18禁久久av| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 1000部很黄的大片| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产精品99久久久久久久久| 久久中文字幕人妻熟女| 91在线观看av| 舔av片在线| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 色av中文字幕| 巨乳人妻的诱惑在线观看| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 免费av不卡在线播放| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 久久久久性生活片| 熟女人妻精品中文字幕| 久久伊人香网站| 熟女电影av网| 中文字幕人妻丝袜一区二区| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 国内精品久久久久精免费| 91字幕亚洲| 国产午夜精品久久久久久| 99在线视频只有这里精品首页| 国产精品永久免费网站| 一级黄色大片毛片| 色在线成人网| 黄频高清免费视频| 成人性生交大片免费视频hd| 天堂网av新在线| 精品国产超薄肉色丝袜足j| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产黄色小视频在线观看| 国产激情久久老熟女| 老汉色∧v一级毛片| 九九久久精品国产亚洲av麻豆 | 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 亚洲电影在线观看av| 久久久久久久久久黄片| 亚洲成人久久爱视频| 一级黄色大片毛片| 成年女人永久免费观看视频| 中出人妻视频一区二区| 国产亚洲精品av在线| 亚洲激情在线av| 亚洲精品456在线播放app | 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产精品久久久久久精品电影| 亚洲精华国产精华精| 国产1区2区3区精品| 亚洲片人在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 日本黄大片高清| 亚洲av熟女| 黑人欧美特级aaaaaa片| 成年女人看的毛片在线观看| 国产一区二区激情短视频| 91久久精品国产一区二区成人 | 怎么达到女性高潮| 亚洲精品在线美女| 亚洲九九香蕉| 伦理电影免费视频| 国产亚洲精品av在线| 一级a爱片免费观看的视频| 日本 欧美在线| 久久国产精品人妻蜜桃| 村上凉子中文字幕在线| 黄色片一级片一级黄色片| 一二三四社区在线视频社区8| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产精品一区二区免费欧美| 久久人人精品亚洲av| 亚洲国产欧美一区二区综合| 亚洲在线观看片| 丁香欧美五月| 欧美色视频一区免费| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 午夜福利欧美成人| 中国美女看黄片| 国产激情欧美一区二区| 国产三级中文精品| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲人成伊人成综合网2020| 国产精品99久久久久久久久| 美女大奶头视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 欧美一区二区国产精品久久精品| а√天堂www在线а√下载| av黄色大香蕉| 日本五十路高清| 母亲3免费完整高清在线观看| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 好男人电影高清在线观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 精品久久蜜臀av无| 亚洲国产色片| 欧美最黄视频在线播放免费| 久久人人精品亚洲av| 在线免费观看的www视频| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 波多野结衣高清无吗| 成年人黄色毛片网站| 一个人看视频在线观看www免费 | 久久欧美精品欧美久久欧美| 黄色视频,在线免费观看| 欧美中文日本在线观看视频| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 无遮挡黄片免费观看| 动漫黄色视频在线观看| 久久久成人免费电影| 免费大片18禁| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 在线免费观看不下载黄p国产 | 999久久久国产精品视频| 99re在线观看精品视频| 麻豆国产97在线/欧美| 禁无遮挡网站| 亚洲国产精品久久男人天堂| 搞女人的毛片| 久久亚洲精品不卡| 国产成人影院久久av| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产精品永久免费网站| 老司机在亚洲福利影院| 国产私拍福利视频在线观看| 成年人黄色毛片网站| 国产成人精品久久二区二区免费| 又粗又爽又猛毛片免费看| 午夜精品久久久久久毛片777| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产亚洲欧美98| 国产精品亚洲美女久久久| 免费看a级黄色片| 日韩欧美免费精品| 成年女人毛片免费观看观看9| 国产成人精品久久二区二区免费| 久久久久久九九精品二区国产| 精品乱码久久久久久99久播| 国产精华一区二区三区| 国产探花在线观看一区二区| 男人舔女人的私密视频| 床上黄色一级片| aaaaa片日本免费| 无限看片的www在线观看| 亚洲国产看品久久| 免费看十八禁软件| 国产成人av激情在线播放| 国产三级中文精品| 香蕉丝袜av| 欧美中文综合在线视频| 欧美三级亚洲精品| 国产三级黄色录像| 国产69精品久久久久777片 | 亚洲片人在线观看| 这个男人来自地球电影免费观看| 亚洲天堂国产精品一区在线| 日本免费一区二区三区高清不卡| 国产伦人伦偷精品视频| 校园春色视频在线观看| 午夜福利在线在线| 国产成人影院久久av| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久欧美精品欧美久久欧美| 久久九九热精品免费| 不卡av一区二区三区| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲九九香蕉| 国产综合懂色| 丁香欧美五月| 女警被强在线播放| 九九在线视频观看精品| 国产熟女xx| 久久久成人免费电影| 欧美3d第一页| 国产极品精品免费视频能看的| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 日本黄色片子视频| 亚洲电影在线观看av| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产成人精品久久二区二区免费| 亚洲自拍偷在线| 成年人黄色毛片网站| 黄色日韩在线| 亚洲性夜色夜夜综合| 99久久成人亚洲精品观看| 亚洲国产看品久久| bbb黄色大片| 国产一级毛片七仙女欲春2| 老鸭窝网址在线观看| 人人妻人人看人人澡| 亚洲av免费在线观看| 99久久综合精品五月天人人| 两个人的视频大全免费| 成人无遮挡网站| 亚洲午夜精品一区,二区,三区| 色综合亚洲欧美另类图片| 国产av一区在线观看免费| 搡老岳熟女国产| 久久九九热精品免费| 国产视频一区二区在线看| 一夜夜www| 在线国产一区二区在线| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 99久久精品国产亚洲精品| 日韩免费av在线播放| 亚洲国产色片| 亚洲熟女毛片儿| 久久性视频一级片| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 91麻豆av在线| 成人av一区二区三区在线看| 最近最新免费中文字幕在线| 亚洲自偷自拍图片 自拍| 亚洲av成人av| 国产在线精品亚洲第一网站| 久久亚洲精品不卡| 国产成人啪精品午夜网站| 亚洲真实伦在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 亚洲精品一区av在线观看| 女警被强在线播放| 黄色 视频免费看| 99精品久久久久人妻精品| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 黄色日韩在线| 88av欧美| 午夜精品在线福利| 国产精品电影一区二区三区| 欧美又色又爽又黄视频| cao死你这个sao货| 欧美另类亚洲清纯唯美| 全区人妻精品视频| 91av网站免费观看| 天堂影院成人在线观看| 亚洲精品一区av在线观看| av视频在线观看入口| 高潮久久久久久久久久久不卡| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 88av欧美| 99精品久久久久人妻精品| 国产av麻豆久久久久久久| 国产又色又爽无遮挡免费看| 日本 欧美在线| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 国内精品美女久久久久久| 国产私拍福利视频在线观看| 精品人妻1区二区| 床上黄色一级片| 精品久久久久久久末码| 日本a在线网址| 岛国在线免费视频观看| 婷婷亚洲欧美| 亚洲av第一区精品v没综合| 99国产精品一区二区三区| 亚洲av熟女| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 美女被艹到高潮喷水动态| 90打野战视频偷拍视频| 久久久久久久久中文| 久久久久久久午夜电影| 亚洲午夜理论影院| 久久中文字幕一级| 国产午夜精品论理片| 性色av乱码一区二区三区2| 亚洲最大成人中文| 亚洲黑人精品在线| 网址你懂的国产日韩在线| 久久精品91无色码中文字幕| 99视频精品全部免费 在线 | 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 99re在线观看精品视频| 91麻豆av在线| 色综合亚洲欧美另类图片| 午夜精品一区二区三区免费看| 亚洲av免费在线观看| 国产av麻豆久久久久久久| av在线天堂中文字幕| 亚洲最大成人中文| 99riav亚洲国产免费| 亚洲精品在线美女| 久9热在线精品视频| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 午夜福利成人在线免费观看| avwww免费| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线| www.熟女人妻精品国产| 久久久成人免费电影| 亚洲人成网站高清观看| 国产亚洲欧美在线一区二区| 中文资源天堂在线| 国产成人精品久久二区二区91| 国产精品乱码一区二三区的特点|