上皮細(xì)胞黏附因子及腫瘤相關(guān)糖蛋白-72在結(jié)腸癌中的表達(dá)及臨床意義

蔡 蕓, 佘遠(yuǎn)霞, 劉 姝

(江蘇省如皋市人民醫(yī)院 病理科, 江蘇 如皋, 226500)

中國每年新發(fā)結(jié)腸癌患者約為40萬，病死者多達(dá)20萬，且呈逐年上升的趨勢[1-2]。作為一種常見的消化道惡性腫瘤，結(jié)腸癌預(yù)后與臨床分期、浸潤程度、是否轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，尋找結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移的相關(guān)因子，對于指導(dǎo)治療、評估預(yù)后非常重要。上皮細(xì)胞黏附因子(EpCAM)具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、參與腫瘤血管生成、促進(jìn)組織再生等多種生物學(xué)功能，是一種強(qiáng)致瘤性、遺傳穩(wěn)定的腫瘤標(biāo)志物[3-4]。腫瘤相關(guān)糖蛋白-72(TAG-72)屬于一種高分子量糖蛋白類化合物，其表達(dá)水平與腫瘤生物學(xué)行為及預(yù)后密切相關(guān)，已成為免疫治療消化道腫瘤的合適靶位[5-6]。目前國內(nèi)有關(guān)EpCAM、TAG-72與結(jié)腸癌關(guān)系的研究并不多見，本研究采用免疫組化的方法來分析EpCAM、TAG-72在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)及其臨床意義，現(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 病理材料

收集2015年1月—2016年12月132例結(jié)腸癌患者組織標(biāo)本，男78例，女54例; 年齡36～72歲，平均(48.32±6.12)歲; 腫瘤直徑≥3 cm者62例, <3 cm者70例; 高分化腺癌45例，中分化腺癌52例，低分化腺癌26例，黏液腺癌9例; 有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移58例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移74例。

1.2 主要試劑

EpCAM免抗人多克隆抗體、磷酸鹽緩沖液、免疫組化檢測試劑盒、二氨基聯(lián)苯胺顯色試劑盒均購自上海生工生物技術(shù)有限公司; TAG-72免抗人多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司, En Vision染色試劑盒購自丹麥Dako公司。

1.3 方法

所有標(biāo)本均經(jīng)4%甲醛固定、脫水、石蠟包埋, 2 μm連續(xù)切片，根據(jù)免疫試劑盒說明書進(jìn)行免疫組化檢測。EpCAM抗體、TAG-72抗體稀釋濃度均為1∶100, 檸檬酸鹽緩沖液抗原修復(fù)，二氨基苯胺顯色。磷酸鹽緩沖液代替一抗作為陰性對照，使用已知陽性標(biāo)本作為陽性對照。

1.4 結(jié)果判斷

以細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核呈棕黃色或棕褐色判斷EpCAM及TAG-72陽性細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度評分、陽性細(xì)胞率評分判斷陽性、陰性患者。細(xì)胞染色評分: 無染色計0分，淡黃色計1分，棕黃色計2分，棕褐色計3分。陽性細(xì)胞率評分: <5%計0分, 5%～<10%計1分, 10%～<20%計2分, 20%～<50%計3分, ≥50%計4分。細(xì)胞染色評分與陽性細(xì)胞率評分之和≥3分者判為陽性，≤2分者判為陰性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 免疫組化檢查結(jié)果

EpCAM及TAG-72免疫組化染色陽性表達(dá)主要定位于細(xì)胞質(zhì)，以棕黃色或棕褐色為主。132例結(jié)腸癌組織標(biāo)本中, EpCAM表達(dá)陽性率為65.91%(87/132)，平均評分(2.48±0.54)分; TAG-72表達(dá)陽性率為70.45%(93/132)，平均評分(2.56±0.62)分。EpCAM陽性并TAG-72陰性10例, EpCAM陽性并TAG-72陽性77例, EpCAM陰性并TAG-72陰性19例, EpCAM陰性并TAG-72陽性16例。

2.2 EpCAM及TAG-72表達(dá)與結(jié)腸癌病理特征

的關(guān)系

不同性別、年齡的結(jié)腸癌患者EpCAM及TAG-72陽性率、評分比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05); 而腫瘤直徑>3 cm、低分化/黏胰腺、TNM分期(Ⅲ、Ⅳ期)、T3～4浸潤深度、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌患者EpCAM表達(dá)陽性率及TAG-72表達(dá)陽性率、評分顯著高于腫瘤直徑≤3 cm、高中分化、TNM分期(Ⅰ、Ⅱ期)、T1～2浸潤深度、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05或P<0.01)。見表1。

表1 EpCAM及TAG-72表達(dá)與結(jié)腸癌病理特征的關(guān)系

EpCAM: 上皮細(xì)胞黏附因子; TAG-72: 腫瘤相關(guān)糖蛋白-72。與同一病理特征的另一亞項比較, *P<0.05, **P<0.01。

2.3 EpCAM及TAG-72表達(dá)與結(jié)腸癌生存期的

關(guān)系

EpCAM表達(dá)陽性、TAG-72表達(dá)陽性、EpCAM表達(dá)并TAG-72表達(dá)陽性者評分顯著高于表達(dá)陰性者，生存時間顯著短于表達(dá)陰性者(P<0.01); EpCAM表達(dá)陽性并TAG-72表達(dá)陽性者評分顯著高于EpCAM表達(dá)陽性者、TAG-72表達(dá)陽性者(P<0.01), 生存時間顯著短于EpCAM表達(dá)陽性者、TAG-72表達(dá)陽性者(P<0.01)。見表2。

表2 EpCAM及TAG-72表達(dá)與結(jié)腸癌生存期的關(guān)系

EpCAM: 上皮細(xì)胞黏附因子; TAG-72: 腫瘤相關(guān)糖蛋白-72。

與陰性比較, **P<0.01; 與EpCAM表達(dá)并TAG-72表達(dá)陽性比較, ##P<0.01。

3 討 論

結(jié)腸癌是指發(fā)生于結(jié)腸部位的消化道惡性腫瘤，早期根治術(shù)患者5年生存率高達(dá)90%, 發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者5年生存率不足10%[7]。結(jié)腸癌侵襲轉(zhuǎn)移是由多因素共同作用的結(jié)果，尋找特異性標(biāo)志物用于早期診斷、靶向治療、預(yù)后評估至關(guān)重要。EpCAM是由腫瘤相關(guān)鈣蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)基因編碼的一種跨膜糖蛋白，具有加快細(xì)胞周期及促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化、遷移、免疫逃逸等多種生物學(xué)功能[8-9]。作為一種腫瘤干細(xì)胞標(biāo)志物, EpCAM與β-連環(huán)蛋白(β-catenin)、Wnt信號通路密切相關(guān)，被視為Wnt-β-catenin信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的靶基因，其表達(dá)水平與β-catenin呈正相關(guān)性[10-11]。本研究中，不同腫瘤直徑、分化程度、TNM分期、浸潤深度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的結(jié)腸癌患者EpCAM表達(dá)水平存在差異，且EpCAM陽性表達(dá)患者細(xì)胞染色評分、陽性細(xì)胞率評分明顯高于陰性表達(dá)者，中位生存時間明顯短于陰性表達(dá)者，與周逢強(qiáng)等[12]研究報道基本相似，說明EpCAM可作為鑒別診斷結(jié)腸癌的特異性標(biāo)志物。

TAG-72是一種分子量約為100 kDa的黏糖蛋白，主要表達(dá)于乳腺癌、結(jié)腸癌等腺癌中，人體其他組織很少表達(dá)[13]。作為一種從乳腺癌轉(zhuǎn)移細(xì)胞株中發(fā)現(xiàn)的腫瘤標(biāo)志物，TAG-72具有特異性高、靈敏度高的特點[14]。TAG-72屬于消化道惡性腫瘤的腫瘤相關(guān)抗原，為早期惡性腫瘤標(biāo)志物[15-16]。陳紅等[17-19]研究報道，隨著腺瘤級別的升高，TAG-72表達(dá)呈幾何級數(shù)式增加，高級別上皮內(nèi)瘤變、結(jié)腸腺癌陽性表達(dá)分別為88.89%、100.00%。本研究中，腫瘤直徑大于3 cm(80.65%)、低分化/黏胰腺(94.29%)、TNM分期(Ⅲ、Ⅳ期)(84.21%)、T3～4浸潤深度(85.71%)、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(96.55%)患者EpCAM表達(dá)陽性率及TAG-72表達(dá)陽性率、評分均較高，且TAG-72表達(dá)陽性結(jié)腸癌腫瘤中位生存時間為(16.25±3.42)個月，明顯短于陰性者，說明TAG-72表達(dá)可作為判斷結(jié)腸癌嚴(yán)重程度及預(yù)后的指標(biāo)。

綜上所述, EpCAM、TAG-72表達(dá)均與結(jié)腸癌腫瘤直徑、分化程度、TNM分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等密切相關(guān), EpCAM、TAG-72均為陽性表達(dá)者生存時間更短，提示EpCAM、TAG-72聯(lián)合應(yīng)用在鑒別診斷、靶向治療、預(yù)后評估中有很重要的臨床意義[20-21]。