胃癌和癌旁組織內(nèi)IL-9、CXCR1表達(dá)情況與患者病情和生存預(yù)后的相關(guān)性

肖 燁，張 健

1.徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，江蘇 徐州 221002；2.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬杭州市第一人民醫(yī)院胃腸外科

胃癌是常見(jiàn)的消化系統(tǒng)腫瘤,有明顯的地域差別，我國(guó)年均因胃癌死亡人數(shù)比例為(16～60)/10萬(wàn)[1-2]。胃癌的早期癥狀往往不典型，患者確定診斷時(shí)多為胃癌的進(jìn)展期或晚期，導(dǎo)致預(yù)后效果較差，同時(shí)在胃癌患者中缺乏有效的指標(biāo)反映胃癌病情和預(yù)后的程度[3-4]。有研究認(rèn)為,慢性炎癥反應(yīng)是腫瘤發(fā)生的起源，炎癥因子是參與炎癥反應(yīng)的主要物質(zhì)，有研究顯示，IL-1、IL-6、IL-8與胃癌的發(fā)生進(jìn)展相關(guān)[5-7]，其中IL-8通過(guò)與CXCR1結(jié)合誘導(dǎo)胃癌進(jìn)展，而IL-9也與胃癌具有相關(guān)性。因此，本研究選取胃癌患者檢測(cè)IL-9及CXC家族趨化因子受體(CXC chemokine receptor 1,CXCR1)的表達(dá)，并分析IL-9及CXCR1與胃癌病情和預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2012年12月至2013年12月在徐州醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院進(jìn)行診治的胃癌患者79例，收集手術(shù)后癌癥組織和癌旁組織標(biāo)本，所有診斷均經(jīng)病理活檢確診。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)確診胃癌者并接受手術(shù)治療；(2)術(shù)前未接受放療或化療；(3)同意加入本研究；(4)資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他部位腫瘤者；(2)合并嚴(yán)重精神類(lèi)神經(jīng)疾病；(3)臨床資料缺失；(4)轉(zhuǎn)移性胃癌；(5)預(yù)計(jì)生存期低于1個(gè)月。研究已獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均簽署知情同意書(shū)。

1.2 主要儀器與試劑IL-9及CXCR1抗體購(gòu)自美國(guó)Santa公司，免疫組化SP試劑盒購(gòu)自美國(guó)Sigma公司，DAB顯色試劑盒購(gòu)自金克隆(北京)生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法對(duì)胃癌組織及癌旁組織標(biāo)本進(jìn)行石蠟包埋，以4 mm厚度進(jìn)行切片。將切片置于60 ℃恒溫箱中烘烤2 h，后放于二甲苯溶液中脫蠟15 min，在乙醇溶液中浸泡去掉二甲苯，以磷酸緩沖鹽溶液反復(fù)沖洗3次，每次2 min。滴加山羊血覆蓋玻片組織，室溫孵育20 min，去除血清，滴加稀釋后的IL-9及CXCR1一抗，恒溫箱中4 ℃孵育過(guò)夜，以磷酸緩沖鹽溶液反復(fù)沖洗3次，每次5 min。將辣根過(guò)氧化物酶作為標(biāo)記的鏈霉素卵白素溶液，滴加到切片上，室溫下繼續(xù)孵育30 min，以磷酸緩沖鹽溶液反復(fù)沖洗3次，加入新鮮配制的DAB溶液，以磷酸緩沖鹽溶液反復(fù)沖洗3次，再以蘇木精復(fù)染。染色陽(yáng)性結(jié)果為細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)淡黃色至棕黃色。

1.4 結(jié)果判斷免疫組織化學(xué)法的結(jié)果判斷采用百分比法，其中參照不同的染色程度計(jì)分為強(qiáng)(3分)、中(2分)、弱(1分)、無(wú)(0分)。按照單個(gè)視野中陽(yáng)性細(xì)胞占百分比計(jì)分，其中陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)百分比≤25%計(jì)1分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)百分比26%～50%計(jì)2分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)百分比51%～75%計(jì)3分，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)百分比>75%計(jì)4分。以染色程度與陽(yáng)性細(xì)胞占比乘積作為最終判定標(biāo)準(zhǔn)，其中乘積>4為陽(yáng)性，≤4為陰性。

2 結(jié)果

2.1 納入患者的一般資料共收集有效癌癥組織標(biāo)本79例，癌旁組織標(biāo)本79例，男51例，女28例，年齡(51.62±9.36)歲(27～81歲)，按照分化程度分類(lèi)，低分化胃癌48例，中分化胃癌23例，高分化胃癌8例。79例患者中完成隨訪(fǎng)64例，隨訪(fǎng)時(shí)間為3～60個(gè)月，中位時(shí)間為35個(gè)月。

2.2 胃癌和癌旁組織內(nèi)IL-9表達(dá)情況胃癌與癌旁組織內(nèi)IL-9表達(dá)對(duì)比顯示，胃癌組織IL-9陽(yáng)性表達(dá)率為79.75%，明顯高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)表1、圖1)。

表1 胃癌和癌旁組織內(nèi)IL-9表達(dá)

圖1 胃癌患者IL-9表達(dá)(HE染色，放大200倍)

2.3 胃癌組織和癌旁組織內(nèi)CXCR1表達(dá)情況胃癌組織與癌旁組織內(nèi)CXCR1表達(dá)對(duì)比顯示，胃癌組織CXCR1陽(yáng)性表達(dá)率為75.95%，明顯高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)表2、圖2)。

2.4 胃癌組織內(nèi)IL-9與CXCR1表達(dá)相關(guān)性在胃癌組織中，IL-9與CXCR1表達(dá)具有相關(guān)性(P<0.05)(見(jiàn)表3)。

表2 胃癌和癌旁組織內(nèi)CXCR1表達(dá)

圖2 胃癌患者CXCR1表達(dá)(HE染色，放大200倍)

表3 胃癌組織內(nèi)IL-9與CXCR1表達(dá)相關(guān)性

2.5 胃癌組織內(nèi)IL-9、CXCR1表達(dá)與患者臨床病理特征關(guān)系在胃癌組織內(nèi)IL-9陽(yáng)性表達(dá)與浸潤(rùn)深度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)，與患者性別、年齡、腫瘤直徑、分化程度、病理類(lèi)型無(wú)相關(guān)性(P>0.05)；而CXCR1陽(yáng)性表達(dá)與TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)(P<0.05)，與患者性別、年齡、腫瘤直徑、分化程度、浸潤(rùn)深度、病理類(lèi)型無(wú)相關(guān)性(P>0.05)(見(jiàn)表4)。

表4 胃癌組織內(nèi)IL-9、CXCR1表達(dá)與患者臨床病理特征關(guān)系

2.6 IL-9、CXCR1表達(dá)與胃癌患者生存曲線(xiàn)對(duì)胃癌患者IL-9、CXCR1表達(dá)繪制生存曲線(xiàn)，結(jié)果顯示，IL-9陽(yáng)性表達(dá)患者預(yù)后生存期明顯低于IL-9陰性患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；CXCR1陽(yáng)性表達(dá)患者預(yù)后生存期低于CXCR1表達(dá)陰性的患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(見(jiàn)圖3)。

圖3 IL-9、CXCR1表達(dá)與胃癌患者的生存曲線(xiàn)

2.7 胃癌患者預(yù)后的單因素和Cox多因素分析將單因素分析有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的指標(biāo)進(jìn)行Cox多因素分析，結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、IL-9表達(dá)、CXCR1表達(dá)是胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素(P<0.05)，而年齡不是影響胃癌預(yù)后的獨(dú)立影響因素(P>0.05)(見(jiàn)表5)。

表5 胃癌患者預(yù)后的影響因素分析

3 討論

近年來(lái)，隨著多種檢測(cè)手段的應(yīng)用，胃癌的早期診斷率有所提高，但基于我國(guó)龐大的人口基數(shù)，胃癌的相關(guān)診治及預(yù)后問(wèn)題仍需要臨床工作者重視，胃癌有效的治療手段主要是根治性手術(shù)，完全的切除腫瘤組織，術(shù)后給予放化療，能夠控制癌癥進(jìn)展，延長(zhǎng)患者壽命[8]。手術(shù)的效果有賴(lài)于患者的病情，目前有多個(gè)研究檢測(cè)細(xì)胞因子在胃癌病情和預(yù)后中的作用[9-10]。

炎癥被認(rèn)為是腫瘤來(lái)源之一，是導(dǎo)致腫瘤發(fā)生進(jìn)展的重要因素，多數(shù)研究也已證實(shí)在癌癥患者中存在異常表達(dá)[11]。炎癥細(xì)胞因子是參與炎癥反應(yīng)的主要對(duì)象，IL-9是輔助性T細(xì)胞9產(chǎn)生的，在與相應(yīng)的受體結(jié)合后，能夠促使酪氨酸激酶磷酸化，進(jìn)而介導(dǎo)下游信號(hào)激活STAT信號(hào)因子，使一系列基因表達(dá)，引起多種生物學(xué)反應(yīng)[12]。CXCR1是趨化因子家族的成員之一，被認(rèn)為與多種腫瘤有密切關(guān)系，可能的機(jī)制為調(diào)控腫瘤內(nèi)血管的形成，激活機(jī)體的免疫反應(yīng)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖[13-14]。本研究選取IL-9、CXCR1分析與胃癌病情和預(yù)后的關(guān)系。

上述結(jié)果顯示，在胃癌組織標(biāo)本中，IL-9、CXCR1陽(yáng)性表達(dá)明顯高于癌旁標(biāo)本，說(shuō)明在胃癌患者中，IL-9、CXCR1與腫瘤具有相關(guān)性，IL-9與CXCR1表達(dá)具有相關(guān)性，推測(cè)原因可能為IL-9通過(guò)激活CXCR1通路，進(jìn)一步介導(dǎo)其他反應(yīng)，致使胃癌發(fā)生及進(jìn)展。覃沁怡等[15]對(duì)IL-9在胰腺癌中的作用進(jìn)行了基礎(chǔ)研究，采用不同劑量的IL-9干擾胰腺癌裸鼠的瘤體生長(zhǎng)，結(jié)果顯示IL-9對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用，同時(shí)對(duì)胰腺癌裸鼠的存活時(shí)間有影響，可能通過(guò)STAT3信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的。姚小健等[16]對(duì)CXCR1在結(jié)腸癌細(xì)胞的增殖凋亡的作用進(jìn)行了探討，結(jié)果顯示CXCR1在結(jié)腸癌中的表達(dá)水平上調(diào)，降低CXCR1表達(dá)水平會(huì)抑制結(jié)腸癌增殖，而對(duì)結(jié)腸癌凋亡具有促進(jìn)作用，可能與STAT3信號(hào)相關(guān)。

在IL-9、CXCR1表達(dá)與患者病情關(guān)系的研究中，我們發(fā)現(xiàn)，IL-9陽(yáng)性表達(dá)與浸潤(rùn)深度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，CXCR1陽(yáng)性表達(dá)與TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，同時(shí)IL-9、CXCR1陽(yáng)性表達(dá)的胃癌患者生存期低于陰性患者。說(shuō)明IL-9、CXCR1兩種因子可能參與了腫瘤發(fā)展過(guò)程，表達(dá)水平能夠反映患者腫瘤的嚴(yán)重程度。YOU等[17]對(duì)乳腺癌患者進(jìn)行研究，結(jié)果顯示IL-9與腫瘤的病情相關(guān)，支持本結(jié)果。在對(duì)胃癌患者預(yù)后生存期的影響因素研究發(fā)現(xiàn)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、IL-9表達(dá)、CXCR1表達(dá)是胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立影響因素。其中在以往的研究中，我們認(rèn)為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期是胃癌患者預(yù)后的獨(dú)立因素[18-20]。本研究發(fā)現(xiàn)，IL-9表達(dá)、CXCR1表達(dá)與胃癌預(yù)后相關(guān)，分析原因可能為IL-9及CXCR1陽(yáng)性表達(dá)促進(jìn)胃癌進(jìn)展，降低患者的生存期。

綜上所述，在胃癌組織中IL-9、CXCR1均有表達(dá)，同時(shí)IL-9、CXCR1表達(dá)與患者病情及預(yù)后有關(guān)，IL-9、CXCR1可作為臨床診治的新靶點(diǎn)。因本次實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原因，未能對(duì)IL-9、CXCR1預(yù)測(cè)胃癌病情及預(yù)后進(jìn)行探討，將在下一步實(shí)驗(yàn)中對(duì)IL-9、CXCR1預(yù)測(cè)的特異性和靈敏性進(jìn)行研究。