乳腺癌術(shù)后組織cox-2表達(dá)與其微血管生成及預(yù)后的關(guān)系

趙曉燕 謝 競(jìng) 付 倩 張 蘭 霍彥平

乳腺癌是發(fā)生在女性乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，無(wú)明顯表現(xiàn)癥狀，且隨著病情的發(fā)展進(jìn)一步出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移等惡化癥狀，導(dǎo)致預(yù)后效果不佳，嚴(yán)重影響患者的健康生活[1]。目前，臨床可通過(guò)外科手術(shù)給予腫瘤組織切除，可有效控制腫瘤發(fā)展，改善患者病情，但仍有部分患者因病情惡化而出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，其機(jī)制可能與腫瘤的血管生成有關(guān)[2]。有研究顯示，環(huán)氧合酶2(cox-2)是1種誘導(dǎo)基因，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但有關(guān)cox-2與腫瘤的血管關(guān)系還有待進(jìn)一步深入研究[3-4]。對(duì)此，本研究通過(guò)給予檢測(cè)乳腺癌術(shù)后組織cox-2表達(dá)，探討其與微血管生成及預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年3月至2017年3月本院乳腺癌術(shù)后組織及其癌旁正常乳腺組織各160例，納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)臨床癥狀、實(shí)驗(yàn)室、影像學(xué)等檢查證實(shí)為乳腺癌術(shù)后[5]，②就診前1個(gè)月無(wú)免疫、放化療、抗感染等治療史，③無(wú)精神病病史，④簽署知情同意書(shū)；排除標(biāo)準(zhǔn)：①妊娠及哺乳特殊人群，②血液性疾病，③有心、肝、腎等嚴(yán)重性疾病，④拒絕或終止本次研究者。其中年齡26～72歲，平均年齡(48.21±20.57)歲，體質(zhì)量指數(shù)(BMI)(19.06～30.40)kg/m2，平均BMI (24.21±4.06)kg/m2，臨床分期：Ⅰ期39例，Ⅱ期51例，Ⅲ期38例，Ⅳ期32例，癌癥類(lèi)型：導(dǎo)管癌61例，小葉癌58例，腺癌伴粉刺樣癌41例，本次研究已經(jīng)我院倫理委員會(huì)審批且通過(guò)，所有數(shù)據(jù)來(lái)源真實(shí)可靠。

1.2 方法

所有患者經(jīng)乳腺癌手術(shù)切除3 d后，利用常規(guī)手術(shù)切除乳腺癌術(shù)后組織及其癌旁正常乳腺組織作為新鮮標(biāo)本，采用免疫組化SP法檢測(cè)組織中cox-2、微血管密度(MVD)表達(dá)；所有標(biāo)本經(jīng)10%甲醛固定和石蠟，包埋后，連續(xù)切片進(jìn)行脫蠟，切片厚度均為4 μm，同時(shí)給予3%H2O2孵育滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶、封閉非特異性抗原位點(diǎn)等預(yù)處理，加入實(shí)驗(yàn)鼠抗人cox-2作為一抗，4 ℃孵育過(guò)夜，漂洗、復(fù)溫37 ℃，加生物素標(biāo)記二抗工作液37 ℃孵育30 min，PBS緩沖液漂洗、DAB顯色后用蘇木精復(fù)染3 min，進(jìn)行脫水待切片透明后用中性樹(shù)膠封固，高倍顯微鏡下鏡檢，PBS替代一抗作陰性對(duì)照。

1.3 指標(biāo)觀察和標(biāo)準(zhǔn)

高倍視野(×400倍)在病灶隨機(jī)選擇5個(gè)視野，應(yīng)使所選視野分布于病灶各部位，cox-2陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)及MVD表達(dá)為胞質(zhì)內(nèi)呈棕黃色顆粒狀，主要彌漫性分布于整個(gè)細(xì)胞胞質(zhì)。根據(jù)SP法染色以細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)變異性染色的深淺進(jìn)行評(píng)分，陽(yáng)性強(qiáng)度以無(wú)色為0分；淡黃色為1分；黃色為2分；棕黃色為3分。根據(jù)組織染色細(xì)胞所占總細(xì)胞數(shù)百分比評(píng)分：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%為陰性(0分)；5%～25%(1分)；26%～50%(2分)；51%～75%(3分)；>75%(4分)。兩者評(píng)分相乘，0分為陰性(-)，1～4分為弱陽(yáng)性(+)，5～8分為陽(yáng)性(++)，9～12分為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)，方便試驗(yàn)操作和分析，用(-)代表陰性，(+)(++)(+++)代表陽(yáng)性，陽(yáng)性代表高表達(dá)[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌術(shù)后組織及癌旁正常組織中cox-2、MVD表達(dá)比較

乳腺癌組織cox-2、MVD表達(dá)明顯高于正常乳腺組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 乳腺癌術(shù)后組織及癌旁正常組織的cox-2、MVD表達(dá)比較

2.2 乳腺癌術(shù)后組織cox-2表達(dá)與其微血管生成及預(yù)后關(guān)系的單因素分析

單因素分析結(jié)果顯示，cox-2表達(dá)與MVD表達(dá)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)等有關(guān)(P<0.05)，見(jiàn)表2。

2.3 有無(wú)cox-2表達(dá)患者的生存預(yù)后比較

cox-2表達(dá)患者1年無(wú)進(jìn)展生存率70.63%(113/160)，明顯低于無(wú)cox-2表達(dá)患者的90.63%(145/160)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=20.485，P<0.05)，見(jiàn)圖1。

3 討論

乳腺癌是女性三大惡性腫瘤之一，隨著近年來(lái)生活節(jié)奏的加快和醫(yī)學(xué)知識(shí)的匱乏導(dǎo)致該發(fā)病率有明顯上升的趨勢(shì)，已成為當(dāng)前社會(huì)的重大公共衛(wèi)生問(wèn)題。目前，乳腺癌通過(guò)手術(shù)切除術(shù)可有效切除腫瘤組織，控制癌細(xì)胞擴(kuò)散，但仍有部分患者的病情復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，故如何針對(duì)性確?；颊咝g(shù)后預(yù)后轉(zhuǎn)歸具有重要的臨床意義[6-7]。

有研究顯示，乳腺癌是1種典型的血管依賴(lài)性病變，乳腺癌的發(fā)生與血管的生成密切相關(guān)，其機(jī)制可能腫瘤的存在打破血管生成促進(jìn)因子上調(diào)和血管生成抑制因子下調(diào)的平衡，繼而使血管異常增生[8]。其中MVD是特定腫瘤區(qū)域的微血管計(jì)數(shù)，是臨床上腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移潛能的預(yù)測(cè)指標(biāo)[9]。同時(shí)也有研究顯示，cox-2是催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素類(lèi)物質(zhì)過(guò)程中的一個(gè)關(guān)鍵限速酶，其應(yīng)答基因迅速，當(dāng)細(xì)胞受到刺激后開(kāi)始合成；同時(shí)具有促進(jìn)新生血管生成的作用，增加腫瘤細(xì)胞的侵襲性，其高度表達(dá)可提高腫瘤發(fā)生及轉(zhuǎn)移的潛能及增加腫瘤細(xì)胞的浸襲力[10]。

對(duì)此，本研究通過(guò)采用免疫組化SP法檢測(cè)組織中cox-2、MVD表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織cox-2、MVD表達(dá)明顯高于正常乳腺組織，而鄭玲玲等[11]的研究中也提示乳腺癌的發(fā)展與新生血管有關(guān)，進(jìn)一步提示乳腺癌的發(fā)生發(fā)展與cox-2、MVD表達(dá)密切相關(guān)。這可能由于機(jī)體遭受腫瘤侵襲時(shí)，癌細(xì)胞會(huì)破壞血管的正常生成機(jī)制，從而使血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，誘導(dǎo)腫瘤血管生成，繼而使MVD、cox-2高度表達(dá)。同時(shí)單因素分析結(jié)果顯示，cox-2表達(dá)與MVD表達(dá)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、病理分級(jí)等有關(guān)，表明cox-2的表達(dá)受多種因素的影響。這有可能由于MVD的計(jì)數(shù)越高，提示機(jī)體的腫瘤新生血管增多，而cox-2則是新生血管生成的重要因素之一，故隨著腫瘤新生血管的增多，其表達(dá)越高，而姚紅等[12]的研究提示癌組織的發(fā)生發(fā)展與cox-2、MVD協(xié)同變化有關(guān)，為上述結(jié)論提供了重要的依據(jù)。而臨床分期越高的患者表明其病情越發(fā)嚴(yán)重，癌細(xì)胞快速生長(zhǎng)且向外擴(kuò)散，導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)內(nèi)產(chǎn)生缺氧環(huán)境而增加缺氧誘導(dǎo)因子α的合成，進(jìn)一步影響腫瘤血管的生成。同時(shí)患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移則意味著腫瘤的發(fā)育可能進(jìn)入晚期，腫瘤細(xì)胞侵入血管，通過(guò)靜脈與淋巴管吻合處進(jìn)入淋巴管，從而誘導(dǎo)新生淋巴管的形成，使cox-2高度表達(dá)。而腫瘤發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移則提示腫瘤細(xì)胞具備向正常細(xì)胞侵襲的能力，且已新生腫瘤血管，繼而導(dǎo)致腫瘤增大發(fā)生轉(zhuǎn)移，從而使cox-2快速合成；而腫瘤的病理分級(jí)程度越高，其惡化程度越嚴(yán)重，繼而加劇腫瘤細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)移，腫瘤血管的大量異常增生[13-14]。從上述因素分析得出cox-2的高度表達(dá)與腫瘤的病情嚴(yán)重程度密切相關(guān)。此外，cox-2表達(dá)患者1年無(wú)進(jìn)展生存率明顯低于無(wú)cox-2表達(dá)患者，表明cox-2的表達(dá)可作為乳腺癌患者的預(yù)后生存指標(biāo)，這有可能由于cox-2的高度表達(dá)會(huì)加劇腫瘤細(xì)胞的增殖與分化，抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，提高腫瘤血管的生成，加劇腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移，而李鴻濤等[15]的研究結(jié)論也明確cox-2是乳腺癌組織中的預(yù)后重要因素之一，進(jìn)一步提示醫(yī)師應(yīng)定期檢測(cè)乳腺癌術(shù)后患者的cox-2表達(dá)，把控患者的病情發(fā)展，同時(shí)應(yīng)制定對(duì)cox-2表達(dá)的患者的相關(guān)治療方案，提高患者的預(yù)后生存。

表2 乳腺癌術(shù)后組織cox-2表達(dá)與其微血管生成及預(yù)后關(guān)系的單因素分析(例，%)

圖1 有無(wú)cox-2表達(dá)患者的生存曲線

本研究仍存在一定不足，如樣本量較少不足以代表所有案例，但乳腺癌術(shù)后組織cox-2表達(dá)與其微血管生成及預(yù)后有關(guān)，有望成為乳腺癌抗血管形成治療的重要生物靶點(diǎn)，同時(shí)檢測(cè)cox-2表達(dá)對(duì)評(píng)估患者微血管生成及預(yù)后具有重要的價(jià)值。