超高壓液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定茶及茶飲品中解熱鎮(zhèn)痛藥物

丁建蘭，黃 寧，黃恩堂，趙 超

（鷹潭市綜合檢驗(yàn)檢測(cè)中心，江西 鷹潭 335000）

常見(jiàn)解熱鎮(zhèn)痛類(lèi)藥物有美洛昔康、萘普生、雙氯芬酸鈉等，在一些茶及茶飲品中存在非法添加此類(lèi)化學(xué)藥物的現(xiàn)象。由于非法添加行為的隱蔽性，給飲用者帶來(lái)了藥量疊加的中毒風(fēng)險(xiǎn)、藥物殘留隱患，并可通過(guò)食物鏈傳遞，對(duì)人體健康造成嚴(yán)重危害。為了打擊非法添加的違規(guī)行為，本文參考有關(guān)文獻(xiàn)[1-10]，研究建立了茶及茶飲品中非法添加解熱鎮(zhèn)痛類(lèi)藥物的檢測(cè)方法。

1 儀器與試藥

Agilent 6460三重串聯(lián)四級(jí)桿液質(zhì)聯(lián)用儀（配MassHunter軟件、電噴霧離子源）；KQ-500DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；MSE224S-1CE-DU電子天平[賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司]。

對(duì)照品均來(lái)源于中國(guó)食品藥品檢定研究院，供試品均為市場(chǎng)上購(gòu)得；甲醇、乙腈、甲酸均為色譜純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 對(duì)照品溶液的配制

精密稱(chēng)取對(duì)乙酰氨基酚、氨基比林、安替比林、吡羅昔康、萘普生、美洛昔康、雙氯芬酸鈉各10 mg分別置入100 ml量瓶，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻；分別精密吸取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液各1 ml，置入同一100 ml量瓶，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2 供試品溶液的配制

取研磨后混勻的茶葉或搖勻的液體飲料0.5 g，精密稱(chēng)定，置入25 ml量瓶，加入甲醇約18 ml，超聲15 min，放冷至室溫，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，過(guò)微孔濾膜（0.22 μm, 尼龍膜），取續(xù)濾液，供液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀分析。除不加試樣外，均按試樣同法操作，作為空白溶液。

2.3 色譜條件

色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）； 流速：0.3 ml/min；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：1 μl。流動(dòng)相：0.5 %的甲酸溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脫（0～16 min，97 %A～38 % A；16～17 min，38 % A～97 % A；17～20 min，97 % A）。

2.4 質(zhì)譜條件

離子源為電噴霧離子源（ESI），干燥氣溫度300 ℃，干燥氣流速11 L/min, 掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM），掃描模式為正離子模式，毛細(xì)管電壓4000 V；7種化合物定性、定量離子和質(zhì)譜分析參數(shù)參考值見(jiàn)表1。

2.5 方法學(xué)研究

表1 7種化合物定性、定量離子和質(zhì)譜分析參數(shù)

2.5.1 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品溶液適量，用甲醇稀釋制成不同濃度系列的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（臨用新配），按上述色譜條件，分別進(jìn)樣測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖1；以濃度（C）為橫坐標(biāo)，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，具體線性關(guān)系參數(shù)見(jiàn)表2。結(jié)果表明，各化合物線性關(guān)系良好。

圖1 混合對(duì)照品色譜圖

表2 7種化合物線性關(guān)系

2.5.2 精密度試驗(yàn) 取0.1 μg/ml的混合對(duì)照品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得對(duì)乙酰氨基酚、氨基比林、安替比林、吡羅昔康、萘普生、美洛昔康和雙氯芬酸鈉的峰面積的RSD值分別為0.8 %，1.1 %，1.8 %，2.7 %，1.6 %，2.4 %，4.1 %，均小于5 %，結(jié)果表明，儀器進(jìn)樣精密度良好。

2.5.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取加了混合對(duì)照品的供試品溶液，分別于配制0，2，4，8，12 h后，按上述色譜條件測(cè)定，測(cè)得對(duì)乙酰氨基酚、氨基比林、安替比林、吡羅昔康、萘普生、美洛昔康和雙氯芬酸鈉的峰面積的RSD值分別為2.1 %，0.8 %，1.4 %，2.7 %，1.7 %，2.7 %，2.3 %，結(jié)果表明，對(duì)照品溶液至少在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取加了混合對(duì)照品的供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)得對(duì)乙酰氨基酚、氨基比林、安替比林、吡羅昔康、萘普生、美洛昔康和雙氯芬酸鈉的峰面積的RSD值分別為0.7 %，1.0 %，1.6 %，2.3 %，1.5 %，2.1 %，2.5 %，均小于5 %，結(jié)果表明，方法重復(fù)性好。

2.5.5 回收率試驗(yàn) 精密稱(chēng)取陰性的研磨后混勻的茶葉0.5 g，共9份，分別精密加入對(duì)乙酰氨基酚、氨基比林、安替比林、吡羅昔康、萘普生、美洛昔康和雙氯芬酸鈉低、中、高不同的量，按供試品溶液的制備方法和上述色譜條件，分別進(jìn)樣測(cè)定，測(cè)得乙酰氨基酚、氨基比林、安替比林、吡羅昔康、萘普生、美洛昔康和雙氯芬酸鈉平均回收率分別為99.12 %，98.57 %，98.43 %，97.65 %，98.13 %，96.14 %，95.25 %，RSD值分別為0.7 %，1.5 %，1.3 %，2.1 %，1.7 %，2.2 %，2.9 %。

2.5.6 專(zhuān)屬性試驗(yàn) 取加了混合對(duì)照品的供試品溶液，按上述色譜條件質(zhì)譜掃描，將掃描的質(zhì)譜圖與對(duì)照品溶液的質(zhì)譜圖進(jìn)行比對(duì)，結(jié)果顯示匹配度98 %，表明樣品中的相關(guān)物質(zhì)對(duì)目標(biāo)物的測(cè)定不產(chǎn)生干擾，該方法專(zhuān)屬性良好。

2.5.7 檢出限 取對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，稀釋至不同濃度，按上述色譜條件，分別進(jìn)樣測(cè)定，可得到信噪比為3：1的色譜峰，即對(duì)乙酰氨基酚的檢出限為4 ng/ml，氨基比林、安替比林、吡羅昔康、美洛昔康的檢出限為10 ng/ml，萘普生和雙氯芬酸鈉的檢出限為12 ng/ml。

2.6 樣品測(cè)定

取不同產(chǎn)地、不同品種的茶葉及茶飲品，按供試品溶液的制備方法及上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)圖2、圖3及表3。

圖2 加標(biāo)樣品色譜圖

圖3 陰性樣品色譜圖

表3 茶葉及茶飲品中解熱鎮(zhèn)痛類(lèi)藥物測(cè)定結(jié)果

3 討論

本文考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-甲酸溶液/乙酸溶液、乙腈-甲酸溶液/乙酸溶液等不同流動(dòng)相中各組分的分離效果，以及水、甲醇、乙醇等不同的提取溶劑；最終確定甲醇為提取溶劑，流動(dòng)相為0.5 %的甲酸溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脫（0～16 min，97 % A～38 % A；16～17 min，38 %A～97 % A；17～20 min，97 % A）；該方法樣品前處理簡(jiǎn)單，分析速度快，靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度和穩(wěn)定性良好，能滿(mǎn)足檢測(cè)要求，可用于茶及茶飲品中非法添加解熱鎮(zhèn)痛藥物的檢測(cè)。