蘆花止血凝血實(shí)驗(yàn)研究※

鄭明月 余怡嬪 李亞林 廖 博 李 淼 馬會(huì)霞*

（華北理工大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，河北 唐山 063000）

蘆花，中藥名，為禾本科植物蘆葦?shù)幕?。秋季收獲，曬干，生于河塘的淺水中，分布于全國大部分地區(qū)，蘆根，又名葦根，味甘，性寒，主治消渴止熱，止小便利［1］。常用于嘔吐和腹瀉、衄血、血崩、外傷性出血、魚蟹中毒、干霍亂、心腹脹痛等?！吨兴幋筠o典》記錄了蘆花：“性味甘寒無毒，功效主治為止血解毒、治鼻衄、血崩、上下嘔吐和腹瀉。［2］”《本草綱目》記載了蘆花：“燒灰吹鼻，止衄血，亦入崩中藥?！比叻凼侨咧参锏母a(chǎn)物。它是由三七的主根制成的粉末［3］，性溫，味甘微苦，入肝、胃、大腸經(jīng)［4］。三七的功能可以用“止血、散瘀、定痛”來概括［5］。三七是五加科植物，含三七總皂甙［6］和人參皂甙，三七皂甙具有止血、活血的功效，而人參皂甙具有滋補(bǔ)的作用，三七既能止血又能促進(jìn)血液循環(huán)［4］。本課題使用低成本、易獲取的蘆花進(jìn)行小鼠實(shí)驗(yàn)，為蘆花的開發(fā)利用和臨床治療提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)，為臨床治療提供科學(xué)的理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物50 只6 周齡的雄性和雌性ICR 小鼠，購自濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司許可證號(hào)SCXK（魯）20140007。

1.1.2 藥物 蘆花水，蘆花灰（將蘆花灰煎成水煎液），三七粉水溶液，藥房購生理鹽水。

1.1.3 主要儀器 電磁爐、砂鍋、大燒杯、電子稱、灌胃針、注射器、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、玻璃棒、量筒、載玻片、大頭針、濾紙、紗布。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組 將50 只雌性和雄性小鼠隨機(jī)分為4 組，并用標(biāo)記物標(biāo)記，分為4 個(gè)實(shí)驗(yàn)組（蘆花水組、蘆花灰組、三七組、生理鹽水組）。每組12 只，剩余2 只作為實(shí)驗(yàn)斷尾法和眼眶后靜脈叢采血法練習(xí)使用。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)藥物劑量 每只小鼠用0.02 mL/g 的灌胃量，蘆花對(duì)于人，內(nèi)服用量為15～30 g，三七粉的用量為3～9 g。人類和動(dòng)物對(duì)同類藥物的耐受性差異很大。通常，動(dòng)物比人類更耐受，也就是說，每單位重量的動(dòng)物的用藥量大于人的用藥量。根據(jù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和人體劑量轉(zhuǎn)換系數(shù)［7］，按標(biāo)準(zhǔn)體質(zhì)量計(jì)算，其公式為：小鼠的劑量=X mg/kg×70 kg×0.002 6/0.02 kg=9.1 Xmg/kg。

我們將每千克人用三七量定為0.1 g 即X=0.1 g/kg，則小鼠用三七劑量為0.91 g/kg；而將蘆花水組和蘆花灰組每千克人的用量定為0.4 g，則小鼠用蘆花劑量為3.64 g/kg。

1.2.3 灌胃 首先將小鼠飼養(yǎng)1 周，以適應(yīng)環(huán)境，然后每組小鼠每日固定時(shí)間灌胃7 d。

1.2.4 觀察指標(biāo) 出血時(shí)間：連續(xù)給藥7 d 后，最后一次灌胃給藥后1 h，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作：通過斷尾法測定出血時(shí)間［8］，將小鼠置于固定器中，用解剖剪距小鼠尾尖3 mm處橫剪斷，當(dāng)血液自行溢出時(shí)計(jì)時(shí)，每隔10 s 用紗布吸血1 次，直至血液自然停止所需的時(shí)間是該小鼠的出血時(shí)間［9］。

凝血時(shí)間：在斷尾實(shí)驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作：通過玻片法測定凝血時(shí)間［10］，并且在最后一次給藥1 h 后用鑷子取出小鼠的左眼球，從其左眼后靜脈叢取血，拭去第一滴血后，在玻片上滴一滴并同時(shí)計(jì)時(shí)，每隔30 s 使用一個(gè)干凈的大頭針在玻片上挑血絲一次，當(dāng)有血絲出現(xiàn)時(shí)，計(jì)時(shí)完畢，即獲得凝血時(shí)間。

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPPS 20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用Microsoft Excel 進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料符合正態(tài)分布采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較使用t 檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組藥物對(duì)小鼠出血時(shí)間的影響 給小鼠連續(xù)灌胃7 d后，蘆花水組、蘆花灰組、三七組較生理鹽水組均縮短。蘆花灰組較生理鹽水組有顯著性縮短，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。蘆花水組與三七組較生理鹽水組比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 各組藥物對(duì)小鼠出血時(shí)間的影響 （±s）

表1 各組藥物對(duì)小鼠出血時(shí)間的影響 （±s）

2.2 各組藥物對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響 將小鼠連續(xù)灌胃7 d后，蘆花灰組較生理鹽水組縮短，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。蘆花水組、三七組和生理鹽水組比較，凝血時(shí)間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說明蘆花灰活血作用明顯，具有抗凝作用。見表2。

表2 各組藥物對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響 （±s）

表2 各組藥物對(duì)小鼠凝血時(shí)間的影響 （±s）

3 討論

3.1 蘆花的止血效果 出血時(shí)間是指在某些條件下，人為刺破皮膚的毛細(xì)血管后，從血液自然流出到自然停止所需的時(shí)間。出血時(shí)間的長短，與凝血因子、血小板的數(shù)量和功能、纖維蛋白溶解系統(tǒng)、毛細(xì)血管功能和組織收縮性有關(guān)［12］。蘆花的功效主治為止血、治鼻衄、血崩。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)蘆花的藥理作用及蘆花燒灰存性［13］的特質(zhì)，研究了蘆花水煎劑與蘆花燒灰煎液的止血效果，按照正常的服用劑量給藥，觀察其燒灰組止血作用強(qiáng)于水煎劑。對(duì)照組選用的三七粉水溶液，其是市面上常用的止血活血藥劑，在止血功效方面很有療效，但弱于普遍生長、易于獲取的蘆花。

3.2 蘆花的抗凝效果 凝血時(shí)間是指當(dāng)血液離開血管，在體外凝固的時(shí)間。其原理是離體靜脈血和普通玻璃試管接觸后，因子Ⅻ和內(nèi)源凝血系統(tǒng)被激活，并且最終生成纖維蛋白而血液凝固［12］。血液凝固是一系列蛋白質(zhì)水解活化的鏈反應(yīng)，抗凝系統(tǒng)中的抗凝物質(zhì)能阻斷凝血過程［14］，凝血時(shí)間長，抗凝效果好。4 個(gè)實(shí)驗(yàn)組相比較，蘆花灰組抗凝效果最佳，蘆花水組與三七組差異不明顯，表明蘆花燒灰后抗凝作用有提高。

3.3 發(fā)展前景 應(yīng)用斷尾法測定止血時(shí)間、取眼球法測定凝血時(shí)間，對(duì)比觀察蘆花灰、蘆花水、三七的止血凝血效果，我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：比較各組出血時(shí)間有明顯差異，其中蘆花灰明顯縮短，其次為蘆花水、三七；比較各組凝血時(shí)間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性，蘆花灰組顯著，說明蘆花灰活血作用明顯，具有抗凝作用。蘆花同三七一樣，不僅具有良好的止血作用，還有活血作用。近年來，隨著我國中醫(yī)藥事業(yè)發(fā)展，對(duì)中成藥傳統(tǒng)劑型進(jìn)行了革新與創(chuàng)新，并取得了一定的成績，已經(jīng)研制出許多新劑型，其有助于臨床用藥的豐富、藥物的充分使用和藥物應(yīng)用的便利性。市場上廣泛使用的止血藥材，普遍價(jià)格偏高，部分藥材日益稀缺。因此，我們可以考慮將蘆花燒灰制成外用藥，應(yīng)用于止血活血祛瘀止衄的方藥中。