通過固相萃取凈化/高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測定華南黃瓜和華北黃瓜中的烯酰嗎啉與啶蟲脒殘留

馬藝蕎王祿祿 王劍鋒譚 克 李彥軍姜奇峰*

（1.吉林省蔬菜花卉科學(xué)研究院 吉林長春 130033 2.吉林省正恒檢測有限公司 長春 130011）

啶蟲脒是一種新型殺蟲劑，可有效防治農(nóng)產(chǎn)物的蟲害，并可殺卵，此殺蟲劑經(jīng)常用于蔬菜[1]。烯酰嗎啉是一種信息內(nèi)吸治療性殺菌劑，對卵菌各個階段都有抑制作用，醉霜霉病霜疫霉病、晚疫病、疫（霉）病、疫腐病、腐霉病、黑脛病等低等真菌性病害均具有很好的防治效果[2]。兩種農(nóng)藥經(jīng)常被用于葡萄、荔枝、黃瓜、甜瓜、苦瓜、番茄、辣椒、馬鈴薯、十字花科蔬菜[3]。

近年來，電噴霧液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-ESI MS MS）經(jīng)常因靈敏度高，分析快速，定性定量準(zhǔn)確而被用于多種農(nóng)殘檢測[4]。本文采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的方法，經(jīng)過前期處理步驟，建立了快速分析啶蟲脒與烯酰嗎啉殘留的方法。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

華南黃瓜和華北黃瓜（市面購買）：乙腈（美國Fisher chemical公司)、甲酸（麥克林）均為色譜純：氯化鈉（國藥化學(xué)試劑有限公司）；啶蟲脒、烯酰嗎啉（農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所）。

儀器：Agilent 1260 UPLC-Agilent 6470A高效液相色譜-串聯(lián)三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（配ESI離子源）；離心機TG16.5（上海盧湘儀離心機儀器有限公司）；固相萃取ASE-12(天津奧特賽恩斯儀器有限公司)；超聲波提取儀KQ-8000DE（昆山市超聲儀器有限公司）；氮吹儀BF2000-15A（北京八方世紀(jì)科技有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)RE-2000A（上海亞榮生化儀器廠）；可調(diào)式混勻儀MX-S（大龍興創(chuàng)實驗儀器（北京）有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 樣品處理

華南黃瓜和華北黃瓜取代表性樣品500g，取可食部分，避光勻漿，每種樣品平均分為2份保存在0～4℃冷藏保存。

1.2.2 樣品前處理

稱取10g試樣于50mL離心管中，加入20mL乙腈，渦旋1min，超聲 30min，加 5g 氯化鈉，在渦旋 1min[5]，8000r/min 離心5min，取上清10mL，在50℃水浴中旋轉(zhuǎn)濃縮至約1mL，待凈化。

1.2.3 凈化

在Sep-Pak固相萃取柱中加入2cm左右無水硫酸鈉，并放在雞心瓶固定架上，加樣前使用5mL乙腈預(yù)洗柱，當(dāng)液面即將流干時，加入樣品濃縮液，并更換雞心瓶接收凈化液，使用乙腈10mL乙腈分3次洗脫，并接收洗脫液于雞心瓶中，在50℃水浴中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至約1mL。將濃縮液至于50℃氮吹儀上吹干，迅速加入1mL乙腈+甲酸水0.1%（3+2）渦旋混勻，經(jīng)0.22μm濾膜過濾后進行液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定[5]。

1.2.4 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定條件

1） 色譜柱：Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18 2.1mm×50 mm，1.8-Micron。

2）流動相及洗脫程序見表1

表1 流動相及梯度洗脫條件

流動相A：乙腈 流動相B：0.1%甲酸水溶液梯度洗脫，流速0.4mL/min，進樣量 1μL。

3）電噴霧離子源（ESI）：正離子掃描，多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）模式；毛細(xì)管電壓3.5KV，噴嘴電壓500V，鞘氣流速11L/min，鞘氣溫度250℃，霧化器壓力45psi，干燥器流速5L/min，干燥器溫度300℃。

4）烯酰嗎啉與啶蟲脒MRM質(zhì)譜優(yōu)化參數(shù)

啶蟲脒保留時間0.405min，母離子223.2：定量離子126.2，去簇電壓100eV，碰撞能量20eV；定性離子90.0，去簇電壓100eV，碰撞能量30eV。

烯酰嗎啉保留時間0.510min，母離子388.1：定量離子301.1，去簇電壓100eV，碰撞能量20eV；定性離子165.1，去簇電壓100eV，碰撞能量30eV。

2 結(jié)果

2.1 質(zhì)譜條件優(yōu)化

根據(jù)每種化合物的準(zhǔn)分子離子及其特征離子的質(zhì)譜圖，選擇兩個子離子與母離子組成兩對離子對進行MRM檢測。先對啶蟲脒與烯酰嗎啉進行全掃（MS2 Scan），確定啶蟲脒與烯酰嗎啉的母離子為223.2與388.1，依次對兩種物質(zhì)進行選擇離子檢測（MS2 SIM）、子離子掃描（Product lon）、多重反應(yīng)監(jiān)測（MRM），確定子離子、碰撞能量、加速電壓等質(zhì)譜參數(shù)[6]。

圖1 啶蟲脒與烯酰嗎啉的質(zhì)譜方法

2.2 華南黃瓜與華北黃瓜檢測結(jié)果分析

市面上的華南黃瓜與華北黃瓜的啶蟲脒與烯酰嗎啉檢測結(jié)果均為未檢出。

圖2 啶蟲脒與烯酰嗎啉的線性范圍及回歸方程

表2 啶蟲脒與烯酰嗎啉的線性范圍、回歸方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限、定量限

固相萃取凈化/高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定華南黃瓜和華北黃瓜中烯酰嗎啉與啶蟲脒殘留[7]。樣品經(jīng)過處理凈化，電噴霧（ESI）離子源多反映檢測模式進行質(zhì)譜檢測，外標(biāo)法定量[8-10]。

結(jié)果表明在0.5～50ng/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.9960。啶蟲脒與烯酰嗎啉的定量限分別為0.84μg/kg與0.15μg/kg。

2.3 回收率與精密度

空白樣品分別添加 5μg/kg，10μg/kg，20μg/kg 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個濃度做5個平行樣品，按照方法1.2.2處理，啶蟲脒與烯酰嗎啉平均回收率為76.7%～117.6%，相對偏差（RSD）為2.3%～9.8%。

3 結(jié)論

本實驗采用固萃取凈化/高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測定華南黃瓜和華北黃瓜中烯酰嗎啉與啶蟲脒殘留。樣品經(jīng)過破壁凈化處理，電噴霧（ESI）離子源多反映檢測模式進行質(zhì)譜檢測，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明在0.5～50ng/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)均大于0.9960。在5～20μg/kg的加標(biāo)濃度范圍內(nèi)，平均回收率為76.7%～117.6%，相對偏差（RSD）為2.3%～9.8%。