APR3蛋白在卵巢上皮腫瘤組織內(nèi)的表達(dá)特點及臨床意義

相元翠，栗浩然，劉會敏，王雅莉

（鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南 鄭州450000）

卵巢癌的發(fā)生率具有一定的上升趨勢，流行病學(xué)研究證實，我國部分地區(qū)2010-2017年卵巢癌的平均發(fā)病率可達(dá)273～492/10萬人左右[1]。臨床上卵巢癌的發(fā)生能夠?qū)е禄颊吒吣[瘤負(fù)荷表現(xiàn)，影響患者的生活質(zhì)量和生存預(yù)后水平[2]。

在探討卵巢癌的發(fā)生病因的過程中可以發(fā)現(xiàn)，不同的腫瘤相關(guān)蛋白的表達(dá)，能夠影響到卵巢生發(fā)上皮細(xì)胞的生物學(xué)特征,進(jìn)而影響到了卵巢癌的發(fā)生過程。凋亡相關(guān)蛋白3（APR3）是凋亡調(diào)控家族的重要成員，APR3的表達(dá)能夠通過抑制癌細(xì)胞的凋亡，降低癌細(xì)胞程序性凋亡的比例，進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞的持續(xù)性擴(kuò)增過程。同時APR3的表達(dá)還能夠影響癌細(xì)胞的細(xì)胞周期,導(dǎo)致上皮細(xì)胞周期調(diào)控的紊亂[3]。部分研究者探討了APR3在乳腺癌或者甲狀腺癌患者中的表達(dá)情況，認(rèn)為APR3的表達(dá)陽性率的上升與乳腺癌患者的臨床預(yù)后的惡化密切相關(guān)[4,5]，但對于APR3蛋白的表達(dá)與卵巢癌的關(guān)系研究不足。為了揭示APR3與卵巢癌的發(fā)生關(guān)系,從而為臨床上卵巢癌患者的診療和預(yù)后評估提供理論方面的參考,本次研究選取我院2011年1月至2015年3月收集的卵巢上皮癌組織94例，探討了APR3蛋白的表達(dá)情況，報告如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取我院2011年1月至2015年3月收集的卵巢上皮癌組織94例（卵巢癌組）、卵巢良性腫瘤組織60例（對照組）。

卵巢癌組,年齡 36～67歲,平均為 53.5±9.5歲，分化程度：高分化28例、中分化44例、低分化32例；FIGO分期：Ⅰ期23例、Ⅱ期37例、Ⅲ期22例、Ⅳ期8例；發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例。對照組，年齡38～65歲，平均為55.0±10.2歲，其中漿液性囊腺瘤32例、粘液性囊腺瘤21例、畸胎瘤7例。兩組患者的年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。

納入標(biāo)準(zhǔn)：⑴卵巢癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考人民衛(wèi)生出版社第八版《婦產(chǎn)科學(xué)》中的標(biāo)準(zhǔn)；⑵經(jīng)病理學(xué)檢查證實；⑶患者接受了隨訪觀察；⑷在獲取標(biāo)本前，患者未接受放化療及免疫治療；⑸本研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn)。

排除標(biāo)準(zhǔn)：⑴伴有其他類型的惡性腫瘤；⑵資料缺失、無法進(jìn)行統(tǒng)計分析；⑶精神疾病患者；⑷免疫疾病。

1.2 免疫組化染色檢測方法 所有組織標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋后作連續(xù)切片,厚度約為4μm,采用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復(fù)合體法(strep avidin—biotin complex,SABC法)染色,二氨基聯(lián)苯胺(diamionben zidene,DAB)顯色。APR3蛋白通用型二抗以及SP試劑盒和DAB顯色盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)開發(fā)公司。以陽性片及PBS代替一抗分別作為陽性及陰性對照,高倍顯微鏡下觀察APR 3蛋白的表達(dá)情況，具體染色步驟嚴(yán)格按照SP試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3 免疫組化判斷標(biāo)準(zhǔn) 免疫組化結(jié)果判定：APR3蛋白的陽性著色表達(dá)于細(xì)胞漿，呈黃色、棕黃色、褐色表達(dá)，⑴根據(jù)著色強度：0分為無色、1分為淡黃色、2分為棕黃色、3分為褐色、黑色；⑵根據(jù)陽性細(xì)胞比例：陽性細(xì)胞數(shù)目所占比例≤10%為1分、陽性細(xì)胞所占比例11%～50%為2分、陽性細(xì)胞數(shù)51%～75%為3分、陽性細(xì)胞數(shù)所占比例>75%為4分，兩種積分相乘總分<3分為陰性、≧3分為陽性；總分<3 分：“-”表達(dá)；為 3～5 分，“+”表達(dá)；為 6～9 分，“++”表達(dá)；>9 分，“+++”表達(dá)。

2 結(jié)果

2.1 兩組標(biāo)本中的APR3蛋白陽性表達(dá)率比較 卵巢癌組中的APR3蛋白陽性表達(dá)率69.15%顯著高于對照組的28.33%,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P<0.05）；見表 1。

表1 兩組標(biāo)本中的APR3蛋白陽性表達(dá)率比較

2.2 不同病理學(xué)特征的卵巢上皮癌患者APR3蛋白陽性表達(dá)率比較 低分化、FIGO分期 （Ⅲ期、Ⅳ期）、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、伴有腹水的卵巢癌組織中的APR3蛋白陽性表達(dá)率均高于高中分化、FIGO分期（Ⅰ期、Ⅱ期）、未發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、不伴有腹水的上皮卵巢癌組織,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義 （P<0.05）；見表 2。

2.3 APR3蛋白表達(dá)與上皮性卵巢癌患者預(yù)后的關(guān)系分析 94例上皮卵巢癌患者，隨訪36個月,失訪7例,死亡59例、存活28例，3年存活率為32.18%；采用Cox比例風(fēng)險回歸模型分析,低分化、FIGO分期增高、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、APR3蛋白陽性表達(dá)是上皮卵巢癌患者不良預(yù)后的獨立危險因素（P<0.05）；見表 3。

3 討論

卵巢生發(fā)上皮細(xì)胞的持續(xù)性病變,能夠顯著促進(jìn)不同類型來源的卵巢惡性腫瘤的發(fā)生,特別是在合并有家族史的患者中,卵巢癌的發(fā)生風(fēng)險更高，治療后的生存時間或者五年生存率等指標(biāo)更差[6]?，F(xiàn)階段臨床上手術(shù)及放化療等綜合性措施治療后，卵巢癌患者的病情緩解率仍然不足35%，治療后的無瘤生存時間不足32個月[7,8]。另外，現(xiàn)階段臨床上缺乏對于卵巢癌血清學(xué)診斷的可靠性指標(biāo),雖然CA125或者人附睪蛋白的檢測能夠提高卵巢癌的血清學(xué)診斷水平,但其診斷的總體靈敏度仍然較低。而本次研究對于卵巢癌患者體內(nèi)APR3蛋白水平的研究，具有下列幾個方面的現(xiàn)實價值：⑴能夠為臨床上卵巢癌的免疫靶向性治療提高新的研究靶點;⑵能夠為臨床上卵巢癌的早期血清學(xué)診斷提供理論依據(jù)。

表2 不同病理學(xué)特征的卵巢上皮癌患者APR3蛋白陽性表達(dá)率比較

表3 Cox比例風(fēng)險模型分析結(jié)果

APR3蛋白作為凋亡相關(guān)因子，其四級空間結(jié)構(gòu)上包含了多個糖蛋白配體區(qū)域,其能夠通過結(jié)合癌細(xì)胞膜上的跨膜受體,進(jìn)而影響癌細(xì)胞內(nèi)的信號通路的激活[9]。APR3蛋白對于癌細(xì)胞內(nèi)的AKT信號通路的激活,能夠顯著促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄活性的加強，抑制了癌細(xì)胞的凋亡。APR3還能夠通過直接結(jié)合癌細(xì)胞核周邊轉(zhuǎn)錄基因,降低了癌細(xì)胞內(nèi)染色體末端端粒結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性,導(dǎo)致癌細(xì)胞凋亡比例明顯的下降[10]?；A(chǔ)方面的研究也認(rèn)為，APR3蛋白的表達(dá)能夠?qū)е掳┘?xì)胞的生物學(xué)特征的改變，增加了癌細(xì)胞的浸潤和粘附能力[11]。部分研究者探討了APR3蛋白在卵巢癌患者中的表達(dá)情況,認(rèn)為APR 3蛋白表達(dá)陽性率可明顯的上升,但缺乏對于APR 3蛋白的表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系研究。

本次研究對于卵巢癌患者體內(nèi)的APR3蛋白分析研究可見，APR3蛋白在卵巢癌患者中的表達(dá)陽性率明顯的上升，高于卵巢良性組患者，差異較為明顯，提示了APR3蛋白的高表達(dá)可能參與到了卵巢癌的發(fā)生發(fā)展過程。通過匯集不同的相關(guān)文獻(xiàn)，筆者認(rèn)為這主要由于APR3蛋白的下列幾個方面的作用有關(guān)[12-14]：⑴APR3蛋白的上升能夠?qū)е掳┫礕1/S期細(xì)胞比例的上升,提高了癌細(xì)胞快速跨越G0期的能力；⑵APR3蛋白陽性率的上升，還能夠提高癌細(xì)胞的凋亡風(fēng)險,促進(jìn)卵巢干細(xì)胞持續(xù)性自我增殖的能力。Kurata S等[15]研究者也認(rèn)為，在卵巢癌病灶組織中，APR3蛋白的表達(dá)陽性率可平均上升35%以上,特別是在合并有明顯的腹水或者高腫瘤負(fù)荷表現(xiàn)的患者中，APR3蛋白表達(dá)陽性率的上升更為明顯。對于APR3蛋白的表達(dá)與卵巢癌患者臨床病理特征的關(guān)系研究可見,發(fā)生了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期較晚、細(xì)胞分化程度較差或者合并有明顯的腹水的患者中，APR3蛋白的表達(dá)陽性率可明顯的上升，提示APR3蛋白的表達(dá)與卵巢癌患者的臨床病理特征密切相關(guān)，這主要由于APR3蛋白的表達(dá)能夠促進(jìn)癌細(xì)胞對于盆腔內(nèi)淋巴結(jié)內(nèi)皮細(xì)胞的粘附,并能夠?qū)е掳┘?xì)胞浸潤盆腔內(nèi)臟器組織能力的增強。但部分研究者并不認(rèn)為APR3蛋白的表達(dá)與卵巢癌患者盆腔內(nèi)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，認(rèn)為APR3蛋白的表達(dá)只與卵巢癌患者的臨床分期相關(guān)，存在相關(guān)的臨床結(jié)論的差別，主要考慮與卵巢癌患者的病情差別較大、APR3蛋白檢測靈敏度的不同有關(guān)。對于卵巢癌患者臨床預(yù)后的分析可見,低分化、FIGO分期增高、發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、APR3蛋白陽性表達(dá)是上皮卵巢癌患者不良預(yù)后的獨立危險因素，提示APR3蛋白與卵巢癌患者的臨床預(yù)后密切相關(guān)，推測這主要由于APR3能夠參與卵巢癌的遠(yuǎn)期復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移過程,進(jìn)而影響卵巢癌的臨床預(yù)后水平。

綜上所述，在卵巢癌患者病灶組織中，APR3蛋白的表達(dá)的明顯的上升，同時APR3蛋白的表達(dá)與卵巢癌患者的臨床病理特征和臨床預(yù)后密切相關(guān)。