IgG性質(zhì)冷反應(yīng)性類抗-M特異性自身抗體的鑒定與輸血

任 明，江夢天，強 文，楊 茹

(武漢血液中心輸血研究室，湖北武漢 430030)

MNSs血型系統(tǒng)中M抗原在中國人中的比例為78.37%，抗-M是一個人血液中常見的抗體，多為自然產(chǎn)生，以IgM性質(zhì)為主，且只在低于37 ℃時有反應(yīng)，故臨床意義不大，部分為IgG性質(zhì)抗體，可導致嚴重的新生兒溶血病[1]，類抗-M屬于類特異性自身抗體，目前國內(nèi)報道較少。本實驗室最近發(fā)現(xiàn)1例M抗原陽性的急性白血病患者抗體鑒定呈現(xiàn)抗-M特異性，對其進行抗體鑒定和相關(guān)特性檢測和分析，證實該抗體為IgG性質(zhì)冷反應(yīng)性類抗-M特異性自身抗體，報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 患者，男，2歲1月，2018年5月因全血細胞減少入院，診斷為急性淋巴細胞白血病，既往無輸血史。入院查得RBC 2.34×1012/L，Hb 59g/L，WBC 2.2×109/L，PLT 37×109/L，血型O型RhD陽性，意外抗體篩查陽性，送至本科室進行檢測。

1.2試劑與儀器 單克隆抗-A、抗-B血清、IgM抗-D、抗-IgG,C3d抗人球蛋白試劑及篩選細胞均由上海血液生物技術(shù)有限公司提供；ABO反定型細胞為自制；其余還包括譜細胞、IgG抗-M、IgG抗-N(Sanquin)，2-巰基乙醇(2-Me，Baso)、低離子抗人球蛋白卡(Bio-Rad)。主要儀器包括KA-2200離心機(日本KUBOTA)、ID-Incubator 37 SI 達亞美卡式孵育器、ID-Centrifuge 12 SⅡ卡式離心機(Bio-Rad)和國華HH-60恒溫水浴箱。

1.3方法 采用試管法對患者ABO血型、MN表型定型；用鹽水介質(zhì)法及鹽水抗人球蛋白法進行抗體特異性鑒定；吸收試驗采用4 ℃吸收60 min，洗滌采用冰鹽水，放散試驗采用56 ℃熱放散10 min；其他試驗嚴格按照輸血技術(shù)操作規(guī)程[2]和相關(guān)試劑說明書操作。

2 結(jié) 果

2.1血型鑒定 患者血型為O型RhD陽性，MN血型表型為MN。

2.2直接抗人球蛋白試驗 試管法多特異性抗人球蛋白為陰性；紅細胞4 ℃鹽水洗滌3次后，微柱凝集卡多特異性抗人球蛋白試驗為弱陽性(1+w)。

2.3意外抗體鑒定(患者血清和紅細胞放散液) 患者血清在室溫鹽水介質(zhì)中呈現(xiàn)抗-M特異性，37 ℃抗人球蛋白介質(zhì)中未檢出抗體；患者紅細胞56 ℃熱放散10 min，放散液利用抗人球蛋白微柱凝集卡分別在37 ℃和4 ℃進行抗體鑒定，前者未檢出抗體，后者呈現(xiàn)抗-M特異性，見表1。

2.4抗體性質(zhì)檢測 將血清2-Me處理后，分別在4 ℃、室溫、37 ℃條件下孵育10 min，與MM表型譜細胞(MM cell)、NN表型譜細胞(NN cell)反應(yīng)，同時用原血清平行對照試驗，提示該抗體為IgG性質(zhì)冷反應(yīng)性抗體，且最佳反應(yīng)溫度為4 ℃，其血清學反應(yīng)結(jié)果見表2。

2.5吸收放散試驗鑒別類特異性抗體 鹽水試管法條件下患者血清與NN cell在4 ℃呈現(xiàn)凝集反應(yīng)，而2-Me處理血清呈陰性反應(yīng)，說明患者血清中存在冷抗體，故對患者血清2-Me處理后，利用MM、NN表型的紅細胞進行吸收試驗(4 ℃、60min)和放散試驗(56℃、10min)；利用MM cell、NN cell檢測吸收后血清及放散液，顯示該抗體能被MM表型紅細胞吸收并放散，能被NN表型紅細胞吸收但放散液未檢出抗體，其血清學反應(yīng)結(jié)果見表3；利用譜細胞鑒定吸收后血清及放散液抗體特異性，抗體鑒定結(jié)果見表4。

表1 患者血清、紅細胞抗體放散液與譜細胞反應(yīng)格局

注：NS為鹽水介質(zhì)；卡為抗人球蛋白微柱凝膠卡；/表示該項無數(shù)據(jù)

表2 血清和2-Me在不同溫度下孵育處理后與表型譜細胞反應(yīng)的情況

表3 吸收后血清和放散液在不同溫度下的凝集情況

表4 吸收后血清和放散液與譜細胞反應(yīng)格局

注：反應(yīng)條件為微柱凝膠卡4 ℃孵育15 min

2.6輸血情況 篩選O型RhD陽性、NN表型洗滌紅細胞，并經(jīng)鹽水介質(zhì)法、4 ℃抗人球蛋白微柱凝膠卡進行交叉配血，且交叉配血相合的血液予以輸注，患者共輸血3次，每間隔10 d輸注1 U，其輸血前后相關(guān)指標見表5。

表5 輸血前后RBC、HGB、HCT指標對比

3 討 論

自身抗體多發(fā)生于自身免疫性疾病患者血清中，通常與篩選細胞、譜細胞呈現(xiàn)非特異性凝集；少數(shù)自身抗體特異性呈現(xiàn)與某一抗原明顯相關(guān)，涉及Rh、Kidd、Duffy、Kell、MNSs等血型系統(tǒng)，國內(nèi)報道其發(fā)生頻率為4.4%～8.6%[3-4]。自身抗體的特異性依據(jù)其是否能被抗體相對應(yīng)抗原陰性的紅細胞吸收，分為真實特異性自身抗體和類特異性自身抗體，前者不能被抗體相對應(yīng)抗原陰性紅細胞吸收；后者不僅能被抗體相對應(yīng)抗原陽性紅細胞吸收也能被抗原陰性紅細胞吸收，多為類似Rh系統(tǒng)血型抗體，類抗-M特異性較為少見[5]，國內(nèi)報道類抗-M特異性自身抗體中，有1例產(chǎn)婦，1例新生兒，2例AIHA患者[6-9]。

本病例中，抗體鑒定呈現(xiàn)室溫反應(yīng)性抗-M特異性，但患者紅細胞MN表型鑒定為M抗原陽性，且既往無輸血史，于是進一步查找原因。該患者紅細胞直接抗人球蛋白試驗呈弱陽性，對紅細胞進行放散試驗后鑒定放散液抗體特異性，發(fā)現(xiàn)該抗體在4 ℃能檢出，而37 ℃不能檢出(表1)。該抗體2-Me處理前后與MM cell在室溫反應(yīng)凝集強度無明顯變化(表2)，說明該抗體為IgG性質(zhì)且能在室溫鹽水介質(zhì)中發(fā)生凝集反應(yīng)，而在37 ℃、室溫、4 ℃條件下與MM cell反應(yīng)凝集強度依次增強，證實該抗體為冷反應(yīng)性抗體，且4℃反應(yīng)最佳。利用MM和NN表型的紅細胞分別對血清進行吸收與放散試驗，發(fā)現(xiàn)二者吸收后血清均未檢出抗體，表明該抗體能被MM和NN表型紅細胞吸收；MM表型紅細胞吸收后放散液與MM cell在4℃存在反應(yīng)性，其凝集強度1+(表3)，明顯弱于2-Me處理血清與MM cell在4 ℃的凝集強度3+(表2)，分析可能是抗體較弱且親和力較低，在洗滌過程中容易解離，從而導致凝集減弱，同理，NN表型紅細胞吸收后放散液與MM cell不反應(yīng)，亦可能是抗體在吸收放散試驗過程中存在損失導致假陰性反應(yīng)。依據(jù)表3反應(yīng)情況，進一步對吸收后血清及放散液利用抗人球蛋白凝膠卡在4 ℃進行抗體鑒定，結(jié)果顯示NN表型紅細胞能吸收該抗體但放散液未檢出抗體，MM表型紅細胞能吸收并放散該抗體且抗體特異性為抗-M，進一步驗證了表2的結(jié)果，結(jié)合患者自身存在M抗原，綜合分析該抗體為IgG性質(zhì)冷反應(yīng)性類抗-M特異性自身抗體。

該患者診斷為急性淋巴細胞白血病，未使用過免疫抑制劑類藥物，推測可能由于疾病本身導致類抗-M特異性自身抗體產(chǎn)生，該抗體與新生兒M溶血病中的抗-M抗體有相似之處[9-11]，二者相比，均屬于IgG性質(zhì)冷反應(yīng)性抗體，但本例患者標本屬于類特異性自身抗體，而M溶血病中的抗-M抗體則屬于同種免疫性抗體。針對此類抗體，除了選擇不含抗體對應(yīng)抗原的血液外，還應(yīng)依據(jù)抗體特性，選擇該抗體最佳反應(yīng)條件進行交叉配血試驗，避免常規(guī)試驗方法漏檢導致假陰性結(jié)果。本病例依據(jù)該抗體的特征，選擇O型RhD陽性、NN表型且鹽水介質(zhì)及4 ℃抗人球蛋白凝膠卡交叉配血試驗相合的洗滌紅細胞予以輸注，患者共輸血3次，每間隔10 d輸注1 U洗滌紅細胞，輸注后患者面色較輸注前紅潤，RBC、HGB、HCT均明顯上升(表5)，取得了較好的輸注效果。