p53、PTEN、p16、HER-2和Ki-67蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的關(guān)系研究

石 巖，肖繼輝

(臨潁縣人民醫(yī)院病理科，河南 漯河 462600)

子宮內(nèi)膜癌是常見婦科惡性腫瘤疾病，近年來發(fā)病率呈直線上升[1]。早期診斷及早期治療是提高患者生存率及改善患者生活質(zhì)量的重要手段。腫瘤發(fā)生的關(guān)鍵因素是患者體內(nèi)基因的改變[2]，而子宮內(nèi)膜癌標(biāo)志物在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)可反映腫瘤的分期、轉(zhuǎn)移以及浸潤情況，因此臨床上對子宮內(nèi)膜癌組織中特異性標(biāo)志物進(jìn)行檢測分析，有助于子宮內(nèi)膜癌的臨床早期診斷，更利于治療過程中的療效評估及預(yù)后分析。本研究就p53、人第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源的基因(PTEN)、p16、人類表皮生長因子受體-2(HER-2)和Ki-67在不同子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)差異情況進(jìn)行分析，總結(jié)上述幾種標(biāo)志物在子宮內(nèi)膜癌臨床診治中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2016年5月至2018年4月在我院因子宮內(nèi)膜癌進(jìn)行治療的65例病理組織樣本作為研究對象納入觀察組，患者年齡35～75(49.83±6.74)歲。按照國際精準(zhǔn)分型標(biāo)準(zhǔn)[3]，子宮內(nèi)膜癌分級：Ⅰ期13例，Ⅱ期20例，Ⅲ期25例，Ⅳ期7例；細(xì)胞分化程度：G1期25例，G2期23例，G3期17例。所有患者全部經(jīng)病理檢查確診為子宮內(nèi)膜癌，未合并其他腫瘤。選取同期我院手術(shù)收集的正常子宮內(nèi)膜組織32例作為研究對象納入對照組，年齡28～70(47.42±7.56)歲。2組患者年齡比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(t=1.590，P>0.05)。

1.2 方法用免疫組化法檢測各個指標(biāo)的表達(dá)情況。其中一張切片用做HE染色病理組織學(xué)診斷，其余石蠟切片備做免疫組織化學(xué)用。檢測具體步驟：樣本使用前用甲醛進(jìn)行固定，脫水后用石蠟切片進(jìn)行包埋。將石蠟切片至于烘箱中，待其烘干后進(jìn)行脫蠟處理。并用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗2～3次，每次沖洗時長3 min。滴加體積分?jǐn)?shù)3%雙氧水(以消除內(nèi)源性過氧化物酶的活性)，孵育10 min，PBS沖洗3次，每次3 min。去除PBS后加入相應(yīng)的第一抗體，室溫孵育1.5 h。PBS沖洗2次，1次5 min。在每張切片上滴加增強子，孵育20 min。重復(fù)清洗步驟，PBS沖洗2次，1次5 min。每張切片加入酶標(biāo)二抗(單克隆抗體)并孵育30 min。用PBS沖洗2次，1次5 min。最后用移液器吸取1 mL DNB Plus Substrate至1.5mL離心管中并加入2滴DNB Plus Chromogen 在混勻儀上震蕩混勻(顯色)1 min離心3 s后加入切片中。室溫孵育10 min。沖洗后復(fù)染、脫水、封片。

1.3 結(jié)果判定免疫組化法分析的p53、PTEN、p16、HER-2及Ki-67陽性表達(dá)位于細(xì)胞核中，光學(xué)顯微鏡下隨機(jī)觀察計數(shù)100個細(xì)胞，細(xì)胞質(zhì)為淡藍(lán)色，陽性表達(dá)為棕褐色顆粒。

2 結(jié)果

2.1 2組患者p53、PTEN、p16、HER-2及Ki-67的陽性表達(dá)情況比較觀察組p53陽性表達(dá)率顯著高于對照組，而PTEN、p16、HER-2和Ki-67陽性表達(dá)率均明顯低于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P均<0.05)。見表1。

表1 2組患者p53、PTEN、p16、HER-2及Ki-67的陽性表達(dá)情況比較 n(%)

2.2 子宮內(nèi)膜癌組織中p53、PTEN、p16、HER-2及Ki-67陽性表達(dá)與其病理特征的關(guān)系p53陽性表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的臨床分期有關(guān)(P<0.05)；PTEN、p16、HER-2和Ki-67陽性表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的臨床分期和分化程度有關(guān)(P均<0.05)。見表2、3。

表2 子宮內(nèi)膜癌組織中p53、PTEN、p16、HER-2及Ki-67陽性表達(dá)與其腫瘤分期的關(guān)系 n(%)

表3 子宮內(nèi)膜癌組織中p53、PTEN、p16、HER-2及Ki-67陽性表達(dá)與其腫瘤分化程度的關(guān)系 n(%)

3 討論

隨著早期診斷技術(shù)的發(fā)展及子宮內(nèi)膜癌病理研究的深入，抑癌基因在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展中的作用已引起了廣泛關(guān)注。既往研究中，p53、PTEN、p16、HER-2以及Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組織的表達(dá)情況已有相關(guān)研究進(jìn)行分析，但幾種標(biāo)志物聯(lián)合診斷分析的較少[4-5]。

野生型p53是一種抑癌基因，p53所攜帶的編碼蛋白有著很重要的功能[6-7]，包括引起細(xì)胞周期阻滯、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、促進(jìn)細(xì)胞分化等，其突變情況可以導(dǎo)致多種腫瘤的發(fā)生。本研究中65例子宮內(nèi)膜癌的陽性表達(dá)率為50.76%，顯著高于對照組。不同腫瘤細(xì)胞分化程度的p53陽性表達(dá)并無顯著性差異(P>0.05)，但不同腫瘤分期下p53陽性表達(dá)差異顯著(P<0.05)；這表明p53可以作為臨床病理組織子宮內(nèi)膜癌不同細(xì)胞分期的重要參考指標(biāo)。

PTEN基因是一種具有雙重磷酸酶活性的抑癌基因[8]，具有較好的抗腫瘤活性。本研究結(jié)果顯示，觀察組的PTEN基因陽性表達(dá)低于對照組，這說明PTEN基因的變異導(dǎo)致子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生。p16基因在很多惡性腫瘤中都有存在[9]。本研究結(jié)果表明，p16在正常的子宮內(nèi)膜中都有不同的表達(dá)，觀察組的p16陽性表達(dá)率明顯低于對照組。這一研究表明p16的失活意味著子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生。因此，p16可以對子宮內(nèi)膜癌的診斷及治療有明確的指導(dǎo)作用。HER-2基因也是子宮內(nèi)膜癌的一種腫瘤標(biāo)志物，其表達(dá)與病理分期有著很大關(guān)聯(lián)[10]。本研究數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，HER-2基因的異常表達(dá)在G3級最高，G1級最低。隨著病理的升高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。此外，從本研究數(shù)據(jù)同樣可以看出子宮內(nèi)膜癌中的ki-67指數(shù)同樣高于正常子宮內(nèi)膜指數(shù)，結(jié)果顯示G3級最高，G1級最低。結(jié)合本研究總體數(shù)據(jù)，得出結(jié)論：PTEN、PTEN、p16、HER-2和Ki-67蛋白陽性表達(dá)與子宮內(nèi)膜癌的臨床分期以及分化程度有關(guān)。

綜上所述，p53、PTEN、p16、HER-2和Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組織中存在異常表達(dá)，可作為子宮內(nèi)膜癌臨床診斷、治療的觀察指標(biāo)。