耐力訓(xùn)練減輕高脂飲食相關(guān)非酒精脂肪肝大鼠肝臟炎癥的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)機(jī)制研究

江紅軻 邵長(zhǎng)專(zhuān) 池愛(ài)平

摘 要：目的：內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)紊亂是炎癥發(fā)生的關(guān)鍵機(jī)制;運(yùn)動(dòng)抗炎作用已取得廣泛共識(shí)，然而運(yùn)動(dòng)改善非酒精性脂肪肝（NAFLD）炎癥反應(yīng)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)機(jī)制尚不清楚。通過(guò)高脂飲食（HFD）建立肥胖相關(guān)的NALFD模型，以跑臺(tái)耐力訓(xùn)練為干預(yù)手段，監(jiān)測(cè)HFD引起的肝臟炎癥事件，并探討運(yùn)動(dòng)抗炎的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)機(jī)制。方法：Sprague-Dawley雄性大鼠80只，隨機(jī)分成正常飲食組（CON）、正常飲食運(yùn)動(dòng)組（CON + AET）、高脂飲食組（HFD）和高脂飲食運(yùn)動(dòng)組（HFD + AET）。8周訓(xùn)練結(jié)束后采用O油紅染色法觀(guān)察肝臟形態(tài)學(xué)改變;ELISA法測(cè)定肝臟炎癥標(biāo)志物蛋白濃度;Western blot測(cè)定內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)標(biāo)志蛋白及相關(guān)炎癥調(diào)控信號(hào)通路。結(jié)果：8周高脂飲食后，與對(duì)照組相比，模型動(dòng)物肝細(xì)胞脂滴數(shù)量顯著性增加;炎癥趨化因子（IL-6，IL-18，IL-1β和TNF-ɑ）濃度均顯著性升高;炎癥轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子NF-κB和AP1表達(dá)上調(diào)，炎癥通路ATF6，IRE1α-XBP1/IKK，PERK和IRE1α-eIF2α/JNK被激活;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)蛋白GRP78和CHOP表達(dá)明顯增加。相對(duì)地，運(yùn)動(dòng)干預(yù)可明顯減少肝臟組織脂滴數(shù)量，降低IL-18、IL-1β和TNF-ɑ濃度，失活炎癥通路蛋白及炎癥轉(zhuǎn)錄因子水平，下調(diào)GRP78、CHOP蛋白表達(dá)。結(jié)論：高脂飲食可引起大鼠肝臟內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)紊亂，激活炎癥相關(guān)信號(hào)通路，觸發(fā)炎癥反應(yīng);運(yùn)動(dòng)干預(yù)可有效改善HFD后炎癥事件;其中維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)及失活相關(guān)炎癥調(diào)節(jié)信號(hào)級(jí)聯(lián)是其內(nèi)在關(guān)鍵機(jī)制。

關(guān)鍵詞：高脂飲食;炎癥;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)/應(yīng)激;耐力訓(xùn)練

非酒精性脂肪肝病（NAFLD）已躍居慢性肝病首位，且發(fā)病“時(shí)間窗”呈現(xiàn)前移/年輕化趨勢(shì)，嚴(yán)重威脅著肥胖相關(guān)群體的健康[1]。NAFLD通常被認(rèn)為是代謝綜合征的肝臟組成部分，是由營(yíng)養(yǎng)素過(guò)度攝入引起的“代謝性炎癥”[2]。炎癥相關(guān)因子在肥胖相關(guān)胰島素抵抗的發(fā)展中起著核心作用，并與NASH進(jìn)展直接相關(guān)[3]。因此，減輕炎癥反應(yīng)是NAFLD治療的一個(gè)新方向。

缺血、鈣離子紊亂、氧化應(yīng)激、肥胖等因素引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)紊亂是（輕度持續(xù)性慢性）炎癥發(fā)生的重要病理機(jī)制[4]。研究顯示化學(xué)分子伴侶，如4-苯基丁酸鈉鹽、?；切苋パ跄懰嵬ㄟ^(guò)抑制內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，改善高脂飲食小鼠肝臟脂代謝紊亂及炎癥水平[5]。因此，維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)是實(shí)現(xiàn)NAFLD“細(xì)胞器”治療的重要思路。

作為一種廣譜“抗炎劑”，運(yùn)動(dòng)以多靶點(diǎn)、多途徑、療效確切、無(wú)副作用等特點(diǎn)日益受到關(guān)注和推崇。研究證實(shí)運(yùn)動(dòng)可以有效改善脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)和利用[7]，抑制線(xiàn)粒體相關(guān)的炎癥信號(hào)通路[6]等。運(yùn)動(dòng)對(duì)NAFLD內(nèi)質(zhì)網(wǎng)影響的研究主要集中在抑制肝臟細(xì)胞凋亡[8]，改善自噬[9]方面，而其對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)介導(dǎo)的炎癥事件的改善作用/機(jī)制則鮮有報(bào)道。

為研究運(yùn)動(dòng)對(duì)NAFLD的肝臟組織炎癥病理進(jìn)程的影響，本研究基于高脂飲食誘導(dǎo)建立肥胖相關(guān)的NAFLD大鼠模型，分別給予實(shí)驗(yàn)對(duì)象以高脂和標(biāo)準(zhǔn)飲食，同時(shí)進(jìn)行跑臺(tái)耐力訓(xùn)練干預(yù)。檢測(cè)不同分組動(dòng)物肝臟組織病理變化，炎癥標(biāo)志分子，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)炎癥信號(hào)通路的改變，初步探索運(yùn)動(dòng)抗炎的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)機(jī)制。為NAFLD在亞細(xì)胞水平的治療提供新思路，為其臨床運(yùn)動(dòng)防治提供應(yīng)用理論和實(shí)踐依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)試劑

抗核轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白-1（AP1），核轉(zhuǎn)錄因子kappa B（NF-κB），X盒結(jié)合蛋白（XBP）1，c-Jun氨基末端激酶（JNK）;磷酸化JNK;核因子κ-B激酶抑制劑（IKK）及磷酸化IKK購(gòu)自于Santa Cruz Biotechnology（Santa Cruz，CA，USA）;抗真核起始因子（eIF）2α，磷酸化p-IF2α，葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白（GRP）78，C/EBP環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子同源蛋白（CHOP）;甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH），羊抗兔和羊抗小鼠IgG（辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記）二抗由Cell Signaling Technology（Danvers，MA，USA）提供。ELISA試劑盒（卡爾文生物，蘇州）;PVDF膜，ECL發(fā)光液體（Millipore，MA，USA）;BCA蛋白定量試劑盒，顯影及定影液（Beyotime，北京）。其余常用實(shí)驗(yàn)藥品或試劑均由當(dāng)?shù)亓闶酃?yīng)商。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及NAFLD模型建立

Sprague-Dawley（SD）雄性大鼠80只購(gòu)自于復(fù)旦大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào)：SYXK滬2014-0029。8周齡，體重185 ～ 210 g;飼養(yǎng)環(huán)境：溫度：22℃～26℃;濕度：60%，分籠飼養(yǎng)（籠/8只）;晝夜光變化周期：12 h光照，12 h黑暗;適應(yīng)喂養(yǎng)期動(dòng)物自由飲食。之后隨機(jī)調(diào)整動(dòng)物飼養(yǎng)方案，動(dòng)物數(shù)量比為1 ∶ 1。具體飼養(yǎng)組分方案[10]參照見(jiàn)表1。

1.3 動(dòng)物分組及運(yùn)動(dòng)干預(yù)

正常飲食方案大鼠分為對(duì)照組（CON）和正常飲食運(yùn)動(dòng)干預(yù)組（CON + AET）;高脂飲食方案動(dòng)物分為高脂模型組（HFD）和高脂飲食運(yùn)動(dòng)干預(yù)組（HFD + AET）。每組20只。CON + AET和HFD + AET組進(jìn)行8周跑臺(tái)訓(xùn)練。耐力訓(xùn)練方案參照我們之前的研究方法[11]。簡(jiǎn)要如下：大鼠先進(jìn)行為期1周的適應(yīng)性訓(xùn)練（15 m/min;6 d/w）進(jìn)行動(dòng)物運(yùn)動(dòng)能力評(píng)估，剔除不善運(yùn)動(dòng)的動(dòng)物，之后進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。運(yùn)動(dòng)方案為：每周訓(xùn)練為6 d，跑臺(tái)訓(xùn)練時(shí)間為1 h，速度為20～25 m/min;訓(xùn)練時(shí)間在每天08：00～10：00，坡度為5°。終末做力竭運(yùn)動(dòng)進(jìn)行大鼠運(yùn)動(dòng)能力測(cè)試。

1.4 動(dòng)物處死及取材

8周干預(yù)結(jié)束后，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物禁食過(guò)夜，次日上午8：00麻醉（2%戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉）頸椎脫臼法處死，采集肝臟組織并置于液氮凍藏待測(cè)。模型構(gòu)建評(píng)價(jià)由專(zhuān)科醫(yī)生通過(guò)組織病理學(xué)切片進(jìn)行盲法判定。

1.5 動(dòng)物肝臟形態(tài)學(xué)觀(guān)察

隨機(jī)選取不同飲食分組動(dòng)物5只，處死后取出肝臟液氮凍存，-15℃恒溫條件下制作冰凍切片（厚度：10 μm）。油紅O脂類(lèi)染色法進(jìn)行肝組織脂滴分布檢測(cè)。簡(jiǎn)要如下：切片干燥后用50%乙醇清洗，油紅O染液（0.5 g油紅O;50%乙醇100 ml）作用8～10 min;50%乙醇分化后，進(jìn)行蘇木素細(xì)胞核復(fù)染，經(jīng)自來(lái)水返藍(lán)后封片。200×光鏡下隨機(jī)選取6個(gè)視野，Image-Pro Plus 5.0圖像處理和分析軟件進(jìn)行圖像的半定量分析，計(jì)算出視野內(nèi)平均脂滴光密度值（單位：AIOD.μm2），并用進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

1.6 炎癥標(biāo)志物蛋白濃度測(cè)定

肝臟組織的炎癥標(biāo)志物蛋白采用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒法檢測(cè)。操作步驟簡(jiǎn)要如下：1）勻漿樣本制備：隨機(jī)剪取適量肝臟放入EP管并置于冰上，加入生理鹽水后進(jìn)行超聲粉碎，離心10 min（3 000 rpm）并提取上清液;2）加樣：在預(yù)先做好標(biāo)記的樣品孔中依次加入10 ul待測(cè)樣品，40 ul稀釋液和100 ul HRP抗體，密封后于37 °C恒溫水浴溫育1 h;3）傾棄板孔液，加入工作液并排干（重復(fù)3 ～ 5次）;4）依次加入兩種底物溶液，避光溫育（37℃，15 min）;5）加入終止液，用熒光酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值并計(jì)算。

1.7 蛋白水平測(cè)定

樣品組織用Western和IP裂解緩沖液進(jìn)行裂解。組織勻漿在4℃下離心15 min，收集上清液，BCA蛋白檢測(cè)試劑盒（Pierce，No. 23225）測(cè)定蛋白濃度。等量蛋白樣品（20 μg）加入10%的SDS-PAGE凝膠上進(jìn)行垂直電泳進(jìn)行蛋白分離，之后轉(zhuǎn)移至PVDF膜并置于含5%脫脂牛奶的TBST緩沖液進(jìn)行封閉?？笰P1，P-JNK，JNK，XBP1（1 ∶ 2 000）;NF-κB，XBP1，p-IF2α，P-IKK，IKK（1 ∶ 1 000）;IF2α，GRP78，CHOP和GAPDH（1 ∶ 5 000）與對(duì)應(yīng)目標(biāo)蛋白4 °C孵育過(guò)夜后，再與對(duì)應(yīng)的二抗室溫下孵育（羊抗兔和羊抗小鼠IgG）1 h;PVDF膜經(jīng)TBST洗脫（15 min×3）后，用ECL發(fā)光法進(jìn)行蛋白水平測(cè)定。Quantity one（BIO-RED，USA）圖像處理軟件（建立高斯模型）測(cè)定圖像灰度值測(cè)定。

1.8 統(tǒng)計(jì)分析

所有數(shù)據(jù)均以平均值 ± SEM表示。統(tǒng)計(jì)分析采用單因素方差分析（Students t-test or ANOVA）。在所有比較中顯著性水平均設(shè)為P<0.05。數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析軟件為IBM SPSS for Windows 21.0，Graph Pad Software Prism 6.01用于實(shí)驗(yàn)結(jié)果作圖。

2 結(jié)果

2.1 不同飲食方案及運(yùn)動(dòng)干預(yù)后大鼠肝組織形態(tài)學(xué)變化

8周不同飲食及運(yùn)動(dòng)干預(yù)后，油紅O染色法進(jìn)行肝組織脂滴分布檢測(cè)。

圖1顯示，8周飲食及運(yùn)動(dòng)干預(yù)后安靜組大鼠肝細(xì)胞僅有少量脂滴，NAFLD動(dòng)物肝細(xì)胞脂滴顯著性增加，且與對(duì)照組相比顯著性增加（P<0.01）;相對(duì)地，運(yùn)動(dòng)干預(yù)后，與CON大鼠相比，模型組動(dòng)物肝臟組織脂滴數(shù)量明顯減少（P<0.05），盡管與安靜組相比仍處于較高水平。

肝臟對(duì)運(yùn)動(dòng)能力具有重要影響，且涉及多個(gè)方面，如能量合成、供給、乳酸清除等[12]。為了檢測(cè)NAFLD及運(yùn)動(dòng)對(duì)大鼠肝臟的影響，首先對(duì)大鼠的運(yùn)動(dòng)能力進(jìn)行了測(cè)定。如圖2A所示，HFD大鼠運(yùn)動(dòng)能力較對(duì)照組相比呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，盡管并不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。高脂飲食大鼠經(jīng)運(yùn)動(dòng)干預(yù)后，運(yùn)動(dòng)時(shí)間較HFD增加近17%（p<0.05）。炎癥因子結(jié)果（圖2B）表明，與同期對(duì)照組相比，HFD造成肝組織細(xì)胞炎癥趨化因子（IL-6，IL-18，IL-1β和TNF-ɑ）濃度均明顯升高（P<0.05）;耐力訓(xùn)練后，除IL-6無(wú)明顯變化外，IL-18，IL-1β和TNF-ɑ濃度較對(duì)照組均顯著性降低（P<0.05）。

2.3 不同分組動(dòng)物肝臟炎癥相關(guān)調(diào)節(jié)蛋白及其上游信號(hào)通路的變化

NF-κB是炎癥/趨化因子的重要調(diào)節(jié)蛋白，可高效誘導(dǎo)多種細(xì)胞因子，如IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α等的基因表達(dá);同時(shí)，NF-κB的激活也和氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)關(guān)系密切[13]。運(yùn)動(dòng)改善NAFLD大鼠炎癥因子水平，可能與其失活NF-κB蛋白有關(guān)。如圖3所示，與正常對(duì)照動(dòng)物相比，HFD可顯著增加NF-κB及AP1蛋白水平。新近研究證實(shí)XBP1，IKK，eIF2α三條信號(hào)通路參與了對(duì)NF-κB的調(diào)控作用[14]。然而，運(yùn)動(dòng)如何影響上述信號(hào)級(jí)聯(lián)發(fā)揮其抗炎作用尚不清楚。圖4蛋白印跡結(jié)果表明，HFD后參與NF-κB調(diào)控的信號(hào)通路eIF2α，IKK磷酸化水平升高，XBP1蛋白表達(dá)增加;經(jīng)AET干預(yù)后上述病理性改變均得到有效改善（eIF2α，IKK磷酸化降低）。此外，AP1的調(diào)控蛋白JNK呈現(xiàn)相似的變化趨勢(shì)。

3 分析與討論

本研究結(jié)果表明，HFD觸發(fā)大鼠肝臟炎癥事件，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)失衡及相關(guān)下游炎癥信號(hào)通路被激活;8周運(yùn)動(dòng)干預(yù)有效改善內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)紊亂，減輕炎癥反應(yīng)。

3.1 HFD引起炎癥反應(yīng)的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)機(jī)制

炎癥既是人體多種疾病的“共同土壤”，與胰島素抵抗（IR）、氧化應(yīng)激及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激關(guān)系密切?！俺醮未驌簟敝x異?？稍斐筛闻K脂肪積聚/變性，增加肝組織對(duì)炎癥的易感性[14]。本研究結(jié)果（圖1）表明，HFD引起模型動(dòng)物肝組織細(xì)胞脂滴數(shù)量顯著性增加。李軍漢研究顯示，8周高脂飲食方案引起模型動(dòng)物肝組織結(jié)構(gòu)紊亂，肝細(xì)胞脂肪變性顯著增加并產(chǎn)生大面積脂肪空泡，脂滴量明顯增加[15]。Xuan等研究提示8周高脂飲食造成大鼠肝臟組織脂質(zhì)大面積積聚[16]。提示，8周高脂飲食可成功復(fù)制NAFLD大鼠模型。然而，就目前研究來(lái)看，高脂飲食構(gòu)建NAFLD動(dòng)物病理模型尚存在較大差異。阮凌等指出16周高脂飼養(yǎng)后模型組動(dòng)物肝臟形態(tài)結(jié)構(gòu)異常，如肝小葉消失，脂肪空泡及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等[17]。趙軍[18]和FAKHOURY[19]等報(bào)道高脂飲食喂養(yǎng)大鼠16周后形成NAFLD模型。因此，NAFLD的模型構(gòu)建應(yīng)綜合考量（干預(yù)）飲食組分、時(shí)程及病理性評(píng)價(jià)指標(biāo)方能確立統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)。

盡管NALFD觸發(fā)炎癥的初期病理學(xué)機(jī)制目前尚不清楚，但胰島素抵抗（IR），氧化應(yīng)激及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)失衡被認(rèn)為是關(guān)鍵因素。在IR階段炎癥可激活I(lǐng)KKβ、蛋白激酶B等，誘導(dǎo)胰島素及其信號(hào)通路失活引起IR;后者反過(guò)來(lái)通過(guò)脂毒性加劇炎癥反應(yīng)[20]。“二次打擊”中大量游離脂肪酸（FFA）進(jìn)入線(xiàn)粒體后，脂肪酸（FA）合成甘油三酯引起的FA轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白活化Toll樣受體（TLR）4異常升高。Darkiane研究指出，TLR4在脂肪變性過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，降低其水平可有效提高肝臟脂肪酸氧化水平，防止甘油三酯積累[21]。此外，過(guò)量FA在線(xiàn)粒體β氧化時(shí)發(fā)生氧化應(yīng)激事件，后者激活炎癥通路絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）及IKKβ通路，促進(jìn)NF-κB及AP1的活化及核轉(zhuǎn)位;同時(shí)還通過(guò)正反饋機(jī)制提高NF-κB與DNA結(jié)合能力，增強(qiáng)NF-κB等的轉(zhuǎn)錄及合成[22]。G Panahi等研究顯示，在高糖引起的炎癥反應(yīng)中，高糖可觸發(fā)氧化應(yīng)激損傷，活化氧化應(yīng)激通路（JNK，P38，ERK）提高IKKα/IKKβ及NF-κB水平[23]。本研究（圖2B）結(jié)果證實(shí)，8周高脂飲食可誘導(dǎo)大鼠肝臟組織炎癥趨化因子（IL-6，IL-18、IL-1β和TNF-ɑ）濃度顯著性升高。圖3顯示模型組動(dòng)物AP1，NF-κB蛋白水平明顯增加，IKK磷酸化提高。多種因素可引起內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)失衡，如：鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)紊亂，氧化應(yīng)激等。由于線(xiàn)粒體—內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)偶聯(lián)（MAMs）（線(xiàn)粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)發(fā)生交互作用的功能“協(xié)作”平臺(tái)）及氧化應(yīng)激與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激之間的正反饋機(jī)制，線(xiàn)粒體功能紊亂會(huì)造成內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)失衡[24]，進(jìn)而引起蛋白質(zhì)毒性的風(fēng)險(xiǎn)及多種不利事件[25-26]。本研究（圖6）結(jié)果證實(shí)8周高脂飲食可誘導(dǎo)大鼠肝臟組織內(nèi)質(zhì)網(wǎng)標(biāo)志蛋白GRP78和CHOP表達(dá)增加，其下游通路蛋白ATF6，IREα及PERK磷酸化水平增加，這與之前的研究結(jié)論一致[27]。需要指出的是，與李軍漢等研究結(jié)論不同，本研究結(jié)果（圖5）顯示，PERK/eIF-2a和IRE-1/XBP-1通路蛋白總量并無(wú)明顯差異，但磷酸化水平升高。從功能學(xué)講，蛋白磷酸化水平是其功能的客觀(guān)反映。本研究及主流觀(guān)點(diǎn)[28-29]認(rèn)為，NAFLD后炎癥通路蛋白的磷酸化水平提高，而總量蛋白無(wú)顯著變化。

3.2 運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練維持NAFLD內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)抑制炎癥事件的相關(guān)機(jī)制

NAFLD被認(rèn)為是代謝的肝臟表現(xiàn)綜合征，且與肥胖及運(yùn)動(dòng)缺乏關(guān)系密切。生活方式干預(yù)，如：飲食改良誘導(dǎo)減肥和運(yùn)動(dòng)可有效改善NAFLD代謝功能紊亂及其特定的組織學(xué)特征[12]。本研究結(jié)果（圖1）也顯示運(yùn)動(dòng)干預(yù)后實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝臟組織脂滴量較模型組動(dòng)物顯著性降低;訓(xùn)練后炎癥指標(biāo)（圖2B）得到顯著性改善（IL-18、IL-1β和TNF-ɑ濃度顯著性降低）。

運(yùn)動(dòng)改善NAFLD后炎癥的研究國(guó)內(nèi)外均有報(bào)道[7，30]，主要集中在失活炎癥信號(hào)通路及抑制關(guān)鍵炎癥因子方面。Gabrielle da Luz指出游泳訓(xùn)練減少NAFLD大鼠脂肪細(xì)胞及肝臟組織炎癥分子，減少內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，如降低PERK和eIF2a磷酸化水平等[31]。Passos E研究表明，運(yùn)動(dòng)能夠降低高脂飲食大鼠ERK和JNK磷酸化水平[32]。高珊珊的研究表明，運(yùn)動(dòng)影響脂聯(lián)素及其受體后AMPKα、PPARα信號(hào)傳導(dǎo)[33]。本研究結(jié)果（圖5）證實(shí)運(yùn)動(dòng)可有效抑制炎癥信號(hào)通路PERK-eIF2α，IRE1α及ATF6α的激活。Isabel Rada等研究顯示，運(yùn)動(dòng)能夠下調(diào)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物肝臟TLR2和TLR4蛋白水平，抑制NF-κB通路及細(xì)胞因子水平[34]。Linden，M A等研究表明不同運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度均能降低NAFLD動(dòng)物M1巨噬細(xì)胞極化標(biāo)志蛋白（IL-1β）[35]。Kawanishi N等證實(shí)，16周運(yùn)動(dòng)干預(yù)后，肝臟炎癥指標(biāo)TNF-α及巨噬細(xì)胞浸潤(rùn)減少[36]。需要指出的是，運(yùn)動(dòng)對(duì)NAFLD影響存在運(yùn)動(dòng)方式的差異性。Ryuki Hashida指出阻抗訓(xùn)練比有氧訓(xùn)練更易改善NAFLD病人的心血管健康水平[37]。另外，運(yùn)動(dòng)改善其他細(xì)胞器如線(xiàn)粒體功能發(fā)揮抗炎效應(yīng)也有報(bào)道。我們之前的研究證實(shí)，運(yùn)動(dòng)能夠激活多種信號(hào)通路改善線(xiàn)粒體功能[38]。劉倩倩指出，有氧運(yùn)動(dòng)通過(guò)提高肝臟細(xì)胞內(nèi)線(xiàn)粒體的數(shù)量、維持形態(tài)結(jié)構(gòu)、功能，改善模型動(dòng)物肝臟脂代謝紊亂[6]。此外，運(yùn)動(dòng)改善內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相關(guān)通路[30，39，8]可能部分發(fā)揮了抗炎作用。

運(yùn)動(dòng)抑制NAFLD炎癥機(jī)制可能涉及到以下三個(gè)方面：1）阻斷“首次打擊”期間IR與炎癥的正反饋效應(yīng)。我們證實(shí)[40]運(yùn)動(dòng)可有效提高胰島素受體磷酸化水平，活化葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白及生存通路，提高胰島素敏感性，從而降低肝臟對(duì)炎癥的易感性。2）減輕“二次打擊”時(shí)的線(xiàn)粒體功能紊亂。運(yùn)動(dòng)通過(guò)提高線(xiàn)粒體增殖，改善FFA水平，降低氧化應(yīng)激損傷，抑制炎癥因子的ERS激活效應(yīng)[41]。3）維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)。運(yùn)動(dòng)可能通過(guò)改善線(xiàn)粒體與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的交互作用維持內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)，盡管運(yùn)動(dòng)對(duì)MAMs的影響機(jī)制尚不清楚[42]。此外，新近研究指出GLP-1受體激動(dòng)劑改善脂肪肝內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激[43]，運(yùn)動(dòng)改善內(nèi)質(zhì)網(wǎng)紊亂是否也發(fā)揮了類(lèi)似受體激動(dòng)劑的效應(yīng)需要進(jìn)一步研究。

綜上，NAFLD觸發(fā)肝組織炎癥反應(yīng)。其中，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)紊亂及相關(guān)炎癥通路/因子的激活是該事件的關(guān)鍵機(jī)制。耐力訓(xùn)練通過(guò)影響內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)調(diào)控機(jī)制實(shí)現(xiàn)對(duì)炎癥事件的“細(xì)胞器”治療。

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