cobas s201核酸混樣檢測(cè)系統(tǒng)性能確認(rèn)研究

侯云 馮秋霞 楊忠思 青島市中心血站 檢驗(yàn)科 （山東 青島 266071）

內(nèi)容提要： 目的：確認(rèn)cobas s201核酸檢測(cè)混樣系統(tǒng)在使用前，其檢測(cè)性能是否滿足血液篩查的要求。方法：對(duì)cobas s201檢測(cè)病毒學(xué)標(biāo)志進(jìn)行符合率、檢測(cè)限、靈敏度和特異性驗(yàn)證。結(jié)果：cobas s201檢測(cè)系統(tǒng)符合率驗(yàn)證合格；其HBV、HCV、HIV-1 95%檢出限分別為2.08IU/mL、9.17 U/mL、25IU/mL；其靈敏度和特異性結(jié)果為“通過(guò)”。結(jié)論：cobas s201核酸檢測(cè)系統(tǒng)的性能驗(yàn)證符合要求，可以滿足血站血液篩查需求。

《血站技術(shù)操作規(guī)程（2015版）》規(guī)定血液篩查檢測(cè)方法需要血清學(xué)檢測(cè)的同時(shí)進(jìn)行病毒核酸檢測(cè)[1]，我站于2010年作為衛(wèi)生部血站核酸檢測(cè)試點(diǎn)單位，開始使用核酸混檢系統(tǒng)cobas s201儀器對(duì)獻(xiàn)血者標(biāo)本進(jìn)行病毒核酸檢測(cè)，以降低經(jīng)輸血傳播疾病的風(fēng)險(xiǎn)。本文就cobas s201核酸檢測(cè)儀器的性能確認(rèn)方法進(jìn)行探討，確認(rèn)其性能是否可以滿足血液篩查的要求。

1.材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

①陰性標(biāo)本：將酶免和核酸檢測(cè)結(jié)果是合格的標(biāo)本進(jìn)行匯總，作為陰性標(biāo)本。②陽(yáng)性標(biāo)本：使用北京康徹思坦公司生產(chǎn)的HBV DNA質(zhì)控品（100IU/mL）、HCV RNA質(zhì)控品（500 IU/mL）HIV-1 RNA質(zhì)控品（1000IU/mL）。③脂血、溶血標(biāo)本：重度脂血標(biāo)本為甘油三酯大于6.3mmol/L，因脂血報(bào)廢的其他檢測(cè)項(xiàng)目均合格的血漿。溶血標(biāo)本為血紅蛋白含量約為5000mg/L，將不足量報(bào)廢的血液標(biāo)本在-80?C下冷凍10min制得，酶免和核酸檢測(cè)合格。

1.2 儀器與試劑

Cobas s201核酸系統(tǒng)（美國(guó)羅氏），cobas TaqScreen MPX試劑盒（美國(guó)羅氏，批號(hào)324501），cobas TaqScreen MPX質(zhì)控品（美國(guó)羅氏，批號(hào)：326265）。

1.3 方法

1.3.1 符合率驗(yàn)證。以參加衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心的室間質(zhì)評(píng)數(shù)據(jù)分析，成績(jī)?cè)?0%以上則認(rèn)為該項(xiàng)目的正確度符合要求。

1.3.2 檢出限驗(yàn)證。將病毒質(zhì)控品用陰性血漿進(jìn)行倍比稀釋，HBV濃度分別為：10IU/mL、5IU/mL、2.5IU/mL、1.25IU/mL、0.60IU/mL；HCV濃度分別為50IU/mL、25IU/mL、12.5IU/mL、6.25IU/mL、3.00IU/mL；HIV-1濃度分別為100IU/mL、50IU/mL、25IU/mL、12.5IU/mL、6.25IU/mL。每個(gè)樣本重復(fù)實(shí)驗(yàn)10次，使用統(tǒng)計(jì)軟件分析該系統(tǒng)對(duì)HBV、HCV、HIV-1的95%檢測(cè)限及置信區(qū)間。

1.3.3 靈敏度和特異性驗(yàn)證。計(jì)算本實(shí)驗(yàn)室參加衛(wèi)生部臨檢中心室間質(zhì)評(píng)的40個(gè)標(biāo)本的對(duì)比結(jié)果，將結(jié)果輸入表1通過(guò)公式計(jì)算各項(xiàng)性能指標(biāo)。

1.3.4 統(tǒng)計(jì)方法。應(yīng)用SPSS19.0軟件計(jì)算該系統(tǒng)分析物95%檢出限及置信區(qū)間。

2.結(jié)果

2.1 符合率驗(yàn)證結(jié)果

本實(shí)驗(yàn)以最近4次參加的衛(wèi)生部臨檢中心室間質(zhì)評(píng)成績(jī)100%，認(rèn)為實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證合格。

2.2 檢出限驗(yàn)證結(jié)果

HBV、HCV、HIV-1 95%檢出限分別2.08IU/mL、9.17 U/mL、25IU/mL，其中HBV、HIV-1 95%檢出限低于廠家提供的檢出限，而HCV 95%檢出限高于廠家（6.8IU/mL）提供的檢出限。

2.3 靈敏度和特異性驗(yàn)證結(jié)果

通過(guò)公式計(jì)算核酸檢測(cè)結(jié)果靈敏度和特異性均為100%，可判定該項(xiàng)目靈敏度和特異性驗(yàn)證結(jié)果為“通過(guò)”（見(jiàn)表1）。

3.討論

病毒核酸檢測(cè)是從基因水平進(jìn)行血液篩查的方法，相較于血清學(xué)檢測(cè)，有更高的特異性和靈敏性，其可檢測(cè)出血液標(biāo)本中極低含量的病毒，大大縮短了病毒檢測(cè)的“窗口期”[2]。Cobas s201核酸檢測(cè)儀器的混樣系統(tǒng)、提取、擴(kuò)增的各個(gè)環(huán)節(jié)需要儀器的自動(dòng)化完成，各個(gè)環(huán)節(jié)人為干擾因素少，故儀器的檢測(cè)性能直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性[3]。本文通過(guò)對(duì)Cobas s201核酸儀器的符合率，檢出限，靈敏度和特異性，以及抗干擾能力等參數(shù)進(jìn)行性能方面的探討。

表1. 靈敏度和特異性驗(yàn)證公式

檢出限的驗(yàn)證，檢出限指檢測(cè)儀器能檢測(cè)到的分析物的最小含量或最低濃度。目前核酸系統(tǒng)驗(yàn)證方法多是購(gòu)買適合本實(shí)驗(yàn)室儀器檢測(cè)的血清盤，統(tǒng)計(jì)分析檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)該血清盤的檢出率。姚鳳蘭等用此方法對(duì)Procleix Ultrio Assay核酸檢測(cè)系統(tǒng)的檢出限進(jìn)行驗(yàn)證[4]。血清盤驗(yàn)證方法可以準(zhǔn)確計(jì)算出95%最低分析物檢測(cè)值，可以與廠家說(shuō)明書上的數(shù)據(jù)進(jìn)行比較，并可以直觀的判定該檢出限是否在該實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)系統(tǒng)性能判定的范圍內(nèi)。本實(shí)驗(yàn)室采取先對(duì)病毒質(zhì)控品進(jìn)行倍比稀釋，再依據(jù)初步檢測(cè)結(jié)果選取包含反應(yīng)性和非反應(yīng)性樣本的濃度范圍，一共五個(gè)濃度的標(biāo)本，分別檢測(cè)10次，最后應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件分析該檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)分析物的95%的檢出限。此方法可以很大程度上減少檢測(cè)試劑的浪費(fèi)，同時(shí)可以計(jì)算出95%最低檢測(cè)限數(shù)值，使其與廠家提供的數(shù)值有可比性。結(jié)果顯示該系HBV、HIV-1低于廠家的檢出限，而HCV高于廠家給出的檢出限，差異的原因可能是所選標(biāo)本株，或是標(biāo)本驗(yàn)證次數(shù)少引起的偏差，其他實(shí)驗(yàn)室同樣有類似的偏差[4,5]。

符合率的驗(yàn)證是為了確認(rèn)本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與真值的一致性，Cobas s201檢測(cè)系統(tǒng)是混檢系統(tǒng)，混檢結(jié)果為反應(yīng)性時(shí)要進(jìn)一步拆分確定哪一個(gè)標(biāo)本為陽(yáng)性標(biāo)本。本實(shí)驗(yàn)以最近4次參加的衛(wèi)生部臨檢中心室間質(zhì)評(píng)成績(jī)100%，認(rèn)為實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證合格。靈敏度和特異性驗(yàn)證是通過(guò)檢測(cè)數(shù)據(jù)與賦值材料數(shù)據(jù)的對(duì)比，驗(yàn)證本實(shí)驗(yàn)室定性實(shí)驗(yàn)的敏感度和特異性為“通過(guò)”。

本實(shí)驗(yàn)分別從符合率、檢出限、靈敏度和特異性等方面來(lái)驗(yàn)證Cobas s201檢測(cè)系統(tǒng)的檢測(cè)性能，結(jié)果顯示均符合要求，滿足我站血液篩查需求。