孕晚期大鼠暴露于七氟醚對(duì)其子代神經(jīng)發(fā)育潛在毒性的脂質(zhì)組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)研究

金 憶 胡小雪2 楊澤勇

(1上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬國(guó)際和平婦幼保健院麻醉科-上海市胚胎源性疾病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 上海 200030;2上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬光華中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院麻醉科 上海 200052)

孕婦反復(fù)或長(zhǎng)期暴露于麻醉藥物可能對(duì)發(fā)育中的嬰兒產(chǎn)生神經(jīng)毒性,但其機(jī)制仍不清楚[1]。七氟醚是臨床上常用的吸入性麻醉劑,使用方便、麻醉效果佳、呼吸道刺激小,是目前臨床應(yīng)用最為廣泛的吸入麻醉藥物。七氟醚可能會(huì)對(duì)大腦發(fā)育產(chǎn)生影響,從而引起行為障礙,該過(guò)程的病理機(jī)制可能涉及氧化應(yīng)激、神經(jīng)細(xì)胞凋亡、神經(jīng)炎癥、突觸性質(zhì)改變等。我國(guó)每年有超過(guò)1 000萬(wàn)孕婦接受麻醉,懷孕期間重復(fù)或長(zhǎng)期麻醉藥物暴露會(huì)導(dǎo)致發(fā)育神經(jīng)的損害和子代的認(rèn)知功能紊亂。長(zhǎng)時(shí)間吸入麻醉對(duì)腦部神經(jīng)突觸有損傷作用[2],特別是對(duì)未成熟的神經(jīng)元會(huì)導(dǎo)致明顯的神經(jīng)損害[3-4]。長(zhǎng)時(shí)間接觸高濃度七氟醚會(huì)改變新生大腦中的葡萄糖和氨基酸代謝過(guò)程及細(xì)胞內(nèi)的抗氧化劑與滲透物質(zhì)系統(tǒng)[5],降低脂質(zhì)中磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸和磷脂酰甘油,并增加4-羥基非烯醇[6],而磷脂酰絲氨酸參與神經(jīng)元存活、神經(jīng)突起生長(zhǎng)和突觸形成有關(guān)的信號(hào)通路[7-10]。已知脂質(zhì)的異常變化可能會(huì)打破磷脂的平衡,大部分吸入麻醉藥都是脂溶性的,易透過(guò)胎盤屏障。探討藥物誘導(dǎo)損傷模型中新的生物標(biāo)志物,特別是從腦和血清樣本中識(shí)別出新的生物標(biāo)志物,可能有助于早期發(fā)現(xiàn)麻醉藥物暴露的潛在神經(jīng)毒性。目前對(duì)于吸入七氟醚后子代神經(jīng)發(fā)育的影響存在爭(zhēng)議,孕期大鼠持續(xù)吸入七氟醚后,有些子代神經(jīng)細(xì)胞發(fā)生了凋亡和行為學(xué)的改變[11],但也有一些實(shí)驗(yàn)為陰性結(jié)果。因此,母代孕晚期接觸七氟醚是否會(huì)引起子代神經(jīng)發(fā)育的障礙需要進(jìn)一步的科學(xué)探索。本研究首次通過(guò)脂質(zhì)組學(xué)和轉(zhuǎn)錄組學(xué)探討七氟醚對(duì)子代發(fā)育神經(jīng)的潛在毒性機(jī)制。利用超高效液相色譜質(zhì)譜(ultra performance liquid chromatography/time-of-flight mass spectrometry,UPLC/MS)技術(shù)從脂質(zhì)組學(xué)方面來(lái)明確哪一種脂質(zhì)代謝參與神經(jīng)潛在損傷的發(fā)生,通過(guò)RNA-Seq進(jìn)一步篩選差異表達(dá)基因,并使用RT-qPCR在損傷模型上進(jìn)一步驗(yàn)證損傷過(guò)程中對(duì)應(yīng)基因的變化。

材料和方法

麻醉和試劑動(dòng)物研究(包括大鼠安樂(lè)死程序)按照上海交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心標(biāo)準(zhǔn)管理規(guī)程執(zhí)行(編號(hào):SMP-ADM-000-A),我校實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心的許可證號(hào)(編號(hào):A 2016077),遵循國(guó)際實(shí)驗(yàn)動(dòng)物評(píng)估及認(rèn)可委員會(huì)(AAALAC)和動(dòng)物保護(hù)和使用機(jī)構(gòu)委員會(huì)(IACUC)的規(guī)定進(jìn)行動(dòng)物護(hù)理。

孕15～17天的SD大鼠(體質(zhì)量400～500 g)購(gòu)自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司,無(wú)病毒、細(xì)菌和寄生蟲(chóng)病原體。將孕大鼠單獨(dú)放入標(biāo)準(zhǔn)箱房中飼養(yǎng),喂食顆粒飼料(江蘇醫(yī)藥生物工程有限公司)和高溫殺菌純凈水。飼養(yǎng)條件:溫度(23±2)℃,相對(duì)濕度50%±15%,12 h光暗輪替,空氣壓力100 kPa,15次/h空氣完全過(guò)濾一次。試劑:HPLC級(jí)乙腈和甲酸(美國(guó)Merck公司),TOF-MS校準(zhǔn)液(美國(guó)AB SCIEX公司),超純水來(lái)源于Milli-Q純凈水系統(tǒng)(美國(guó)米利波公司)。

實(shí)驗(yàn)分組將28只孕大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(S組)和對(duì)照組(C組),每組14只。飼養(yǎng)1～3天后,S組孕大鼠在麻醉箱內(nèi)接受2%七氟醚+98%氧氣6 h;C組孕大鼠在麻醉箱內(nèi)以相同的流速吸入100%氧氣6 h,總氣體流量為400 mL/min,用氣體分析儀(德國(guó)Drager公司)測(cè)定氧、二氧化碳和七氟醚的濃度。七氟醚麻醉終止后,每組隨機(jī)取8只孕大鼠,腹主動(dòng)脈血樣采集40 μL,用I-STAT 1分析儀(MN:300-G,美國(guó)Abbott Park公司)分析血?dú)狻Ｆ溆嘣写笫蠡仫曫B(yǎng)箱內(nèi)等待分娩,S組子代43只,C組子代48只,每組隨機(jī)抽出12只出生后7天的子代大鼠,七氟醚麻醉,2組新生大鼠斷頭后采集血清標(biāo)本,即刻在冰面上取出海馬和皮層組織。血清標(biāo)本、海馬及皮層組織于-80 ℃冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>

樣品制備和UPLC/TOF-MS12 000*g離心(4 ℃) 10 min獲得子代血清樣本,取10 μL轉(zhuǎn)移到無(wú)菌的EP管中,加入10 μL優(yōu)質(zhì)等級(jí)純水及5 μL異丙醇(10 μg/mL),用40 μL冷異丙醇+1 %甲酸(v/v)進(jìn)行旋渦混合,沉淀蛋白質(zhì)。-20 ℃靜置20 min,13 000*g離心10 min,取10 μL上清液轉(zhuǎn)移到玻璃式HPLC小瓶(96孔板)中進(jìn)行衍生化,采用HPLC-MS聯(lián)用技術(shù)進(jìn)行分析。用電噴霧電離(electrospray ionization,ESI)在正離子模式下進(jìn)行LC-MS檢測(cè),用多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)(multiple reaction monitoring,MRM)對(duì)每種化合物進(jìn)行定量分析。色譜分析采用ACQUITY超高效液相色譜系統(tǒng)(美國(guó)Waters公司)分析,水同步高清晰度飛行時(shí)間質(zhì)譜(TOF-MS)系統(tǒng)(美國(guó)Waters公司)陰極ESI源在UPLC上以正負(fù)模式顯示,IDA模型用于正負(fù)離子模式,由TOF-測(cè)量掃描(m/z=100)和緊隨6次TOF-MS/MS掃描(m/z=100～1 500)組成,累積時(shí)間分別為0.08 s和0.1 s,以確保測(cè)量質(zhì)量的精確性。

PLS-DA分析在代謝組學(xué)分析之前,使用Marker View軟件(美國(guó)AB SCIEX公司)對(duì)原始數(shù)據(jù)進(jìn)行預(yù)處理,并將其歸一化為總面積,以糾正每個(gè)樣本的濃度偏差。采用偏最小二乘判別分析(PLS-DA)方法進(jìn)行檢測(cè),比較樣本間差異,確定關(guān)鍵化合物,并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。獲取包含樣本變量的數(shù)據(jù)矩陣,以分析下一個(gè)代謝物。在PLS-DA模型中可變影響的化合物預(yù)測(cè)值(Vip)>1.0和P<0.05獲得潛在生物標(biāo)記物[12]。

HE染色對(duì)6只新生大鼠的海馬和大腦皮質(zhì)神經(jīng)元進(jìn)行HE染色,檢測(cè)細(xì)胞凋亡。切片去蠟,水合,HE染色。切片脫水、包埋,400倍顯微鏡(日本奧林巴斯公司)下計(jì)數(shù)CA1錐體細(xì)胞數(shù)目并拍照,僅包括細(xì)胞核和核仁明顯的細(xì)胞。

TUNEL染色將6只新生大鼠海馬和皮層組織制成冰凍切片,浸泡在含3% H2O2的PBS中,消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶反應(yīng)。PBS(pH=7.4)洗滌3次、每次5 min,加入20 % FBS和3 %FBS蛋白15 min。加入與熒光素連接的TUNEL反應(yīng)液,切片置于37 ℃加濕箱中1 h,PBS洗滌3次,每次5 min。切片在室溫下與終止液反應(yīng)10 min,在37 ℃下與抗地高辛過(guò)氧化物酶抗體反應(yīng)30 min,PBS洗滌3次,每次5 min。再用DAB(3,3’-二氨基聯(lián)苯胺)顯影,二甲苯透明后用中性樹(shù)脂密封。切片置于熒光顯微鏡下拍照,并觀察TUNEL陽(yáng)性染色結(jié)果。

RNA提取將6只新生大鼠的皮層組織塊與少量液氮混合后迅速研磨,重復(fù)3次。將皮層組織細(xì)胞培養(yǎng)皿置于冰上,加入Trizol裂解5～10 min。4 ℃下12 000*g離心15 min,吸取上層水相,移至另一離心管中,按Trizol∶異戊醇=1∶0.6 (v/v)混勻,室溫放置5～10 min。4 ℃下12 000*g離心10 min,棄上清,按Trizol∶75 %乙醇=1∶1(v/v)溫和振蕩,懸浮沉淀。室溫晾干或真空干燥5～10 min,檢測(cè)260 nm下吸光度(D)值,定量RNA濃度。

RNA-seq實(shí)驗(yàn)流程提取的總 RNA 樣品經(jīng)瓊脂糖電泳和 Nanodrop 質(zhì)檢及定量后,用 oligo(dT)磁珠富集 mRNA,若 RNA 為降解樣品或?yàn)樵藰悠穭t直接用 rRNA 去除試劑盒進(jìn)行處理;RNA 測(cè)序文庫(kù)均由試劑盒完成,包括 RNA 片段化后用隨機(jī)引物反轉(zhuǎn)生成第一鏈 cDNA,加入 dUTP 合成第二鏈 cDNA,雙鏈 cDNA 末端修復(fù)加 A 后連接 Illumina 匹配接頭,PCR 擴(kuò)增得到最終文庫(kù);構(gòu)建好的文庫(kù)用 Agilent 2100進(jìn)行質(zhì)檢,并由 qPCR 方法進(jìn)行文庫(kù)定量,使用 Illumina Hiseq 4000 測(cè)序儀進(jìn)行測(cè)序。

結(jié) 果

動(dòng)脈血?dú)夥治鰹橄脱跹Y或二氧化碳蓄積等因素干擾,對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物進(jìn)行動(dòng)脈血?dú)夥治?表1),血?dú)夥治鼋Y(jié)果與氧和二氧化碳交換相關(guān)的各項(xiàng)數(shù)據(jù)都在正常安全范圍之內(nèi),兩組間pH值和動(dòng)脈血二氧化碳的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。S組大鼠僅受七氟醚的影響而不受七氟醚麻醉所致動(dòng)脈血?dú)獾挠绊?因此動(dòng)物模型建成。

UPLC/TOF-MS分析七氟醚誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性UPLC/TOF-MS分析分別采用正電離和負(fù)電離兩種模式,獲得代謝組學(xué)圖譜(圖1)。分別對(duì)每組6個(gè)QC樣品進(jìn)行測(cè)定,在負(fù)離子和正離子模式下產(chǎn)生10個(gè)生物標(biāo)記的保留時(shí)間和6個(gè)共峰的峰面積配對(duì)保留時(shí)間m/z(表2)。保留時(shí)間的RSD<3.71%,峰面積的RSD為3.62%～38.58%。

表1 兩組孕大鼠實(shí)驗(yàn)后動(dòng)脈血?dú)夥治霰容^Tab 1 Arterial blood gas analysis between two groups

C group:Control group;S group:Sevoflurane prenatal exposure group.pH:Potential of hydrogen;PaCO2:Partial pressure of carbon dioxide in arterial blood;HCO3:Carbonic acid hydrogen radical;BE:Residual value of blood alkali;SaO2:Degree of blood oxygen saturation.

偏最小二乘判別分析(PLS-DA)兩組采用UPLC/TOF-MS樣品剖面進(jìn)行主成分分析(principal component analysis,PCA)和PLS-DA檢測(cè)。在正離子模式下獲得更好的分離效果(圖2)。采用3個(gè)參數(shù)對(duì)P的性能進(jìn)行評(píng)價(jià)。LS-DA模型在正離子模式下:R2X=0.665,R2Y=0.996,Q2=0.962,因此選擇PLS-DA模型。

表2 孕晚期暴露于七氟醚誘導(dǎo)神經(jīng)毒性的新生大鼠脂質(zhì)中的標(biāo)記物、通路和疾病Tab 2 Sevoflurane induces neurotoxicity potential markers and associated pathways or diseases in lipids of newborn rats in late pregnancy

RT:Retention time (min);m/z:Mass-to-charge ratio.The independentttest was verified by Graph Prism 5.0 in serum of group S and group C.P<0.05.↑:Up regulation.↓:Down regulation.

A:ESI positive mode;B:ESI negative mode.The UPLC/TOF-MS analysis was performed using an Acquity TMUPLC system coupled to a SynaptTMG2 high-definition time-of-flight mass spectrometry system with ESI positive and negative modes.In both positive and negative ion modes,basic peak chromatogram profiles displayed no difference between S and C groups.ESI:Electrospray ionization.

圖1 基于UPLC/TOF-MS分析新生大鼠血清陽(yáng)性和陰性ESI的典型基峰強(qiáng)度色譜圖
Fig 1 Typical base peak intensity chromatogram of the rat serum obtained in ESI positive andnegative mode based on UPLC/TOF-MS analysis

七氟醚治療脂質(zhì)代謝途徑分析用Metabo Analyst(http://www.metaboanalyst.ca) 進(jìn)一步分析鑒定出的生物標(biāo)志物(圖3)。發(fā)現(xiàn)6條代謝途徑:甘油磷脂代謝、糖基磷脂酰肌醇(glycosylphos phatidylinositol,GPI)-錨定生物合成、亞油酸代謝、α-亞麻酸代謝,鞘脂代謝和花生四烯酸代謝,其中甘油磷脂代謝是最重要的代謝途徑。

HE染色和TUNEL染色TUNEL染色分析各子代大鼠海馬和大腦皮質(zhì)神經(jīng)元凋亡(圖4A、4B)。S組染色質(zhì)致密、深染,形成致密團(tuán)塊,HE染色的組織學(xué)切片中可能出現(xiàn)斷裂。細(xì)胞體積縮小,胞漿致密,嗜酸性。HE染色和TUNEL染色結(jié)果顯示兩組細(xì)胞凋亡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

C:PLS-DA in negative ion mode.S:PLS-DA in positive ion mode.

圖2 新生大鼠血清PLS-DA分析圖
Fig 2 The serum of neonatal rats analyzed by PLS-DA

RNA-seq技術(shù)利用RNA-seq技術(shù)對(duì)S組和C組試驗(yàn)前后轉(zhuǎn)錄本中的差異表達(dá)基因進(jìn)行全面分析(圖5),Vcan基因確實(shí)有表達(dá)上調(diào)的趨勢(shì),兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,并發(fā)現(xiàn)相關(guān)差異表達(dá)顯著基因的通路(圖6):紅色為上調(diào),綠色為下調(diào),RT-qPCR驗(yàn)證Vcan基因表達(dá)上調(diào)明顯。

Pathway analysis on biomarkers of sevoflurane-induced neurogenerative disease model.All matched pathways were acquired according toPvalues from pathway enrichment analysis and pathway impact values from pathway topology analysis,using pathway library of Rattus norvegicus (rat).A:Glycerophospholipid metabolism;B:Glycosylphos phatidylinositol (GPI)-anchor biosynthesis Linoleic acid metabolism;C:Alpha-linolenic acid metabolism;D:Sphingolipid metabolism;E:Arachidonic acid metabolism.

圖3 七氟醚誘導(dǎo)神經(jīng)退行性病變疾病模型生物標(biāo)志物的通路分析
Fig 3 The pathway analysis of biological markers of theneurodegeneration disease model induced by sevoflurane

The experiment was repeated 3 times.Apoptosis in hippocampus and cerebral cortex was detected by TUNEL and HE staining.Blank:Blank group;Control:Control group;Hippocampus:Hippocampus group;Cortex:Cortex group.A and B:The black arrows indicate apoptotic cells.Observation of HE and TUNEL staining for the hippocampus and cerebral cortex tissue in morphological changes in each group (scale bar=20 μm).C and D:The statistical analysis of neural cell apoptosis was detected by TUNEL and HE staining from hippocampi and cerebral cortex tissue of each offspring rat.

圖4 各組海馬和大腦皮層組織HE染色和TUNEL染色的形態(tài)變化(*400)
Fig 4 HE and TUNEL staining for the hippocampus and cerebral cortex tissue in morphological changes of each group (*400)

A:The change ofVcangene by RT-PCR;B:The melting point curve for drawing;C:The expansion regionVcangene.D:As the standard curve.

圖5Vcan基因RT-PCR變化及熔融和擴(kuò)增曲線
Fig 5Vcangene PCR RT-PCR changes,melting and amplification curves

討 論

本研究基于脂質(zhì)組學(xué),在七氟醚誘導(dǎo)子代潛在神經(jīng)損傷的過(guò)程中,發(fā)現(xiàn)6種代謝途徑,包括甘油磷脂代謝途徑、GPI-錨定生物合成、亞油酸代謝、α-亞麻酸代謝、鞘脂代謝和花生四烯酸代謝,其中甘油磷脂代謝是最重要的代謝途徑。脂質(zhì)代謝的改變被認(rèn)為是導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的關(guān)鍵因素[13],血脂異常與阿爾茨海默癥、帕金森癥和亨廷頓癥等疾病有關(guān)。吸入麻醉藥異氟醚低濃度時(shí)表現(xiàn)為神經(jīng)保護(hù),高濃度時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[14]。母體妊娠過(guò)程中暴露于七氟醚可能會(huì)對(duì)其后代的神經(jīng)發(fā)育產(chǎn)生風(fēng)險(xiǎn)[3]。本研究中,MetaboAnalyst系統(tǒng)用于進(jìn)一步分析已鑒定的生物標(biāo)志物,在S組中發(fā)現(xiàn)潛在的內(nèi)源性代謝產(chǎn)物甘油磷脂和鞘磷脂。將以上3種方法與穩(wěn)定同位素標(biāo)記相結(jié)合,可用于分析脂類代謝(脂肪酸、甘油磷脂和鞘脂代謝)[15]。

甘油磷脂是參與哺乳動(dòng)物細(xì)胞膜中的主要脂類。在許多神經(jīng)退行性疾病中磷脂酰膽堿穩(wěn)態(tài)被破壞[16],當(dāng)溶血磷脂酰膽堿水平升高,可導(dǎo)致神經(jīng)鞘脫髓鞘及不同程度的軸突變性[17]。細(xì)胞內(nèi)磷脂酰膽堿含量減少,可能有助于預(yù)防或治療阿爾茨海默癥[18],在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中磷脂穩(wěn)態(tài)破壞后,磷脂失衡可導(dǎo)致許多神經(jīng)疾病。

鞘脂代謝改變最終導(dǎo)致神經(jīng)損傷。抑制PKC的溶血磷脂會(huì)產(chǎn)生神經(jīng)毒性,而且這些脂類會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)的變化,特別是細(xì)胞膜上脂肪通道的功能改變[19]。膜脂(如神經(jīng)節(jié)苷脂和鞘脂)與可溶性Aβ和不溶性形式相互作用[20-22],并影響Aβ神經(jīng)毒性。鞘磷脂是由游離鞘氨醇基及其磷酸鹽、神經(jīng)酰胺、鞘氨酰肌醇和復(fù)雜的鞘磷脂組成的一類不同的脂質(zhì)群類,可在神經(jīng)疾病等各種疾病中檢測(cè)到這類脂質(zhì)群[23-25]。因此,鞘脂代謝與神經(jīng)系統(tǒng)疾病密切相關(guān),可能與神經(jīng)疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。本研究中,脂質(zhì)組學(xué)的發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步證實(shí)產(chǎn)前接觸七氟醚對(duì)子代的潛在神經(jīng)毒性。

A and B:The KEGG pathway analyzed the top 10 item bar diagrams.InP-value order from low to high,the ordinate representsP-value(-log10 transformation);C:Pathway analysis of the first 5 Pathway of up and down significantly differentially expressed genes KEGG Pathway.Pathway analysis is a functional analysis mapping genes to KEGG pathways.TheP-value (EASE-score,Fisher-Pvalue or Hypergeometric-Pvalue) denotes the significance of the pathway correlated to the conditions.Lower theP-value,more significant is the pathway.The recommendP-value cut-off is 0.05.Upregulated differential expression gene KEGG pathway analysis results folder;Down-regulated differential expression gene KEGG pathway analysis results folder.DE:Differentially expressed.

圖6 調(diào)節(jié)基因的信號(hào)通路和差異表達(dá)顯著基因的通路
Fig 6 Signal pathway of differentially expressed genes and pathway results of differentially expressed significant genes

在轉(zhuǎn)錄組學(xué)方面,本研究首次揭示七氟醚子代神經(jīng)毒性的轉(zhuǎn)錄表達(dá)規(guī)律,發(fā)現(xiàn)相關(guān)差異表達(dá)顯著基因的通路,進(jìn)一步RT-qPCR驗(yàn)證發(fā)現(xiàn),發(fā)現(xiàn)孕大鼠暴露于七氟醚后,新生大鼠皮層Vcan基因表達(dá)明顯上調(diào),Vcan基因與一種名為versican的蛋白質(zhì)有關(guān)。根據(jù)KEGG 數(shù)據(jù)庫(kù)(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)中的生物學(xué)通路分類條目和基因表達(dá)情況,過(guò)表達(dá)對(duì)理解Vcan如何調(diào)控包括神經(jīng)發(fā)育、功能和修復(fù)在內(nèi)的大腦皮層潛在毒性具有重要意義[26]。

基于UPLC/TOF-MS的脂肪組學(xué)和RNA-seq測(cè)序?yàn)樘接懼|(zhì)失衡導(dǎo)致發(fā)育神經(jīng)發(fā)生相關(guān)潛在毒性提供了全面的信息。本研究中,RNA-seq技術(shù)應(yīng)用于孕晚期大鼠暴露于七氟醚對(duì)其子代的潛在神經(jīng)毒性,對(duì)精確調(diào)控七氟醚的濃度和時(shí)間有重要的意義。本研究提示異常的甘油磷脂和鞘脂代謝可能誘導(dǎo)潛在神經(jīng)毒性,產(chǎn)前接觸七氟醚所致子代潛在發(fā)育神經(jīng)毒性的病理過(guò)程還需要更多的證據(jù),調(diào)節(jié)甘油磷脂和鞘脂代謝可作為孕晚期吸入麻醉藥長(zhǎng)時(shí)間暴露后潛在神經(jīng)損傷的治療手段。本研究為今后進(jìn)一步探討孕晚期模式動(dòng)物七氟醚暴露的脂質(zhì)代謝組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)和相關(guān)潛在神經(jīng)毒理學(xué)分子機(jī)制提供了理論依據(jù)。