青藏高原地區(qū)牦牛衣原體血清學(xué)調(diào)查

連漪，張麗鴻，李家奎,，童小樂，高興，李脂幸，參木友，索朗斯珠

（1.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，武漢 430070；2.西藏農(nóng)牧學(xué)院，林芝 860000）

衣原體是一種革蘭氏陰性的專性胞內(nèi)病原體，可以感染人和多種動物。在牛身上能引發(fā)多種類型的病癥，常見的癥狀類型有肺炎型、腸炎型、多關(guān)節(jié)炎型、腦脊髓炎型、結(jié)膜炎型、乳房炎型以及流產(chǎn)型[1]，其中衣原體性流產(chǎn)嚴(yán)重影響牛的繁殖育種[2]。牦牛作為青藏高原特色畜種，對當(dāng)?shù)氐男竽翗I(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展具有舉足輕重的作用，但長期以來，牦牛繁殖率低下制約了當(dāng)?shù)仃笈．a(chǎn)業(yè)發(fā)展[3]。為了解青藏高原地區(qū)牦牛衣原體的流行狀況，進(jìn)行了2017～2018年牦牛衣原體流行病學(xué)調(diào)查，以期為青藏高原地區(qū)牦牛衣原體的檢測及防治提供基本依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 樣本采集與處理

于青藏地區(qū)隨機(jī)采集牦牛血清樣本共1 074份，其中甘肅省甘南藏族自治州354份（2017年），西藏藏族自治區(qū)那曲縣360份（2017年），青海省海北藏族自治州海晏縣229份（2017年），青海省海北藏族自治州海晏縣131份（2018年）。血清樣本-20℃低溫保存，檢測前于室溫解凍。

1.2 診斷試劑

牛衣原體抗體ELISA檢測試劑盒，購于上海酶聯(lián)生物科技有限公司。

1.3 試驗(yàn)方法

操作步驟按照試劑盒配套說明書進(jìn)行。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)

試驗(yàn)有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00，陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

臨界值計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15。

陰性判斷：樣品OD值＜臨界值。

陽性判斷：樣品OD值＞臨界值。

1.5 結(jié)果分析

運(yùn)用SPSS V21.0統(tǒng)計學(xué)軟件對青藏地區(qū)牦牛衣原體血清陽性率數(shù)據(jù)進(jìn)行卡方檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異顯著。

2 結(jié)果

本次采集的1 074份牦牛血清樣本中共檢測出245份陽性樣本，總陽性率為22.8%。其中西藏69份，甘肅71份，青海105份，陽性率分別為19.2%、20.1%和29.2%，并且三個省份的血清陽性率有顯著差異（P＜0.05）。青海省2017年樣本陽性檢出率為28.4%，2018年為30.5%，陽性率有所上升，但差異不顯著（P＞0.05）。檢測結(jié)果如表1所示。

表1 青藏部分地區(qū)牦牛衣原體血清學(xué)檢測結(jié)果

3 討論

檢測結(jié)果表明，西藏、甘肅和青海地區(qū)近年的牦牛衣原體陽性率分別為19.2%、20.1%和29.2%，三個地區(qū)之間的血清陽性率存在顯著差異（P＜0.05）。說明三個地區(qū)牦牛均省衣原體感染，其中西藏地區(qū)的陽性率比其他兩地偏低，甘肅省的陽性率相較于殷銘陽等[4]在2014年所測的陽性率（25.08%）有所下降。青海地區(qū)陽性率最高，并且2018年陽性率（30.5%）比2017年（28.4%）增長了2.1個百分點(diǎn)，但兩年間的差異不顯著（P＞0.05）。據(jù)蔡金山[3]調(diào)查顯示，2014年青海省海晏縣的牦牛衣原體陽性率為27.96%，因此2017～2018年青海省海晏縣牦牛衣原體感染率仍有升高的趨勢，但增勢不明顯。據(jù)鄭杰等[5]的報道，往年青海地區(qū)的牦牛衣原體病檢測多使用的方法是正向間接血凝試驗(yàn)（IHA），在本次調(diào)查中使用的是特異性與敏感性比IHA更高的ELISA檢測法檢測病原抗體[6,7]，因此血清陽性率較往年高與檢測方法也有一定的關(guān)系。海晏縣作為牦牛流產(chǎn)最嚴(yán)重的地區(qū)，衣原體陽性率明顯高于全省平均水平（低于10%），其中2015年在海晏縣流產(chǎn)牦牛群中檢出衣原體抗體的幾率高達(dá)88.89%[3]，說明青海省海晏地區(qū)的牦牛流產(chǎn)情況與牛衣原體密切相關(guān)，近兩年仍有增長趨勢，迫切需要加強(qiáng)防控力度。

衣原體自被發(fā)現(xiàn)以來，世界各地都報道了衣原體的存在，這表明衣原體在全球范圍都有著不同程度的感染[8]。近年來，我國多個省市陸續(xù)報道了牛衣原體病的感染情況，數(shù)據(jù)顯示我國牛衣原體病的流行情況不容樂觀，被調(diào)查的省市中絕大部分都存在著牛衣原體感染，我國北方養(yǎng)牛業(yè)集中地區(qū)尤甚，其中青海、甘肅、寧夏等地區(qū)的感染率頗高[5]，推測可能與高原地區(qū)特殊的地理位置造就的環(huán)境有關(guān)。牛衣原體病無明顯的季節(jié)性，四季均有可能發(fā)生，但以冬、春兩季較頻繁，當(dāng)遇到寒流、降雨等氣溫驟變的天氣時，該病發(fā)生率會顯著上升[9]。高原地區(qū)環(huán)境惡劣，氧氣稀薄，氣溫較低，畜牧生產(chǎn)條件落后，且藏民對牦牛衣原體病的防范意識薄弱，放牧方式粗獷，牦牛與藏羊經(jīng)常混牧，衣原體可在牛羊之間相互傳染[10]，這些都是導(dǎo)致青藏高原地區(qū)牦牛衣原體感染率高的重要因素。

防治牦牛衣原體病，須加強(qiáng)牛群的飼養(yǎng)管理，嚴(yán)格選擇放牧的草場與水源，對發(fā)病牛做到及時篩選、隔離治療以及淘汰，最重要的是要做好牛群的免疫工作[11]。目前我國已針對多種動物研制了多種衣原體疫苗，其中羊衣原體疫苗研究較多且應(yīng)用廣泛[12]。雖然已有牛衣原體的疫苗研制成功，但我國現(xiàn)階段仍沒有出臺完整的牛衣原體病預(yù)防治療政策和方案，該病沒有引起養(yǎng)牛業(yè)足夠的重視，也是我國牛衣原體感染普遍的原因之一[13]。2017年青海省動物疫病預(yù)防控制中心聯(lián)合蘭州獸醫(yī)研究所研制了一種牦牛衣原體滅活疫苗，對牦牛衣原體疾病有良好的預(yù)防效果[14,15]，可以推廣應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐中。

截至目前，我國尚無關(guān)于西藏地區(qū)牛衣原體病流行情況的調(diào)查，本次調(diào)查初次探究了西藏、甘肅、青海 三個地區(qū)牦牛衣原體病的感染狀況，為進(jìn)一步制定有效的牦牛衣原體病防治計劃提供依據(jù)，以期促進(jìn)我國牦牛衣原體疾病的防治進(jìn)程。