覆土對(duì)人工栽培暗褐網(wǎng)柄牛肝菌菌絲及子實(shí)體生長(zhǎng)的影響*

何明霞，許欣景，楊天偉，劉 靜，高 鋒，方藝偉，王文兵，張春霞，曹 旸，王 云

（云南省熱帶作物科學(xué)研究所，云南 景洪 666100）

暗褐網(wǎng)柄牛肝菌 [Phlebopus portentosus(Berk.&Broome)Boedijn]，俗名黑牛肝菌，隸屬于牛肝菌目（Boletales） 小牛肝菌科（Boletinellaceae），主要分布于我國(guó)云南、四川、廣西和海南等地[1-2]。國(guó)外分布于泰國(guó)和斯里蘭卡等地[3-8]。其子實(shí)體品質(zhì)鮮嫩，味道鮮美，肉質(zhì)細(xì)膩，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值豐富，是云南南部及泰國(guó)東北部最受群眾喜愛的名貴食用菌之一[9-12]。

云南省熱帶作物科學(xué)研究所對(duì)暗褐網(wǎng)柄牛肝菌的生物學(xué)特性，及其菇房人工栽培和田間仿生栽培進(jìn)行了多年的研究，獲得暗褐網(wǎng)柄牛肝菌菇房人工栽培和適宜季節(jié)的田間仿生栽培的整套技術(shù)[13-16]。暗褐網(wǎng)柄牛肝菌成為了食用牛肝菌家族中唯一可以進(jìn)行人工栽培的種類。前期研究結(jié)果顯示，菇房人工栽培暗褐網(wǎng)柄牛肝菌的關(guān)鍵技術(shù)環(huán)節(jié)是覆土，即發(fā)菌完成后，覆土后才可以出菇。覆土出菇的機(jī)制目前尚不完全清楚，但已知的是，覆土材料中的微生物對(duì)暗褐網(wǎng)柄牛肝菌原基的形成和子實(shí)體的成熟起到了重要作用[17]。本研究中，擬研究覆土材料的選擇、覆土材料的制備和覆土方法等對(duì)暗褐網(wǎng)柄牛肝菌菌絲生長(zhǎng)、出菇及產(chǎn)量的影響，篩選出能促使菌絲生長(zhǎng)快、出菇早、子實(shí)體單菇產(chǎn)量高的覆土材料。

1 材料與方法

1.1 供試材料

供試菌株：ph15013菌株，由采自云南西雙版納鳳凰木 [Delonix regia(Boj.)Raf.] 樹下的野生子實(shí)體分離得到。

供試覆土材料：堆制發(fā)酵土、鳳凰木林下土壤、菜園土和泥炭。

供試菌袋：高密度聚丙烯塑料菌袋，規(guī)格17.00 cm×35.00 cm×0.07 cm。

栽培基質(zhì)：橡膠木木屑63%、紅土粉11%、谷粒 25%、碳酸鈣 1.0%、MgSO40.1%、KH2PO40.1%。

覆土材料含水量用浙江托普儀器有限公司TZS-Ⅱ水份測(cè)定儀測(cè)定。

1.2 方法

1.2.1 栽培菌袋的制備

覆土研究使用的菌袋制備參照文獻(xiàn)[18]。滅菌條件為 0.15 MPa，121℃滅菌 120 min。

1.2.2 覆土材料的制備

堆制發(fā)酵土（a）：在紅土中加入一定量的干牛糞，淋水拌勻，堆成下面大、上面小的土堆，蓋塑料布，發(fā)酵6個(gè)月，3個(gè)月翻堆1次；鳳凰木林下土壤（b）：挖取鳳凰木林下地表20 cm以下的土壤；菜園土（c）：挖取菜園地表20 cm以下的土壤。待菌絲長(zhǎng)滿菌袋后，將3種土壤粉碎，過篩后分別與泥炭按1∶1混合。

3種土壤為3個(gè)覆土處理，每個(gè)處理覆土40袋，共計(jì)120袋。

1.2.3 覆土層含水量處理

堆制發(fā)酵土與泥炭按1∶1比例混合后，制成含水量分別為 40.0% （處理 a）、45.0% （處理 b）、50.0%（處理c） 和65.0%（處理 d） 的4種不同含水量的覆土材料，即4個(gè)處理，每個(gè)處理覆土30袋，共計(jì)120袋。

1.2.4 覆土材料 pH 處理

堆制發(fā)酵土與泥炭按1∶1比例混合后，用檸檬酸及石灰將其pH分別調(diào)為4（處理a）、b∶5（處理b）、6（處理c） 和7（處理d），即4個(gè)處理，每個(gè)處理覆土30袋，共計(jì)120袋。

1.2.5 覆土厚度處理

堆制發(fā)酵土與泥炭按1∶1比例混合后，對(duì)培養(yǎng)好的菌袋進(jìn)行覆土，覆土層厚度設(shè)4個(gè)處理，分別是2 cm（處理a）、4 cm（處理 b）、6 cm（處理 c）和8 cm（處理d），每個(gè)處理覆土30個(gè)菌袋，共計(jì)120袋。

1.2.6 培養(yǎng)方法

覆土后菌袋放于培菌室內(nèi)（濕度75.0%、光照100 lx）培養(yǎng)，當(dāng)菌絲長(zhǎng)滿覆土層后移入出菇室（濕度85.0%、光照300 lx） 培養(yǎng)出菇。

1.2.7 正交試驗(yàn)

選用L9（34）正交表，以覆土材料配方（因素A）、覆土材料含水量（因素B）、覆土材料pH（因素C）和覆土層厚度（因素D）為直接因素進(jìn)行正交試驗(yàn)。水平因素表見表1。共設(shè)9個(gè)處理，篩選出各因素之間的最佳組合。

表1 L9（34）正交試驗(yàn)因素與水平Tab.1 Factors and levels of L9（34）orthogonal test

1.3 項(xiàng)目測(cè)定

覆土第10天，測(cè)量覆土層菌絲生長(zhǎng)量，記錄出菇天數(shù)，稱量單個(gè)菌袋子實(shí)體重量。

1.4 數(shù)據(jù)分析

用DPSv 6.05統(tǒng)計(jì)軟件Duncan新復(fù)極差法進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 覆土材料配方對(duì)菌絲生長(zhǎng)及子實(shí)體生長(zhǎng)的影響

不同覆土材料配方對(duì)菌絲生長(zhǎng)及子實(shí)體生長(zhǎng)的影響見表2。

由表2可知，3種不同覆土材料對(duì)菌絲生長(zhǎng)量的影響無顯著差異。不同覆土材料對(duì)子實(shí)體生長(zhǎng)和產(chǎn)量的影響差異顯著。采用處理a比處理b和處理c出菇要早，僅需9.00 d，而且子實(shí)體平均單菇重也最重，為107.36 g。因此，栽培暗褐網(wǎng)柄牛肝菌的最佳覆土材料為處理a（堆制發(fā)酵土）。同時(shí)，堆制發(fā)酵土不僅制作省工、簡(jiǎn)便，而且發(fā)酵后土壤的孔隙度和持水性增加，飽和含水量加大，一些可利用的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和有機(jī)質(zhì)含量也有所增多，有利于暗褐網(wǎng)柄牛肝菌和其他有益微生物生長(zhǎng)發(fā)育，是一種具有良好覆土特性的覆土材料。

表2 不同覆土材料配方對(duì)菌絲生長(zhǎng)及子實(shí)體生長(zhǎng)的影響Tab.2 Effects of different casing materials on mycelial and fruiting body growth

2.2 覆土材料含水量對(duì)菌絲生長(zhǎng)及子實(shí)體生長(zhǎng)影響

不同覆土材料含水量對(duì)菌絲生長(zhǎng)及子實(shí)體生長(zhǎng)的影響見表3。

表3 覆土材料不同含水量對(duì)菌絲生長(zhǎng)及子實(shí)體生長(zhǎng)的影響Tab.3 Effects of different water content of casing materials on mycelial and fruiting body growth

由表3可知，處理c中菌絲生長(zhǎng)最快，覆土后第10天菌絲生長(zhǎng)量為4.0 cm，而且出菇也最快，8.67 d開始出菇，與處理a和處理d有顯著差異；其子實(shí)體平均單菇重也最重，為124.71 g，與其他3個(gè)處理有極顯著差異。因此，菇房栽培暗褐網(wǎng)柄牛肝菌，覆土材料含水量為50%，菌絲生長(zhǎng)快，出菇早，子實(shí)體單菇產(chǎn)量高。

2.3 覆土材料pH對(duì)菌絲生長(zhǎng)及子實(shí)體生長(zhǎng)的影響

不同覆土材料不同pH對(duì)菌絲生長(zhǎng)及子實(shí)體生長(zhǎng)的影響見表4。

表4 覆土材料不同pH對(duì)菌絲生長(zhǎng)及子實(shí)體生長(zhǎng)的影響Tab.4 Effects of different pH of casing materials on mycelial and fruiting body growth

由表4可知，在處理b中菌絲生長(zhǎng)最快，覆土10 d后菌絲生長(zhǎng)量4.85 cm；產(chǎn)出的子實(shí)體單菇重也最重，為120.60 g，與其他3個(gè)處理有極顯著差異；出菇早，11 d開始出菇，與處理c和處理d相比差異極顯著。因此，覆土材料pH為5時(shí)，栽培暗褐網(wǎng)柄牛肝菌效果最好。這一試驗(yàn)結(jié)果正好與調(diào)查的暗褐網(wǎng)柄牛肝菌的生態(tài)學(xué)特性結(jié)果相一致，在自然界中，暗褐網(wǎng)柄牛肝菌生長(zhǎng)于偏酸性的土壤。

2.4 覆土材料厚度對(duì)菌絲生長(zhǎng)及子實(shí)體生長(zhǎng)的影響

不同覆土材料厚度對(duì)菌絲生長(zhǎng)及子實(shí)體生長(zhǎng)的影響見表5。

表5 不同覆土層厚度對(duì)菌絲生長(zhǎng)及子實(shí)體生長(zhǎng)的影響Tab.5 Effects of different soil layer thickness on mycelial and fruiting body growth

注：表中大寫、小寫字母分別表示在1%、5%水平差異顯著。Note:The uppercase and lowercase letters in the table indicate significant differences at the level of 1%and 5%,respectively.

由表5可知，在處理c中菌絲生長(zhǎng)最快，覆土10 d，菌絲生長(zhǎng)量為4.98 cm，與處理a相比差異顯著；且出菇最早，9.50 d開始出菇；子實(shí)體單菇重最重，達(dá)126.50 g，與處理d和處理a差異顯著。因此，覆土層太厚或太薄均不利于菌絲及子實(shí)體的生長(zhǎng)，覆土層的厚度為4 cm～6 cm時(shí)，暗褐網(wǎng)柄牛肝菌栽培效果較好。

2.5 正交試驗(yàn)

不同覆土材料配方、覆土材料含水量、覆土材料pH及覆土層厚度處理組合對(duì)暗褐網(wǎng)柄牛肝菌菌絲生長(zhǎng)、出菇天數(shù)及子單菇重影響結(jié)果見表6。

表6 不同處理的菌絲生長(zhǎng)量、出菇天數(shù)、單菇重Tab.6 Mycelial growth,fruiting days,single fruiting body weight under different treatments

子實(shí)體單菇重是評(píng)價(jià)栽培暗褐網(wǎng)柄牛肝菌的最重要指標(biāo)。由表6可知，覆土材料配方對(duì)暗褐網(wǎng)柄牛肝菌菌絲生長(zhǎng)、出菇天數(shù)及子實(shí)體單菇重的影響達(dá)到極顯著水平，說明覆土材料配方是影響菌絲生長(zhǎng)及子實(shí)體生長(zhǎng)的主要因素。

對(duì)各處理的菌絲生長(zhǎng)量、出菇天數(shù)和子實(shí)體單菇重進(jìn)行方差分析和多重比較結(jié)果見表7。

表7可知，對(duì)子實(shí)體單菇重的影響因素順序依次為覆土材料＞覆土材料厚度＞覆土材料含水量＞覆土材料pH。表明覆土材料是影響牛肝菌子實(shí)體單菇重的主要因素，覆土材料厚度、覆土層含水量及覆土材料pH為次要因素。綜上，4個(gè)因素的最佳組合為A1B2C2D1。

表7 不同因素水平對(duì)菌絲生長(zhǎng)、出菇天數(shù)、子實(shí)體單菇重的影響Tab.7 Effects of different factors on mycelial growth,fruiting days,single fruiting body weight

3 結(jié)論

覆土是暗褐網(wǎng)柄牛肝菌栽培的重要環(huán)節(jié)，發(fā)現(xiàn)出菇與覆土存在密切關(guān)系，不覆土則不出菇；通過研究菜園土、果園土和堆制土的理化性質(zhì)及其對(duì)暗褐網(wǎng)柄牛肝菌出菇的影響，發(fā)現(xiàn)菜園土的全碳、全磷、有效磷等含量顯著高于果園土和堆制土，用菜園土覆土出菇的暗褐網(wǎng)柄牛肝菌平均單菇重最高[18]。覆土與微生物的存在是瓶栽條件下暗褐網(wǎng)柄牛肝菌菌株形成原基和成熟子實(shí)體的重要條件[19]。覆土層的空隙度也是影響食用菌生長(zhǎng)的重要理化因素之一，覆土空隙度與食用菌產(chǎn)量正相關(guān)[20]。泥碳中含有大量微生物，且泥炭因其飽和含水量大，持水性好，孔隙度大、結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的特性，十分有利于食用菌菌絲與子實(shí)體生長(zhǎng)發(fā)育。

在前期的單因子試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，發(fā)酵土是人工栽培暗褐網(wǎng)柄牛肝菌的最佳覆土材料，50%發(fā)酵土和50%泥炭作為覆土材料，含水量50%、pH 5、覆土層厚度6 cm，菌絲生長(zhǎng)快，出菇早，子實(shí)體平均單菇更重。

通過本次正交試驗(yàn)，結(jié)果表明不同覆土材料對(duì)菌絲生長(zhǎng)、出菇天數(shù)及子實(shí)體單菇重的直接影響最大，覆土材料厚度、覆土層含水量及覆土材料pH為次要因素。50%堆制發(fā)酵土和50%泥炭是栽培暗褐網(wǎng)柄牛肝菌的最佳覆土材料，覆土層厚度4 cm～6 cm、覆土材料含水量45%～50%和pH 5為最佳組合。