19F核磁共振定量法測定含氟漱口液中氟化鈉的含量

華俊杰，朱海菲，李 育

(海軍軍醫(yī)大學(xué)藥學(xué)院 上海 200433)

定量核磁共振(qNMR)是基于信號的積分面積正比于產(chǎn)生信號的質(zhì)子數(shù)的一種絕對定量法，已被包括中國藥典、美國藥典與歐洲藥典收載[1-3]。在藥物分析方面已得到了廣泛的應(yīng)用[4-6]，例如天然產(chǎn)物鑒別[7]、藥物的質(zhì)量控制[8-11]。這是一種快速、簡便、準(zhǔn)確的技術(shù)，無需對照品，即能獲得混合物的定量信息，可對傳統(tǒng)色譜技術(shù)進(jìn)行補(bǔ)充和替代。有文獻(xiàn)報道，19F-qNMR可用于辨別含氟藥物及其含量檢測[10-13]，由于藥物輔料中大多不含氟，不產(chǎn)生干擾，并有文獻(xiàn)表明19F-qNMR的準(zhǔn)確度與HPLC質(zhì)量平衡法結(jié)果相當(dāng)[10]。

含氟化物漱口水中主要組成為氟化鈉，能有效防齲，但攝入過量會導(dǎo)致氟斑牙或氟骨癥。因此，對于含氟漱口液中氟化鈉含量測定，對于其質(zhì)量控制至關(guān)重要。目前對于氟化鈉的測定主要采用氟離子選擇電極法，分光光度法和離子色譜法，存在耗時、試劑昂貴，操作煩瑣的問題[14]。本實(shí)驗(yàn)擬選擇19F-qNMR測定含氟漱口液中氟化鈉的含量，為其質(zhì)量控制提供必要的技術(shù)方法。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

BRUKER AVANCE II300 MHz NMR(Bruker 公司)、5mm同軸核磁管535-pp-7(Wilmad 公司)、SHIMADZU AUW220D分析天平(0.01 mg，SHIMADZU 公司)。

1.2 樣品及試劑

含氟漱口液(自制)、重水(Cambridge Isotope Laboratories,Ins.)、三氟乙酸(純度99.5%，Cambridge Isotope Laboratories,Ins.)、純化水(實(shí)驗(yàn)室自制)。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 溶液配制

含氟漱口液配制：精密稱取氟化鈉、替硝唑、醋酸氯已定適量，溶于1 000 ml水中，制得氟化鈉、替硝唑、醋酸氯已定濃度分別約為0.4、0.2 和0.2 mg/ml的含氟漱口液。

氟化鈉對照品儲備液配制：精密稱取氟化鈉0.08106 g，置100 ml量瓶中，加入純化水溶解，并稀釋定容至刻度，得濃度為0.8106 mg/ml的氟化鈉對照品儲備液。

內(nèi)標(biāo)物配制：量取氘代三氟乙酸 0.1 ml，置10 ml量瓶，用重水稀釋，定容至刻度，精密量取220 μl置于同軸核磁管內(nèi)管。

供試品配制：以含氟漱口液作為供試品溶液，精密量取260 μl 置于同軸核磁管外管，待測。

2.2 測定條件與處理

在同軸核磁管外管放入待測樣品，插入含三氟乙酸的內(nèi)管，進(jìn)行數(shù)據(jù)采集。采用zgfhigqn.2脈沖序列在恒溫(25oC)下獲取19F-NMR譜。具體試驗(yàn)參數(shù)設(shè)置如下：譜寬(SWH)=δ 90，射頻中心頻率(O1P)=δ 98，采樣點(diǎn)數(shù)(TD)=128 K，采樣時間(AQ)=2.67 s，采樣次數(shù)(NS)=32次，空掃次數(shù)(DS)=4次，增益(RG)=912。

圖譜處理，使用 Topspin3.1 軟件處理采集到的數(shù)據(jù)，通過軟件調(diào)整相位并自動校準(zhǔn)基線后對信號峰進(jìn)行積分，設(shè)定內(nèi)標(biāo)峰積分面積為1.00，記錄樣品峰積分面積。

3 方法學(xué)考察

3.1 專屬性試驗(yàn)

精密量取含氟漱口液供試品260 μl，按“2.2”項(xiàng)下檢測條件測定19F-NMR譜，記錄信號峰的積分面積。另按含氟漱口液處方，配制不含氟化鈉的陰性對照品溶液，同法取樣測定，比較陰性對照與供試品的19F-NMR譜，觀察陰性對照品是否出峰。另取稀釋1000倍后的三氟醋酸220 μl，同法測定，結(jié)果顯示，供試品的信號峰在δ 119，處方其他組分無響應(yīng)信號，對供試品不產(chǎn)生干擾信號；內(nèi)標(biāo)的響應(yīng)信號在δ 75，供試品與內(nèi)標(biāo)的響應(yīng)信號分離度好，說明本法專屬性良好(見圖1)。

3.2 線性與范圍

分別精密量取氟化鈉對照品儲備液10.0、6.0、4.0、2.0、1.0 ml置10 ml量瓶中，用純化水稀釋并定容至刻度，制成含氟化鈉對照品0.8106、0.6080、0.4053、0.2027、0.1013 mg/ml工作曲線系列溶液。分別吸取260 μl工作曲線溶液，轉(zhuǎn)移至同軸核磁管外管，按“2.2”項(xiàng)下檢測條件進(jìn)行300 MHz核磁共振檢測，記錄19F-NMR譜圖，以峰面積A對濃度C(mg/ml)進(jìn)行線性回歸，得線性回歸方程：

A= 1.1392C- 0.0013，r= 0.99995

表明氟化鈉在0.1 ～ 0.8 mg/ml范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

圖1 含氟漱口液的19F-NMR圖譜(含三氟乙酸內(nèi)標(biāo))1.氘代三氟乙酸信號峰；2.氟化鈉信號峰

3.3 重復(fù)性試驗(yàn)

分別精密量取供試品溶液260 μl 6份，按“2.2”項(xiàng)下進(jìn)行檢測，記錄供試品的響應(yīng)信號面積相，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線法計算含量，得含氟漱口液中氟化鈉含量分別為99.41%、99.27%、99.22%、99.63%、99.00%、99.19%，RSD平均為0.22%，表明該方法重復(fù)性良好。

3.4 回收率試驗(yàn)

精密稱取對照品氟化鈉0.10270 g，置100 ml量瓶，加純化水溶解，稀釋并定容至刻度，得濃度為1.0270 mg/ml氟化鈉對照品溶液。

精密量取漱口液2.5 ml，置于5 ml容量瓶；隨后分別精密量取濃度為1.0270 mg/ml氟化鈉對照品液0.8、1.0和1.2 ml，加入上述量瓶中，加純化水稀釋并定容至刻度，制得低、中、高3個濃度的回收率測定溶液，每個濃度平行配制3份，按“2.2”項(xiàng)下進(jìn)行檢測，并計算加樣回收率。表1顯示低、中、高3個濃度的平均回收率分別為99.36%、99.31%及99.65%，RSD分別為0.51%、0.35% 及0.54%，表明該方法測定結(jié)果準(zhǔn)確度滿足要求。

表1 19F-NMR測定含氟漱口液中氟化鈉含量的加樣回收率試驗(yàn)(n=3)

3.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，在0、4、8、12、24 h分別對其進(jìn)行測定，記錄供試品的響應(yīng)信號面積相。結(jié)果如表2所示，氟化鈉平均峰面積為0.4619，RSD為0.19%，表明供試品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

表2 19F-NMR測定含氟漱口液中氟化鈉含量的穩(wěn)定性試驗(yàn)

3.6 氟化鈉的含量測定

分別精密量取供試品溶液260 μl 5份，按照“2.2”項(xiàng)下方法測定。結(jié)果如表3所示，該漱口液中氟化鈉的平均含量為99.30%，RSD為0.23%。

表3 19F-NMR測定含氟漱口液中氟化鈉的含量

4 結(jié)果與討論

本文所建立的19F-NMR定量分析含氟漱口液中氟化鈉含量的方法，無需分離提取過程，直接用核磁共振波譜法進(jìn)行含量檢測，具有方便、快捷、準(zhǔn)確的特點(diǎn)，解決了傳統(tǒng)高效液相色譜法無法檢測NaF含量的問題。本文采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法可準(zhǔn)確地計算出NaF含量，適用于大批量樣品分析，能有效排除內(nèi)標(biāo)物的濃度與質(zhì)量對于含量測定的影響。經(jīng)過方法學(xué)考察后，論證了19F-NMR定量分析方法具有較好的專屬性、線性、精密度、準(zhǔn)確度及穩(wěn)定性，為含氟藥物的含量檢測拓展了新方法。