濰坊地區(qū)非綜合征型耳聾患者遺傳性耳聾基因突變情況分析

竇曉寧，徐榮華，高玲，任雪蓮，張敏敏，鄭燕

(濰坊市婦幼保健院，山東濰坊261011)

先天性耳聾的致病因素可以分為遺傳性和非遺傳性。遺傳因素造成的耳聾中,約30%為綜合征型耳聾(SHI)，70%為非綜合征型耳聾(NSHI)[1]。NSHI患者中，75%～80%為常染色體隱性遺傳，20%為常染色體顯性遺傳，2%～5%為X連鎖遺傳，1%的線粒體突變母系遺傳[2]。NSHI的致病基因和突變種類繁多，不同地區(qū)、不同種族遺傳背景存在差異。了解本地區(qū)常見耳聾基因突變特點(diǎn)，能夠針對(duì)耳聾人群、高危人群進(jìn)行遺傳性耳聾基因檢測(cè)和篩查，有依據(jù)地制定本地區(qū)遺傳性耳聾防治工作規(guī)劃。濰坊地區(qū)尚缺乏遺傳性耳聾基因致病突變類型的研究。為此，我們對(duì)濰坊地區(qū)142例NSHI患者進(jìn)行耳聾基因檢測(cè)，分析該地區(qū)耳聾基因的流行情況和突變類型。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選擇我院2017年7月～2018年12月聽力中心確診的耳聾患者，以及本市聾校的部分耳聾學(xué)生?；颊咴诙呛砜漆t(yī)師指導(dǎo)下完成調(diào)查問卷，問卷內(nèi)容包括一般信息、分娩情況、聽障高危因素調(diào)查、家族史、疾病史等。納入標(biāo)準(zhǔn)：籍貫為本市及所轄縣區(qū)；經(jīng)聽力學(xué)檢測(cè)及影像學(xué)檢查(包括耳科常規(guī)檢查、純音測(cè)聽或聽性腦干反應(yīng)、耳聲發(fā)射、聲導(dǎo)抗、顳骨CT或MR)確診為永久性神經(jīng)性聽力損失；排除后天致病因素造成的耳聾和SHI。共納入142例患者，其中男78例、女64例，年齡0.2～40(14.4±6.8)歲。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核通過，由患者本人或法定監(jiān)護(hù)人簽署《遺傳性耳聾基因檢測(cè)知情同意書》。

1.2 耳聾基因檢測(cè)方法 采集外周靜脈血3～5 mL，EDTA抗凝。采用一代測(cè)序Massarray法檢測(cè)耳聾基因。檢測(cè)基因及位點(diǎn)：GJB2基因的109G>A，MET34THR，35delG，427C>T，176_191del16，235delC，299_300delAT，167delT，508_511dupAACG；GJB3基因的538C>T，547G>A，357C>T，423A>G，497A>G，R42P，CYS86SER，GLY12ASP；SLC26A4基因的281C>T，589G>A，IVS7-2A>G，1174A>T，1229C>T，IVS15+5G>A，1975G>C，2027T>A，2162C>T，2168A>G，1226G>A；12SrRNA基因的1555A>G，1494C>T，1291T>C，827A>G，961T>G；POU3F4基因的LYS202TER，LEU317TRP，LYS334GLU，ARG323GLY；GJB6基因的THR5MET，GLY11ARG，ALA88VAL，VAL37GLU。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料以百分?jǐn)?shù)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 NSHI患者耳聾基因突變類型及位點(diǎn) 142例NSHI患者中，共檢測(cè)出耳聾基因突變60例，突變率為42.25%。其中單基因純合突變15例，單基因雜合突變29例，單基因復(fù)合雜合突變10例，多基因復(fù)合突變6例。具體基因突變類型及位點(diǎn)見表1。

表1 NSHI患者耳聾基因突變類型及位點(diǎn)

注：*為純合突變。

2.2 耳聾基因突變攜帶者的性別分布 60例耳聾基因突變攜帶者中，男性39例，檢出率為27.46%(39/142)，男性攜帶率為50.00%(39/78)，攜帶占比65.00%(39/60)；女性21例，檢出率為14.79%(21/142)，女性攜帶率為32.81%(21/64)，攜帶占比35.00%(21/60)。男性檢出率、攜帶率、攜帶占比均高于女性(P<0.05或<0.01)。

2.3 NSHI患者耳聾突變基因的突變位點(diǎn)、檢出頻次及構(gòu)成比 見表2。

3 討論

表2 NSHI患者耳聾突變基因的突變位點(diǎn)、檢出頻次及構(gòu)成比

現(xiàn)實(shí)生活中，聾聾結(jié)合在聾人中比例較高，這是造成基因突變呈現(xiàn)多形態(tài)、多種基因復(fù)合攜帶的重要原因，也是先天性耳聾發(fā)生率居高不下的原因之一。耳聾中遺傳因素占比約60%，很大一部分耳聾患者由于自身基因缺陷或基因多態(tài)性造成對(duì)環(huán)境易感性增加而致聾。耳聾基因致病類型及頻率存在明顯地域特征，耳聾基因檢測(cè)可以明確病因，預(yù)測(cè)病情變化，協(xié)助治療，更重要的是可以指導(dǎo)并阻止耳聾傳遞，預(yù)防耳聾發(fā)生。因此，了解耳聾基因的流行情況和突變類型，掌握其發(fā)生發(fā)展規(guī)律及分布情況，對(duì)耳聾防治具有重要作用。

GJB2基因與常染色體隱性遺傳NSHI相關(guān)，其突變可導(dǎo)致內(nèi)耳K+循環(huán)紊亂，影響信使分子傳遞，從而導(dǎo)致聽覺異常。本研究中，GJB2基因在濰坊地區(qū)NSHI患者中的突變頻次為16次，檢出率為11.27%，其中235delC位點(diǎn)突變，占該基因突變位點(diǎn)的58.8%，預(yù)示該位點(diǎn)在本地區(qū)NSHI者中為GJB2基因主要致病位點(diǎn)。與林文津等[3]報(bào)道的檢出率11.06%接近，但與余紅等[4]報(bào)道的26.72%及劉雙雙等[5]報(bào)道的19.1%差異較大，表明存在明顯的地域性差異。

GJB3基因編碼間隙連接蛋白31，其突變主要導(dǎo)致高頻聽力損失。以往研究發(fā)現(xiàn)，GJB3基因538C>T、547G>A位點(diǎn)突變較多[4]；但劉雙雙等[5]對(duì)山東省845例NSHI者GJB3基因538C>T、547G>A位點(diǎn)檢測(cè)結(jié)果僅發(fā)現(xiàn)1例538C>T雜合突變者(不包括濰坊地區(qū))，可見以上2個(gè)位點(diǎn)并不是山東地區(qū)主要的致病位點(diǎn)。而本研究的357C>T位點(diǎn)突變檢出率高達(dá)20.78%，表明357C>T位點(diǎn)是濰坊地區(qū)GJB3基因主要的突變位點(diǎn)。

SLC26A4基因位于人類染色體7q31，具有較強(qiáng)的遺傳異質(zhì)性，其突變廣泛，目前國內(nèi)外已報(bào)道200余種突變類型。SLC26A4基因編碼Pendrin蛋白質(zhì)，該蛋白是一種跨膜碘/氯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，具有高度疏水性。Pendrin蛋白質(zhì)功能障礙可引起Cl-轉(zhuǎn)運(yùn)障礙或內(nèi)耳淋巴液流動(dòng)異常，引起前庭水管擴(kuò)大(EVA)和內(nèi)淋巴管內(nèi)壓升高，內(nèi)耳毛細(xì)胞受損和聽神經(jīng)萎縮，從而導(dǎo)致聽力下降，為常染色體隱性遺傳，EVA為感音神經(jīng)性聾兒童最常見的內(nèi)耳畸形[6]。本研究SLC26A4基因突變檢出率為25.35%，突變占比46.75%，明顯高于其他基因，這與國內(nèi)孟培等[7]的研究結(jié)果有所不同，可以看出SLC26A4基因?yàn)楸镜貐^(qū)NSHI者主要致病基因。IVS7-2A>G位點(diǎn)為中國地區(qū)最常見突變，本研究中該位點(diǎn)的突變檢出率為14.08%，略高于全國其他地區(qū)[5，8]。該位點(diǎn)的突變占比為55.56%，在本地區(qū)NSHI者中占該基因突變的第1位，高于張艷芳等[9]報(bào)道的28.29%。2168A>G位點(diǎn)檢出率為4.93%，占SLC26A4基因突變第2位，與我國其他地區(qū)[10，11]相近，但高于全國平均水平[4]。

12SrERNA基因?yàn)樗幬镄远@的易感基因，是以母系線粒體DNA為遺傳方式的基因遺傳，為“一針致聾”的主要原因。以往國內(nèi)研究其突變位點(diǎn)多集中在1555A>G與1494G>T[12～14]。本研究中12SrERNA基因突變?nèi)繛榧兒贤蛔?，?27A>G位點(diǎn)突變與1555A>G位點(diǎn)突變?yōu)橹?，?27A>G位點(diǎn)突變攜帶率(2.82%)略高于1555A>G位點(diǎn)突變攜帶率(2.11%)。這與Lu等[13]報(bào)道的12SrERNA基因突變位點(diǎn)以1555A>G與1494G>T為主不同，與江帆等[14]報(bào)道的廣州地區(qū)耳聾基因分析主要以1555A>G位點(diǎn)突變也不同，存在明顯的地域差異。1494C>T位點(diǎn)未發(fā)現(xiàn)突變攜帶者，可見此位點(diǎn)并非本地區(qū)NSHI者12SrERNA基因主要致病位點(diǎn)。12SrERNA基因突變者對(duì)氨基糖苷類藥物極為敏感，小劑量短時(shí)應(yīng)用即可造成聽力嚴(yán)重受損。12SrERNA基因檢測(cè)可以指導(dǎo)用藥，避免因使用氨基糖苷類藥物發(fā)生耳聾。

POU3F4基因位于X染色體上，以X連鎖隱性遺傳的方式向后代傳遞，家系中患者多為男性呈現(xiàn)明顯的隔代遺傳規(guī)律。大部分表現(xiàn)為混合性聾，聽力損失可成進(jìn)行性發(fā)展，少數(shù)表現(xiàn)為感音神經(jīng)性聾。GJB2/GJB6基因突變導(dǎo)致的聽力損失程度更重，一般為極重度。本研究上述2個(gè)基因檢出率均為0，提示在本地人群中少見。

本研究中單基因雜合突變檢出率20.42%，占比48.33%,單基因雜合突變通常認(rèn)為不致病，而同一基因的不同位點(diǎn)雜合突變通常認(rèn)為可致病。耳聾患者出現(xiàn)單基因雜合突變，有必要對(duì)該基因全外顯子測(cè)序，以期找到其他協(xié)同致病的突變位點(diǎn)。本研究還發(fā)現(xiàn)，在本地區(qū)NHSI者中，基因突變攜帶率表現(xiàn)為多種類型與形態(tài)，多基因復(fù)合突變檢出率達(dá)4.23%，突變占比10.00%，在以往的報(bào)道中較少見。

綜上所述，濰坊地區(qū)NSHI者遺傳性耳聾的主要致病基因和位點(diǎn)依次為：SLC26A4基因IVS7-2A>G、1174A>T、2168A>G、IVS15+5G>A、589G>A、1975G>C位點(diǎn)，GJB2基因235delC、299_300delAT、MET34THR、109G>A、176_191del16位點(diǎn)，GJB3基因357C>T、538C>T位點(diǎn)，12SrERNA基因827A>G、1555A>G位點(diǎn)。本地區(qū)耳聾基因突變形態(tài)多樣，與其他地區(qū)有明顯地域差異。由于NSHI的臨床表型差異大而且遺傳異質(zhì)性非常強(qiáng)，醫(yī)學(xué)工作者應(yīng)將遺傳性耳聾基因的基因型與表型之間的相關(guān)性作為研究重點(diǎn)，為臨床提供更準(zhǔn)確的指導(dǎo)。