不同品種獼猴桃果實(shí)的抗氧化活性研究

趙燕妮， 李 悅， 雷 靖， 張俊杰， 張 坤，陳 丹，任嘉敏， 龐子遠(yuǎn)， 陳雪峰,4， 王 勇,4

(1.陜西科技大學(xué) 食品與生物工程學(xué)院， 陜西 西安 710021； 2.陜西省農(nóng)村科技開發(fā)中心 陜西省獼猴桃工程技術(shù)研究中心， 陜西 西安 710054； 3.山西大學(xué) 大型科學(xué)儀器中心， 山西 太原 030006； 4.陜西農(nóng)產(chǎn)品加工技術(shù)研究院， 陜西 西安 710021)

0 引言

自由基是一類在機(jī)體氧化反應(yīng)過程中產(chǎn)生的具有強(qiáng)氧化性的有害物質(zhì)，會(huì)損害機(jī)體的組織和細(xì)胞，而且自由基的損傷會(huì)隨著年齡的增長而加劇，加速衰老，并伴隨一些慢性疾病如癌癥、心血管疾病、動(dòng)脈硬化、炎癥等的發(fā)生[1].降低人體內(nèi)自由基的含量，不僅要靠自身的清除系統(tǒng)，還要靠外部抗氧化劑的幫助，由于化學(xué)合成的抗氧化劑對(duì)人體健康具有潛在危害，所以對(duì)植物中的天然抗氧化活性研究逐漸受到國內(nèi)外學(xué)者的青睞[2].研究表明，許多水果中有豐富的抗氧化活性物質(zhì)(如維生素E、維生素C、黃酮、多酚類物質(zhì)等)，這些天然的抗氧化物質(zhì)能有效清除體內(nèi)自由基，延緩機(jī)體衰老，增強(qiáng)機(jī)體免疫力[3].

獼猴桃屬獼猴桃科(Actinidia arguta Sieb Zucc.)，又名狐貍桃、藤梨、羊桃、毛木果等.獼猴桃營養(yǎng)價(jià)值豐富，其味道鮮美、深受人們喜愛.獼猴桃被譽(yù)為天然維C之冠，每100 g新鮮獼猴桃維生素C的含量是甜橙的2～8倍，柑橘的3～14倍，蘋果的20～84倍，梨的30～140倍[4].此外，獼猴桃還富含多種礦物質(zhì)和各類氨基酸，有清熱利水、散瘀止血、降血脂和抗腫瘤的作用[5].獼猴桃中含有的多糖、黃酮、多酚等活性物質(zhì)有很強(qiáng)的抗氧化能力，已有研究表明，多酚類物質(zhì)具有預(yù)防癌癥、抑郁癥、心血管疾病以及減肥健美、增強(qiáng)免疫功能等功效[6].

我國是獼猴桃種植大國，陜西周至是獼猴桃的重要產(chǎn)區(qū)，周至縣環(huán)境適宜、獼猴桃栽培面積至今已達(dá)到3 000畝[7]，有徐香、華優(yōu)、啞特、海沃德等不同品種.不同獼猴桃之間營養(yǎng)成分存在差異，所以不同品種獼猴桃抗氧化活性的差異值得關(guān)注.

本次實(shí)驗(yàn)選用周至縣產(chǎn)量較大的三個(gè)品種：徐香、啞特和海沃德為研究對(duì)象，分別測定其DPPH·自由基、羥基自由基(·OH)、ABTS+·自由基的清除能力以及對(duì)銅離子的螯合能力，為研究不同品種獼猴桃體外抗氧化活性差異，為進(jìn)一步篩選優(yōu)良品種及開發(fā)天然抗氧化劑提供理論依據(jù).

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

(1)主要材料與試劑

三個(gè)獼猴桃品種(海沃德、徐香、啞特)于2017年10月采自陜西周至縣陜西佰瑞獼猴桃研究院，采摘獼猴桃時(shí)選用八成熟且大小統(tǒng)一的獼猴桃果實(shí).

過硫酸鉀、磷酸二氫鈉、硫酸亞鐵、過氧化氫、抗壞血酸、硫酸銅、氯化亞鐵、甲醇、乙醇，購自天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司.DPPH、ABTS、水楊酸、鄰苯二酚紫、菲咯嗪，購自上海瑞永生物科技有限公司.

(2)主要儀器設(shè)備

JA2003型電子分析天平，賽多利斯科學(xué)儀器有限公司；真空冷凍干燥機(jī)，美國西蒙公司；冷凍高速離心機(jī)，德國Eppendorf公司；組織搗碎機(jī)，陜西環(huán)宇儀器公司；UV-2401PC型紫外可見分光光度計(jì)，日本SHIMADZU公司；水浴鍋，北京科偉永興儀器有限公司；移液器，德國Eppendorf公司；PHS-25型數(shù)顯pH計(jì)，上海儀電科學(xué)儀器股份有限公司.

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 DPPH·自由基清除能力的測定[8-10]

(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

準(zhǔn)確稱取2 mg抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)品并溶解于8 mL去離子水中，得濃度為0.25 mg/mL的抗壞血酸溶液.用去離子水分別稀釋成0.225 mg/mL、0.2 mg/mL、0.15 mg/mL、0.125 mg/mL、0.1 mg/mL、0.075 mg/mL、0.05 mg/mL、0.025 mg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液.稱取2 mg的DPPH·溶解到70 mL無水甲醇中，濃度為28 mg/L，現(xiàn)配現(xiàn)用.分別取100μL標(biāo)準(zhǔn)溶液與3.9 mL的DPPH·甲醇溶液于10 mL離心管中，渦旋10 s，在室溫條件下避光反應(yīng)30 min，在517 nm處測吸光度(As)，以蒸餾水為空白，測定吸光度(Ac)，根據(jù)公式(1)計(jì)算DPPH·自由基清除率，重復(fù)三次.以抗壞血酸濃度為橫坐標(biāo)，自由基清除率為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.

(1)

式(1)中：As為試驗(yàn)組值；Ac為空白組值.

(2)樣品清除DPPH·自由基能力的測定

取出樣品獼猴桃，解凍1 h，在組織搗碎機(jī)中打碎，抽濾得濾液，將濾液于4 ℃，14 000 rpm條件下離心10 min，吸取上清液，用去離子水稀釋5倍后，取100μL樣品稀釋液加到3.9 mL的DPPH·甲醇溶液中，避光反應(yīng)30 min后在517 nm波長處測定吸光度(As)，以蒸餾水做空白對(duì)照，測得其吸光度(Ac)，自由基清除率計(jì)算方法同式(1).三種獼猴桃以同樣的方法處理，并且每組做三次平行.

1.2.2 ABTS+·自由基清除能力的測定[11,12]

(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

準(zhǔn)確稱取2 mg抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)品并溶解于5 mL去離子水，得到濃度為0.4 mg/mL的抗壞血酸溶液.再分別用去離子水稀釋成0.4 mg/mL、0.3 mg/mL、0.2 mg/mL、0.1 mg/mL、0.05 mg/mL、0.01 mg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液.稱取ABTS+·0.096 0 g和過硫酸鉀0.0116 g，用去離子水定容至25 mL容量瓶中，用錫箔紙包裹搖勻，室溫避光條件下反應(yīng)12～16 h，得到ABTS+·儲(chǔ)備液.使用前用10 mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH=7.4)稀釋，其在734 nm處的吸光度為0.700(±0.020)，作為ABTS+·工作液.準(zhǔn)確吸取30μL抗壞血酸稀釋液與2970μL ABTS+·工作液充分混勻.記錄時(shí)間，反應(yīng)10 min后，734 nm處測定吸光度值(As)，以水作為空白對(duì)照，測定其吸光度(Ac).ABTS+·自由基清除能力計(jì)算方法同1.2.1中公式(1).

(2)樣品清除ABTS+·自由基能力的測定

獼猴桃樣品前處理同1.2.1，得到的上清液稀釋10倍.準(zhǔn)確吸取30 μL樣品稀釋液與2 970μL的ABTS+·工作液充分混勻，反應(yīng)10 min后在734 nm處測吸光度值(As)，以蒸餾水做空白對(duì)照測得吸光度(Ac)，自由基清除率計(jì)算方法同1.2.1中式(1).三種獼猴桃用同樣的方法處理，并且每組做三次平行.

1.2.3 羥自由基(·OH)清除能力的測定[13]

(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

準(zhǔn)確稱量4 mg抗壞血酸標(biāo)品，用10 mL去離子水溶解，得到0.4 mg/mL的抗壞血酸溶液.分別用去離子水稀釋成0.4 mg/mL、0.375 mg/mL、0.35 mg/mL、0.325 mg/mL、0.3 mg/mL、0.275 mg/mL、0.25 mg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液.加不同濃度的抗壞血酸稀釋液于各離心管中，再依次加入1 mL FeSO4(9 mmol/L)溶液，1 mL水楊酸-乙醇(9 mmol/L)溶液，最后加入1 mL的H2O2(8.8 mmol/L)啟動(dòng)反應(yīng)，充分混勻后在37 ℃條件下水浴20 min，以水為參比在510 nm處測吸光度(As)，以蒸餾水做空白對(duì)照，測其吸光度值(Ac)，羥基自由基(·OH)清除率計(jì)算方法同1.2.1中公式(1).

(2)樣品中羥基自由基(·OH)清除能力的測定

從-20 ℃冰箱取出樣品獼猴桃，樣品前處理方法同1.2.1得到上清液，稀釋10倍.加1 mL樣品于10 mL離心管中，再依次加入1 mL的FeSO4(9 mmol/L)，1 mL水楊酸-乙醇(9 mmol/L)，最后加入1 mL的H2O2(8.8 mmol/L)啟動(dòng)反應(yīng)，充分混勻后在37 ℃水浴鍋內(nèi)水浴20 min，冷卻，以水為參比在510 nm處測吸光度(As)，以蒸餾水做空白對(duì)照，測其吸光度值(Ac)，計(jì)算方法同1.2.1中公式(1).三種獼猴桃用同樣的方法處理，并且每組做三組平行.

1.2.4 Cu2+螯合能力的測定[14,15]

(1)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作

稱取100 mg抗壞血酸，加入10 mL去離子水溶解，得到濃度為10 mg/mL的抗壞血酸溶液.用去離子水稀釋成10 mg/mL，8 mg/mL，6 mg/mL，5 mg/mL，2 mg/mL，1 mg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液.在通風(fēng)櫥下，佩戴一次性手套，用移液槍準(zhǔn)確吸取1 mL吡啶(10%)試劑于10 mL試管中，分別加入20μL鄰苯二酚紫試劑(0.1%)和1 mLCuSO4溶液(2 mmol/L)充分混勻，再加入1 mL不同濃度的抗壞血酸溶液渦旋，測定632 nm處吸光度值，同時(shí)做空白對(duì)照.Cu2+螯合能力(%)計(jì)算公式如式(2)所示：

(2)

式(2)中：As為試驗(yàn)組值；Ac為空白組值.

(2)樣品Cu2+螯合能力的測定

取出樣品獼猴桃，解凍1 h后打碎、抽濾得濾液，將濾液在4 ℃，14 000 rpm條件下離心10 min，吸取上清液為樣品液.加1 mL吡啶(10%)試劑于10 mL試管中，依次加入20μL鄰苯二酚紫試劑(0.1%)和1 mL CuSO4溶液(2 mmol/L)，1 mL樣品液渦旋混勻，測定632 nm處吸光度值(As).以1 mL純水作為空白對(duì)照，測定其吸光度(Ac).Cu2+螯合能力(%)用式(2)計(jì)算.三種獼猴桃用相同的方法處理，每組做三次平行.

1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有試驗(yàn)均重復(fù)三次，計(jì)算平均值，試驗(yàn)數(shù)據(jù)表示：平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差.

2 結(jié)果與討論

對(duì)于獼猴桃的抗氧化活性，發(fā)揮作用的主要是其含抗壞血酸和多酚等抗氧化劑[16].因反應(yīng)機(jī)理的不同特性、組成的復(fù)雜性，每種方法有一定的局限性，水果、蔬菜和其他植物的抗氧化活性不能僅通過一種自由基清除實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)估[17].從方法的角度而言，DPPH·、ABTS+·和·OH自由基清除試驗(yàn)被推薦為評(píng)定水果、果汁和蔬菜提取物自由基清除活性的簡單而準(zhǔn)確的方法.因此，本實(shí)驗(yàn)以DPPH·、ABTS+·和·OH自由基清除能力為指標(biāo)，對(duì)不同獼猴桃品種的抗氧化活性進(jìn)行研究.

2.1 不同獼猴桃品種清除DPPH·自由基能力

2.1.1 DPPH·自由基清除率的變化趨勢

DPPH·是一種有機(jī)自由基，自由基清除劑能使DPPH·溶液褪色，通過吸光度的變化可對(duì)其進(jìn)行定量分析[18].試驗(yàn)結(jié)果如圖1(a)所示，在DPPH·自由基清除實(shí)驗(yàn)中不同濃度的抗壞血酸都具有一定的自由基清除能力，并且自由基清除率在抗壞血酸濃度小于0.2 mg/mL范圍內(nèi)隨著抗壞血酸濃度的增高而增加,但是當(dāng)抗壞血酸濃度高于0.2 mg/mL后，DPPH·自由基清除率趨于平緩.本實(shí)驗(yàn)采用線性變化范圍內(nèi)的7個(gè)濃度點(diǎn)(0.025～0.2 mg/mL)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得相關(guān)系數(shù)R2=0.997，如圖1(b)所示，回歸方程為：

y=4.798x+0.020 7

(3)

式(3)中：y—自由基清除率；x—抗壞血酸濃度，mg/mL.

因此抗壞血酸濃度在0.025～0.2 mg/mL范圍內(nèi)與DPPH·自由基清除率具有良好的線性關(guān)系.

采用相同的實(shí)驗(yàn)方法，依照標(biāo)準(zhǔn)曲線求得不同品種的獼猴桃果實(shí)DPPH·自由基清除率，如圖1(b)所示，其中紅、藍(lán)和黃色分別代表海沃德、啞特及徐香三個(gè)品種的獼猴桃果實(shí).

由圖1可知，三個(gè)品種獼猴桃果實(shí)的DPPH·自由基清除率的范圍在20%～80%之間.其中海沃德樣品的DPPH·自由基清除率為24.88%，代入式(3)得到對(duì)應(yīng)的抗壞血酸濃度為0.05 mg/mL；同理，啞特樣品的DPPH·自由基清除率和對(duì)應(yīng)的抗壞血酸濃度分別為52.23%和0.10 mg/mL；徐香樣品的DPPH·自由基清除率和對(duì)應(yīng)的抗壞血酸濃度為69.88%和0.14 mg/mL.結(jié)果表明不同品種獼猴桃果實(shí)對(duì)DPPH·自由基的清除率差異較大，且DPPH·自由基清除率強(qiáng)弱順序?yàn)樾煜?啞特>海沃德.

(a)DPPH·自由基清除率隨抗壞血酸濃度變化趨勢

(b)DPPH·自由基清除率標(biāo)準(zhǔn)曲線圖1 不同濃度抗壞血酸對(duì)DPPH·自由基清除

2.1.2 不同品種獼猴桃DPPH·自由基清除能力

將不同品種獼猴桃果實(shí)的自由基清除率轉(zhuǎn)換為抗壞血酸當(dāng)量，抗壞血酸當(dāng)量越大，說明抗氧化能力越強(qiáng)[19].抗壞血酸當(dāng)量的計(jì)算公式為式(4)，結(jié)果如圖2所示.

圖2 不同品種獼猴桃清除DPPH·自由基能力(*表示具有顯著性差異，p<0.05)

由圖2可見，海沃德、啞特、徐香品種的抗壞血酸當(dāng)量分別為0.45μmol/100 g、0.99μmol/100 g、1.34μmol/100 g.啞特的抗壞血酸當(dāng)量是海沃德的2.20倍，徐香的抗壞血酸當(dāng)量是海沃德的2.98倍，徐香的抗壞血酸當(dāng)量是啞特的1.34倍.因此，三個(gè)品種獼猴桃果實(shí)的抗氧化能力順序是徐香>啞特>海沃德，此結(jié)論與對(duì)抗壞血酸濃度測定結(jié)論一致.用T-text進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果表明三個(gè)品種兩兩之間均具有顯著性差異.

抗壞血酸當(dāng)量計(jì)算公式如下：

(4)

式(4)中：A—通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算的抗壞血酸濃度，mg/mL；B—加入樣品的體積，mL；C—樣品的稀釋倍數(shù)；D—抗壞血酸當(dāng)量，μmol/100 g；E—抗壞血酸的相對(duì)分子量.

2.2 不同品種獼猴桃清除ABTS+·自由基能力

2.2.1 ABTS+·自由基清除率的變化趨勢

在ABTS+·自由基清除實(shí)驗(yàn)中不同濃度的抗壞血酸都具有一定的自由基清除能力.由圖3(a)可知，在抗壞血酸濃度小于0.4 mg/mL的范圍內(nèi)自由基清除率隨著抗壞血酸濃度的增高而增加，但是當(dāng)其濃度大于0.4 mg/mL時(shí)，ABTS+·自由基清除率變化趨于平緩.

采用線性變化范圍內(nèi)的5個(gè)抗壞血酸濃度點(diǎn)(0.05～0.4 mg/mL)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖3(b)所示，回歸方程為：

y=1.79x+0.065 6

(5)

式(5)中：y—自由基清除率；x—抗壞血酸濃度，mg/mL.

不同品種的獼猴桃果實(shí)的ABTS+·自由基清除率如圖3(b)所示，其中紅、藍(lán)和黃色分別代表海沃德、啞特、徐香.由圖3可知，三個(gè)品種的獼猴桃果實(shí)的ABTS+·自由基清除率的范圍在20%～40%之間.其中海沃德樣品的ABTS+·自由基清除率為22.45%，代入式(5)得到對(duì)應(yīng)的抗壞血酸濃度為0.08 mg/mL；同理，啞特樣品的ABTS+·自由基清除率和抗壞血酸濃度分別為35.62%和0.16 mg/mL；徐香樣品的ABTS+·自由基清除率和對(duì)應(yīng)的抗壞血酸濃度為38.05%和0.17 mg/mL.因此，不同品種獼猴桃果實(shí)的ABTS+·自由基清除率差異較大，且徐香品種的自由基清除率最高，綜上得對(duì)ABTS+·自由基清除率順序依次為徐香>啞特>海沃德.

(a)ABTS+·自由基清除率隨抗壞血酸濃度變化趨勢

(b)ABTS+·自由基清除率標(biāo)準(zhǔn)曲線圖3 ABTS+·自由基清除率的變化趨勢

2.2.2 不同品種獼猴桃清除ABTS+·自由基能力

方法同上，用抗壞血酸當(dāng)量表示獼猴桃的抗氧化能力.抗壞血酸當(dāng)量的計(jì)算公式同2.1.2中式(4)，結(jié)果如圖4所示.海沃德、啞特、徐香三個(gè)品種樣品的抗壞血酸當(dāng)量分別為0.25μmol/100g、0.46μmol/100g、0.51μmol/100g，對(duì)所得數(shù)據(jù)采用T-text進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果表明三個(gè)品種兩兩之間均具有顯著性差異，對(duì)其抗壞血酸當(dāng)量測定得到三個(gè)品種獼猴桃清除ABTS+·自由基能力順序從大到小為徐香>啞特>海沃德.

圖4 不同品種獼猴桃清除ABTS+·自由基能力(*表示具有顯著性差異，p<0.05)

2.3 不同品種獼猴桃果實(shí)清除·OH自由基能力

2.3.1 ·OH自由基清除率的變化趨勢

由圖5(a)可知，隨著抗壞血酸(Vc)濃度的升高，對(duì)·OH自由基清除能力幾乎呈線性增加.但是當(dāng)Vc濃度高于0.4 mg/mL后，·OH自由基的清除率隨著濃度的升高逐漸趨于平穩(wěn).采用線性變化范圍的7個(gè)抗壞血酸濃度點(diǎn)(0.25～0.4 mg/mL)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖5(b)所示，回歸方程為：

y=1.788x+0.123 5

(6)

式(6)中：y—·OH自由基清除率；x—抗壞血酸濃度，mg/mL.

三個(gè)品種的獼猴桃果實(shí)對(duì)·OH自由基清除率如圖5(b)所示，其中紅、色和黃色分別代表海沃德、啞特和徐香，三種樣品的·OH自由基清除率范圍在60%～85%之間.其中海沃德樣品的·OH自由基清除率為61.60%，由2.1.2中式(4)求得對(duì)應(yīng)的抗壞血酸濃度為0.28 mg/mL；同樣方法得到啞特樣品的·OH自由基清除率及對(duì)應(yīng)的抗壞血酸濃度為71.36%和0.33 mg/mL；徐香樣品為81.47%和0.39 mg/mL.結(jié)果表明，不同品種獼猴桃果實(shí)對(duì)·OH自由基的清除率差異較大，三個(gè)品種對(duì)·OH自由基清除率強(qiáng)弱順序?yàn)樾煜?啞特>海沃德.

(a)·OH自由基清除率隨抗壞血酸濃度變化趨勢

(b)·OH自由基清除率標(biāo)準(zhǔn)曲線圖5 ·OH自由基清除率的變化趨勢

2.3.2 不同品種獼猴桃果實(shí)清除·OH自由基能力

對(duì)抗壞血酸當(dāng)量進(jìn)行計(jì)算，公式同2.1.2中式(4)，結(jié)果如圖6所示.海沃德品種、啞特品種、徐香的抗壞血酸當(dāng)量分別為26.10μmol/100 g、31.22μmol/100 g、36.58μmol/100 g.啞特的抗壞血酸當(dāng)量是海沃德的1.20倍，徐香的抗壞血酸當(dāng)量是海沃德的1.40倍，徐香的抗壞血酸當(dāng)量是啞特的1.17倍.三個(gè)品種獼猴桃果實(shí)的抗壞血酸當(dāng)量相差倍數(shù)較小，其中徐香獼猴桃果實(shí)的抗壞血酸當(dāng)量最高，海沃德獼猴桃果實(shí)的最低.三個(gè)品種獼猴桃果實(shí)的抗氧化能力由強(qiáng)到弱分別是徐香>啞特>海沃德.采用T-text對(duì)三個(gè)品種之間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異顯著.

圖6 不同品種獼猴桃對(duì)·OH自由基清除率能力(*表示具有顯著性差異，p<0.05)

2.4 不同品種獼猴桃果實(shí)的Cu2+螯合能力

2.4.1 Cu2+螯合能力變化趨勢

抗壞血酸對(duì)銅離子螯合有明顯的趨勢性，隨著抗壞血酸濃度的提高，銅離子的螯合能力越來越強(qiáng).采用線性變化范圍的6個(gè)抗壞血酸濃度點(diǎn)(1 ～ 10 mg/mL)的為x軸，Cu2+螯合能力為y軸繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.得回歸方程：

y=0.032 4x+0.551 9

(7)

式(7)中：y—Cu2+螯合能力；x—抗壞血酸濃度，mg/mL.

由圖7(b)可知，不同濃度抗壞血酸對(duì)Cu2+螯合能力不同，在所選的抗壞血酸濃度范圍內(nèi)，抗壞血酸濃度與Cu2+螯合能力呈現(xiàn)明顯的線性關(guān)系.求得海沃德對(duì)銅離子的螯合能力和抗壞血酸濃度分別為57.6%和0.73 mg/mL，啞特樣品為65.1%和3.06 mg/mL，徐香樣品為77.3%和6.83 mg/mL.綜上，三個(gè)品種獼猴桃果實(shí)對(duì)Cu2+的螯合能力強(qiáng)弱順序是徐香>啞特>海沃德.

(a)對(duì)Cu2+螯合能力隨抗壞血酸濃度變化趨勢

(b)Cu2+螯合能力標(biāo)準(zhǔn)曲線圖7 不同抗壞血酸濃度對(duì)Cu2+螯合能力變化趨勢

2.4.2 不同品種獼猴桃果實(shí)的Cu2+螯合能力

同上，結(jié)果如圖8所示，海沃德、啞特、徐香的抗壞血酸當(dāng)量分別為0.73μmol/100 g、3.06μmol/100 g、6.83μmol/100 g.啞特的抗壞血酸當(dāng)量是海沃德的4.19倍，徐香的抗壞血酸當(dāng)量是海沃德的9.36倍，徐香的抗壞血酸當(dāng)量是啞特的2.23倍.再次驗(yàn)證三個(gè)品種獼猴桃果實(shí)對(duì)Cu2+的螯合能力強(qiáng)弱順序是徐香>啞特>海沃德.采用T-text對(duì)三個(gè)品種之間進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，差異顯著.

圖8 不同品種獼猴桃對(duì)Cu2+的螯合能力(*表示具有顯著性差異，p<0.05)

3 結(jié)論

結(jié)果表明，在一定抗壞血酸濃度范圍內(nèi)，隨著抗壞血酸濃度的增加，抗壞血酸清除三種自由基(DPPH·、ABTS+·和·OH)的能力以及銅離子螯合能力會(huì)增強(qiáng).到達(dá)一定濃度后，趨勢會(huì)慢慢趨于平緩.此外，海沃德、啞特、徐香三種獼猴桃對(duì)·OH自由基的清除能力是最強(qiáng)的，其次是銅離子的螯合能力，最弱的是對(duì)DPPH·和ABTS+·自由基的清除能力.

三個(gè)品種獼猴桃之間也有顯著差異，徐香獼猴桃DPPH·自由基清除能力是海沃德獼猴桃的2.98倍，是啞特獼猴桃的1.34倍.徐香獼猴桃ABTS+·自由基清除能力是海沃德獼猴桃的2.02倍，是啞特獼猴桃的1.10倍.徐香獼猴桃·OH自由基清除能力是海沃德獼猴桃的1.40倍，是啞特獼猴桃的1.17倍.徐香獼猴桃的銅離子螯合能力是海沃德獼猴桃銅離子螯合能力的9.35倍，是啞特獼猴桃的2.23倍.

從以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果中可以得知，樣品的抗氧化能力有顯著差異，三個(gè)品種的抗氧化能力順序依次為徐香>啞特>海沃德.該研究為獼猴桃資源的進(jìn)一步開發(fā)和利用提供了技術(shù)支撐,也為篩選天然高效的藥物和食品抗氧化劑奠定了基礎(chǔ).