雅安藏茶茶褐素對(duì)60Co γ輻射損傷的防護(hù)作用

許靖逸 李祥龍 李 解 吳家樂 唐 磊 郭承義 何春雷

1（四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝學(xué)院 成都 611830）

2（四川省茶業(yè)科學(xué)與工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 成都 611830）

3（四川省藏茶茶業(yè)工程技術(shù)研究中心 雅安 625014）

4（四川省雅安義興藏茶有限公司 雅安 625014）

雅安藏茶茶褐素對(duì)60Co γ輻射損傷的防護(hù)作用

許靖逸1,2,3李祥龍1,2李 解1,2吳家樂1,2唐 磊1,2郭承義4何春雷1,2,3

1（四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 園藝學(xué)院 成都 611830）

2（四川省茶業(yè)科學(xué)與工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 成都 611830）

3（四川省藏茶茶業(yè)工程技術(shù)研究中心 雅安 625014）

4（四川省雅安義興藏茶有限公司 雅安 625014）

通過建立60Co γ輻射損傷小鼠模型，探究雅安藏茶茶褐素對(duì)60Co γ輻射損傷的防護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)選取48只雄性SPF級(jí)小鼠，隨機(jī)分成正常對(duì)照組、輻射對(duì)照組、陽性對(duì)照組，以及雅安藏茶茶褐素低、中、高三個(gè)劑量組，連續(xù)灌胃相應(yīng)受試樣品15 d，其中在灌胃第6 d，除正常對(duì)照組外，其余各組均進(jìn)行全身一次性劑量為5 Gy的60Co γ射線照射。第16 d稱量體重后，小鼠眼瞼取血、解剖后，測(cè)定其外周血細(xì)胞、骨髓脫氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid, DNA)含量、胸脾指數(shù)、肝臟組織總抗氧化能力等相關(guān)指標(biāo)。結(jié)果表明，與輻射對(duì)照組相比，雅安藏茶茶褐素能極顯著提高輻射損傷小鼠血液的白細(xì)胞(White Blood Cell, WBC)、血小板(Platelets, PLT)、淋巴細(xì)胞(Lymphocytes, LYM)數(shù)量以及血液超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)、過氧化氫酶

(Catalase, CAT)活性(p＜0.01)，極顯著增強(qiáng)小鼠肝臟組織的總抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity, T-AOC)、總超氧化物歧化酶(Total Superoxide Dismutase, T-SOD)活性(p＜0.01)，并使股骨骨髓DNA含量極顯著升高

(p＜0.01)；同時(shí)，使肝臟丙二醛(Malondialdehyde, MDA)含量極顯著降低(p＜0.01)，明顯緩解了小鼠免疫器官胸脾的萎縮。其效果隨茶褐素濃度而提高，其中高劑量茶褐素的效果達(dá)到或優(yōu)于陽性藥物的效果。結(jié)果表明，茶褐素對(duì)60Co γ照射的輻射損傷小鼠的抗氧化系統(tǒng)和造血系統(tǒng)有較好的防護(hù)作用，以高劑量的效果最好。

茶褐素，雅安藏茶，60Co γ輻射，抗氧化系統(tǒng)，造血系統(tǒng)，防護(hù)作用

雅安藏茶屬于我國特有茶類，其制作工藝包括殺青、4次渥堆發(fā)酵、篩分、蒸茶和蹓茶等18道工藝[1]。在濕熱作用和外源酶的轉(zhuǎn)化下，形成了茶黃素、茶紅素、茶褐素、茶多糖、氨基酸和蛋白質(zhì)、磷脂和膽堿微量元素等多種成分。研究表明，雅安藏茶含有較多茶褐素，茶褐素含量與雅安藏茶保健功效呈顯著的正相關(guān)[2]。茶褐素是一類能溶于水而不溶于乙酸乙酯和正丁醇的褐色色素，也是一類十分復(fù)雜的高聚物，除含有多酚氧化聚合物外，還含有氨基酸、糖類等結(jié)合物，含有羥基、羧基、烷基和苯環(huán)類似物，具有較強(qiáng)的耐氧化性。目前，茶褐素的研究多集中在減肥、降脂、抗氧化等方面[3?6]，何英姿[7]以六堡茶為原料，對(duì)其水提物經(jīng)氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取后得到茶褐素提取物，證明該提取物對(duì)羥自由基的清除率高達(dá)74%，對(duì)亞硝基的清除率高達(dá)73%，對(duì)超氧自由基的清除率達(dá)到60%以上，且清除羥自由基的能力高于維生素C。周向軍[8]以烏龍茶為原料，采用試劑提取法得到茶褐素提取物，證明其對(duì)羥自由基、超氧陰離子自由基和DPPH (2,2-diphenyl-1-picryl-hydrazyl-hydrate)自由基均有一定的清除效果，并且隨著提取物濃度的增大清除率也增加，與同類提取物相比具有明顯優(yōu)勢(shì)。大量文獻(xiàn)表明[8?9]，茶褐素具有很好的抗氧化的保健作用，也間接地表明茶褐素能夠具有很好的防輻射作用功效，但其抗輻射及輻射引起的損傷方面的研究鮮見報(bào)道，動(dòng)物輻射模型實(shí)驗(yàn)尚未見報(bào)道。

本研究以雅安藏茶為材料，擬通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，構(gòu)建小鼠60Co γ輻射損傷模型，對(duì)其中的茶褐素進(jìn)行研究，探究雅安藏茶抗輻射作用的功效成分，探究茶褐素對(duì)輻射損傷抗氧化系統(tǒng)及造血系統(tǒng)的防護(hù)作用，為輻射防治提供新思路，并為雅安藏茶的開發(fā)利用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料與儀器

供試動(dòng)物：試驗(yàn)選擇6?8周齡的雄性清潔級(jí)昆明小白鼠48只，體重22?24 g，購自于成都達(dá)碩生物科技有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（川）2013-24。

材料與試劑：雅安藏茶由雅安義興藏茶有限公司提供，材料選用一芽四、五葉鮮葉原料（2014年產(chǎn)）；正丁醇、三氯甲烷、乙酸乙酯、冰醋酸(100%)等所有化學(xué)試劑均為分析純，總抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity, T-AOC)，總超氧化物歧化(Total Superoxide Dismutase, T-SOD)，超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase, SOD)，肝臟丙二醛(Malondialdehyde, MDA)，過氧化氫酶(Catalase, CAT)，總蛋白試劑盒購自南京建成生物所，5 Gy小劑量60Co γ射線輻照技術(shù)由四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)核技術(shù)研究所提供。

主要儀器與設(shè)備：BS-124S型電子天平（上海），HH-6型數(shù)顯衡溫水浴鍋（常州），RE-2000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海）V-1600 可見光分光光度計(jì)（上海），UV-1800紫外分光光度計(jì)（上海），2-16K型高速冷凍離心機(jī)（日本），DZF-6090型真空干燥箱（上海），DHG-9245A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海），60Co γ輻射源由四川省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生核所提供。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 茶褐素的提取[10]

雅安藏茶按1:20加入沸蒸餾水中，浸提30 min，再用同樣方法浸提兩次，合并三次水浸提液，用4層紗布過濾，將所得濾液再進(jìn)行抽濾，將抽濾液在50?60 oC下減壓濃縮至一定體積，濃縮冷卻得濃縮液。用等體積正丁醇放入分液漏斗中萃取，振蕩3min，萃取三次，余下水相用等體積氯仿萃取三次，水相用等體積乙酸乙酯萃取三次，合并水相，50?60oC下減壓濃縮至粘稠狀，70 oC真空干燥得茶褐素制品，實(shí)驗(yàn)測(cè)得茶褐素提取率為14.86%，通過380 nm分光光度法[11]測(cè)定得到提取物茶褐素含量為17.86%。

1.2.2 動(dòng)物的分組及處理

實(shí)驗(yàn)將48只SPF級(jí)雄性小白鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)5 d后，隨機(jī)分為6組：Ⅰ為正常對(duì)照組、Ⅱ?yàn)檩椛鋵?duì)照組、Ⅲ為陽性對(duì)照組、Ⅳ為茶褐素低劑量組、Ⅴ為茶褐素中劑量組、Ⅵ為茶褐素高劑量組，并采取灌胃的方式給藥。茶褐素的灌胃劑量是根據(jù)日本東京桑野研究[12?13]推薦成人每日用茶劑量與體重比0.1 g·kg?1換算而成，即小鼠的灌胃劑量為人體的5倍，而測(cè)定茶褐素的含量為雅安藏茶的8%?10%，故灌胃小鼠茶褐素的低劑量為50mg·kg?1·d?1，再分別設(shè)定兩倍(100mg·kg?1·d?1)、4倍(200 mg·kg?1·d?1)的中高劑量組。其中，組Ⅰ?Ⅲ給予蒸餾水，其余組給予相應(yīng)的受試樣品，共給藥15 d。除正常組外，其余各組連續(xù)灌胃5 d后，第6 d各組均用60Co γ射線進(jìn)行一次全身照射，總劑量為5 Gy，劑量率為0.6Gy·min?1，照射后仍然繼續(xù)給予受試物到第15d。Ⅲ組在輻射前30 min 腹腔注射氨磷汀150mg·kg?1[14]。

開始灌胃后第16 d，所有組小鼠全部進(jìn)行眼瞼采血，測(cè)定白細(xì)胞(White Blood Cell, WBC)，采血后取小鼠一側(cè)股骨，測(cè)量小鼠骨髓細(xì)胞DNA含量，取肝臟，于?40 oC冷凍保存待用。

1.2.3 外周血細(xì)胞和骨髓DNA含量測(cè)定[15]

采集的血樣存放于抗凝管中，用血球分析儀檢測(cè)血液中WBC、血小板(Platelets, PLT)和淋巴細(xì)胞(Lymphocytes, LYM)的含量。

DNA含量的測(cè)定方法[16]具體為：剝離小鼠右側(cè)股骨，除凈組織及污血；剪斷第二股骨后稱量股骨重，用10 mL 0.005 mol·L?1CaCl2沖洗全部骨髓至離心管中，反復(fù)沖洗至股骨為白色為止，置于冰箱中4 oC放置30 min，2 500 r·min?1離心15 min，棄上清液，加入5 mL 0.002 mol·L?1HCIO4充分混勻，90 oC水浴15 min，流水冷卻，3 500 r·min?1離心10 min，紫外分光光度計(jì)測(cè)定其上清液在268 nm處的吸光度(Optical density, OD)值A(chǔ)。結(jié)果為：

式中：ω為DNA質(zhì)量分?jǐn)?shù)；A268為268 nm處DNA吸光度值；WF為股骨重，g。

1.2.4 小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的測(cè)定

處死后，剖腹取各小鼠胸腺和脾臟，除去脂肪及血污，濾紙吸干，準(zhǔn)確稱取其重量，按式(2)計(jì)算相應(yīng)的臟器指數(shù)：

式中：IO為臟器指數(shù)，%；WO為臟器重量，g；W為體重，g。

1.2.5 小鼠肝臟T-AOC、T-SOD活性及MDA含量

測(cè)定[17]

參照試劑盒方法測(cè)定各組小鼠肝臟T-AOC、T-SOD活性及MDA的含量。

1.3 數(shù)據(jù)記錄與處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用SPSS 17.0 軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Standard Error, SE)表示，多組比較采用單因素ANOVA方差分析，不同劑量組間與對(duì)照組的比較采用方差分析，檢驗(yàn)水平a=0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 受試物對(duì)60Co γ輻射小鼠血液白細(xì)胞、血小板和淋巴細(xì)胞的影響

由表1可以看出，各組小鼠經(jīng)60Co γ射線輻射后，小鼠血液WBC、PLT、LYM含量均明顯下降，說明小鼠經(jīng)60Co γ輻射后其造血功能降低；但灌胃受試樣品各組小鼠血象細(xì)胞含量均不同程度高于輻射對(duì)照組，其中，茶褐素高劑量組小鼠WBC、PLT、 LYM含量均顯著性高于輻射對(duì)照組小鼠（p＜0.05或p＜0.01），且與陽性組相比，含量顯著性高于陽性組小鼠，其余指標(biāo)均與陽性組無明顯差異，表明雅安藏茶茶褐素能明顯保護(hù)60Co γ輻射后小鼠血液WBC、PLT、LYM，防止其含量下降，均能達(dá)到藥物防護(hù)作用效果。

表1 受試物對(duì)60Co γ輻射小鼠血液白細(xì)胞、血小板和淋巴細(xì)胞含量的影響Table1 Influence of Ya’an Tibetan teas on mouse serum WBC, PLT and LYM content after 60Co γ radiation.

注：**與正常對(duì)照組相比，差異極顯著(p＜0.01)；#與輻射對(duì)照組相比，差異顯著(p＜0.05)；##與輻射對(duì)照組相比，差異極顯著(p＜0.01)；△與陽性對(duì)照組相比，差異顯著(p＜0.05)；△△與陽性對(duì)照組相比，差異極顯著(p＜0.01)，下同

Notes: **Compared with normal control group, the extremely significant difference (p＜0.01); #Compared with radiation in the control group, significant difference (p＜0.05); ##Compared with radiation in the control group, the extremely significant difference (p＜0.01); △Compared with positive control group, significant difference (p＜0.05); △△Compared with positive control group, the extremely significant difference (p＜0.01).

2.2 受試物對(duì)60Co γ輻射小鼠胸脾指數(shù)及骨髓DNA含量的影響

表2是受試物對(duì)60Co γ輻射小鼠胸腺、脾臟指數(shù)和骨髓DNA含量的影響。由表2可知，與正常對(duì)照組相比，各組小鼠胸脾指數(shù)明顯減小，表明輻射可能對(duì)小鼠胸脾造成一定的損傷，導(dǎo)致小鼠胸脾器官萎縮。而灌胃茶褐素低、中、高劑量的各組小鼠其胸腺指數(shù)均極顯著地高于輻射模型組(p＜0.01)，其中，茶褐素高劑量組的保護(hù)效果接近正常對(duì)照組，表明高劑量組能明顯抵御輻射損傷。除此外，茶褐素中、高劑量組小鼠的脾臟指數(shù)顯著地高于輻射對(duì)照組(p＜0.05)，表明茶褐素能夠很好地防護(hù)60Co γ輻射對(duì)于小鼠胸脾器官的損傷，提高小鼠機(jī)體的免疫強(qiáng)度。輻射后，與正常對(duì)照組相比，各組小鼠骨髓DNA含量顯著性減少(p＜0.05)，表明輻射對(duì)于損傷小鼠骨髓DNA含量有一定的影響，從而可能間接影響小鼠的造血能力。與輻射對(duì)照組相比，茶褐素低、中、高劑量均能極顯著地提高輻射損傷小鼠的骨髓DNA含量(p＜0.05)，表明茶褐素對(duì)輻射損傷小鼠造血能力有一定防護(hù)作用。

表2 受試物對(duì)60Co γ輻射小鼠胸腺、脾臟指數(shù)和骨髓DNA含量的影響Table2 Influence of Ya’an Tibetan teas on mouse thymus index, spleen index and bone marrow DNA content after 60Co γ radiation.

2.3 受試物對(duì)60Co γ輻射小鼠血清中的抗氧化酶活性的影響

表3是受試物對(duì)60Co γ輻射小鼠血清中CAT酶和SOD酶活性的影響。由表3可知，與正常對(duì)照組相比，受輻射照射的影響，各組小鼠血清中CAT和SOD酶活性都極顯著下降(p＜0.05)，灌胃茶褐素后，茶褐素低、中、高劑量組小鼠血清中CAT和SOD活性均極顯著地高于輻射對(duì)照組(p＜0.01)，表明茶褐素能明顯保護(hù)輻射損傷小鼠血液CAT和SOD酶活性，且存在一定的劑量關(guān)系，以高劑量效果最好，且恢復(fù)效果與正常小鼠無明顯差異。

表3 受試物對(duì)60Co γ輻射小鼠血清中CAT酶和SOD酶活性的影響Table3 Influence of Ya’an Tibetan teas on mouse serum CAT and SOD enzymatic activity after 60Co γ radiation.

2.4 受試物對(duì)60Co γ輻射小鼠肝臟抗氧化酶及MDA含量的影響

由表4可知，受輻射照射影響，各組小鼠的T-SOD、T-AOC活性均極顯著低于正常對(duì)照組。而茶褐素低、中、高組T-SOD和T-AOC活性均有極顯著性高于輻射對(duì)照組(p＜0.01)，表明茶褐素能保護(hù)輻射小鼠肝臟T-SOD、T-AOC的活性。與陽性對(duì)照組相比，茶褐素對(duì)這三個(gè)指標(biāo)的作用已達(dá)到或優(yōu)于陽性藥物。MDA是脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的產(chǎn)物，具有一定的細(xì)胞毒性，會(huì)給肝臟造成一定損傷。由表4可知， 輻射后，輻射對(duì)照組小鼠肝臟中MDA含量極顯著增加(p＜0.01)，而灌胃茶褐素低、中、高劑量組小鼠肝臟MDA有極顯著的減少(p＜0.01)，其中，茶褐素高組小鼠與正常狀態(tài)小鼠無明顯差異，表明茶褐素能減少輻射損傷小鼠肝臟中MDA的積累，且呈一定的劑量效應(yīng)。以上結(jié)果表明，茶褐素能提高輻射損傷小鼠的T-SOD和T-AOC活性，減少M(fèi)DA含量積累，增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力，對(duì)60Co γ輻射損傷有一定的防護(hù)作用。

表4 受試物對(duì)60Co γ輻射小鼠肝臟T-AOC、T-SOD活性及MDA含量的影響Table4 Influence of Ya’an Tibetan teas on mouse liver T-AOC, T-SOD and MDA after 60Co γ radiation.

3 討論

抗氧化系統(tǒng)是一道保護(hù)機(jī)體免受自由基和活性氧氧化損傷的屏障，其主要由SOD、CAT等酶系構(gòu)成[18?19]。小鼠受到輻射照射后，血液中SOD和CAT以及肝臟中T-SOD、T-AOC等抗氧化性指標(biāo)明顯降低，表明經(jīng)輻射后小鼠機(jī)體的抗氧化能力降低，肝臟可能受到一定的損傷。而實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，茶褐素能顯著地提高輻射損傷小鼠血清中CAT、SOD和肝臟T-AOC、T-SOD活性，且存在一定的劑量關(guān)系。同時(shí)輻射使得小鼠機(jī)體產(chǎn)生大量的自由基作用于膜脂質(zhì)不飽和脂肪酸，積累了大量的MDA，故MDA的含量能夠間接反應(yīng)機(jī)體被自由基損傷的程度[20?21]。受輻射影響，肝臟中MDA含量較正常水平有一定的增加，而實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，茶褐素能有效地減少小鼠肝臟MDA含量，且濃度越高效果越好，這也間接地印證了茶褐素能夠通過提高小鼠血液CAT、SOD和T-AOC、T-SOD的活性，增強(qiáng)機(jī)體中酶促體系，提高清除電離輻射產(chǎn)生的活性自由基[22]的能力，從而緩解脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，由此，肝臟MDA的含量顯著性減少。

造血系統(tǒng)是電離輻射的敏感靶器官之一，各系統(tǒng)原始血細(xì)胞均源自骨髓造血干細(xì)胞，它可以不斷自我復(fù)制為相同功能的同級(jí)細(xì)胞和不斷增殖分化為特定系統(tǒng)的下級(jí)細(xì)胞[23]，是維持機(jī)體正常造血、保障造血損傷后重建各類血細(xì)胞的主導(dǎo)細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，輻射后小鼠機(jī)體造血能力受到影響，血液中WBC、PLT、LYM數(shù)量顯著減少，骨髓DNA含量顯著低于正常水平，推測(cè)血細(xì)胞的減少可能是因?yàn)檩椛渲苯悠茐牧藱C(jī)體骨髓DNA，進(jìn)而使得血細(xì)胞生成困難，數(shù)量減少。胸脾作為機(jī)體的免疫器官，具有一定的造血功能，同時(shí)也可能是輻射損傷的靶器官，小鼠經(jīng)過照射后，胸脾指數(shù)顯著下降。而實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，茶褐素低、中、高組WBC、PLT、LYM數(shù)量相比輻射對(duì)照組均有顯著增高，胸脾指數(shù)顯著性回升，骨髓DNA含量顯著性增加，其中茶褐素高劑量組作用功效最顯著，表明茶褐素對(duì)于輻射損傷小鼠造血能力具有很好的保護(hù)作用。

據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，茶褐素主要是由酚和羧酸類物質(zhì)構(gòu)成，具有酚性物質(zhì)特性[24]，其與自由基反應(yīng)能夠生成較為穩(wěn)定的酚氧自由基，因而能夠滅活自由基[25?26]，這也間接說明茶褐素具有清除自由基、提高機(jī)體抗氧化強(qiáng)度的能力。而實(shí)驗(yàn)中茶褐素具有提高輻射小鼠肝臟抗氧化強(qiáng)度和造血能力的功效，與研究發(fā)現(xiàn)的黑茶能減輕輻射對(duì)造血系統(tǒng)的損傷作用、提高照射小鼠肝組織和肺組織中SOD的活性和增強(qiáng)受照小鼠的整體免疫力作用的結(jié)果一致[14]，也間接表明茶褐素不僅具有一定的抗輻射作用，可能在黑茶抗輻射作用中也起著重要的作用，但由于茶褐素成分復(fù)雜，其對(duì)于輻射損傷保護(hù)作用的具體機(jī)理尚不清楚，有待進(jìn)一步研究。

綜上可以看出，60Co γ射線輻射會(huì)造成小鼠機(jī)體造血和抗氧化功能的下降，而雅安藏茶茶褐素能防止輻射損傷小鼠血液中WBC、PLT、LYM的數(shù)量下降，防護(hù)輻射損傷小鼠的胸脾器官，改善機(jī)體的免疫功能，增加小鼠骨髓DNA的含量，保護(hù)輻射損傷小鼠血清中CAT、SOD和肝臟T-AOC、T-SOD活性，降低肝臟MDA含量，且這些作用效果具有一定的劑量效應(yīng)。表明茶褐素對(duì)輻射損傷小鼠的抗氧化系統(tǒng)和造血系統(tǒng)有較好的防護(hù)作用，且以高劑量的茶褐素效果最佳。

1 謝雪嬌. 南路邊茶傳統(tǒng)制作工藝及其變化研究[J]. 康定民族師范學(xué)院學(xué)報(bào), 2009, 18(4): 22?28.

XIE Xuejiao. Study on the traditional craftsmanship and its change of the South Road border tea[J]. Journal of Kangding Nationality Teachers College, 2009, 18(4): 22?28.

2 張忠, 齊桂年, 李靜, 等. 四川邊茶加工過程中主要成分含量的變化[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2006, 34(11): 2515?2516, 2525.

ZHANG Zhong, QI Guinian, LI Jing, et al. Change of contents main components in production of Sichuan Brick tea[J]. Journal of Anhui Agricultural Sciences, 2006, 34(11): 2515?2516, 2525.

3 陳智雄, 齊桂年, 遲琳. 黑茶茶褐素類物質(zhì)的提取及對(duì)脂肪酸合酶的抑制研究進(jìn)展[J]. 福建茶葉, 2012, 2: 10?14.

CHEN Zhixiong, QI Guinian, CHI Lin. Research progress on extraction of theabrownines of dark tea and its inhibition on fatty acid synthase[J]. Fujian Tea, 2012, 2: 10?14.

4 Peng C, Wang Q, Liu H, et al. Effects of Zijuan pu-erh tea theabrownine on metabolites in hyperlipidemic rat feces by Py-GC/MS[J]. Journal of Analytical and Applied Pyrolysis, 2013, 104: 226?233.

5 王秋萍, 龔加順. “紫娟”普洱茶茶褐素對(duì)高脂飲食大鼠生長(zhǎng)發(fā)育的影響[J]. 茶葉科學(xué), 2012, 32(1): 87?94.

WANG Qiuping, GONG Jiashun. Effect of theabrownine extracted from “Zijuan” Pu-erh tea on growth of rats hyperlipidemia food[J]. Journal of Tea Science, 2012, 32(1): 87?94.

6 董文明, 譚超, 龔加順. 影響普洱茶茶褐素清除DPPH自由基效果的因素[J]. 農(nóng)業(yè)科學(xué)與技術(shù), 2013, 14(2): 317?323.

DONG Wenming, TAN Chao, GONG Jiashun. Factors influencing the effect of theabrownine in Pu-erh tea on scavenging DPPH radicals[J]. Agricultural Science and Technology, 2013, 14(2): 317?323.

7 何英姿, 逯釗琦, 陳艷芳, 等. 六堡茶茶褐素的提取工藝及其抗氧化活性研究[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2012, 40(35): 17301?17303.

HE Yingzi, LU Zhaoqi, CHEN Yanfang, et al. Extraction technology of theabrownine from Liubao tea and its antioxidant activity research[J]. Journal of Agricultural Science, 2012, 40(35): 17301?17303.

8 周向軍, 高義霞, 袁毅君, 等. 烏龍茶茶褐素提取工藝的優(yōu)化及抗氧化研究[J]. 中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志, 2011, 17(4): 36?40. DOI: 10.3969/j.issn.1005-9903.2011.04. 011.

ZHOU Xiangjun, GAO Yixia, YUAN Yijun, et al. Study on extraction technology and antioxidant activity of theabrownine from Oolong tea[J]. Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae, 2011, 17(4): 36?40. DOI: 10.3969/j.issn.1005-9903.2011.04.011.

9 He Y Z, Lu Z Q, Chen Y F, et al. Study on ectraction technology of theabrownine from Liubao tea and its antioxidant activity[J]. Agricultural Biotechnology, 2013, 2(4): 12?15.

10 徐甜. 四川邊茶茶褐素優(yōu)化提取及降血脂活性研究[D].成都: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué), 2010. XU Tian. Study on extraction technology and hypolipidemic activity of theabrownine from Sichuan border tea[D]. Chengdu: Sichuan Agricultual University, 2010.

11 黃意歡. 茶學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)[M]. 北京: 中國農(nóng)業(yè)出版社, 1997.

HUANG Yihuan. Tea experiment technology[M]. Beijing: China Agricultural Publishing House, 1997.

12 陳宗道, 周才瓊, 童華容. 茶葉化學(xué)工程[M]. 重慶: 西南師范大學(xué)出版社, 1999.

CHEN Zongdao, ZHOU Caiqiong, TONG Huarong. Tea chemical engineering[M]. Chongqing: Southwest Normal University Press, 1999.

13 于守洋. 中國保健食品的進(jìn)展[M]. 北京: 人民衛(wèi)生出版社, 2001: 958.

YU Shouyang. Progress of health food in China[M]. Beijing: People’s Health Publishing House, 2001: 958.

14 張廣惠, 吳紅英, 周則衛(wèi), 等. 湖南黑茶對(duì)小鼠輻射損傷的保護(hù)作用[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2016, 28: 775?780. DOI: 10.16333/j.1001-6880.2016.5.025.

ZHANG Guanghui, WU Hongying, ZHOU Zewei, et al. Protective effects of Hunan dark tea against radiation injuries in mice[J]. Journal of Research and Development of Natural Products, 2016, 28: 775?780. DOI: 10.16333/ j.1001-6880.2016.5.025.

15 周羽, 謝振飛, 耿艷艷, 等. 姜辣素對(duì)60Co γ輻照損傷小鼠抗氧化功能和造血系統(tǒng)的防護(hù)作用[J]. 核技術(shù), 2011, 34(9): 658?662.

ZHOU Yu, XIE Zhenfei, GENG Yanyan, et al. Protective effect of ginger on antioxidant function and hematopoietic system in mice irradiated with60Co γ radiation[J]. Nuclear Techniques, 2011, 34(9): 658?662.

16 田瓊, 楊嵐, 張發(fā)科. 血小板的四因子對(duì)小鼠急性放射損傷的防護(hù)作用與機(jī)理[J]. 中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志, 2000, 20(6): 416?418. DOI: 10.3760/cma.j.issn. 0254-5098.2000.06.013.

TIAN Qiong, YANG Lan, ZHANG Fake. Protective effect of platelet factor 4 on acute hematopoietic radiation injury in mice and its mechanism[J]. Chinese Journal of Radiological Medicine and Protection, 2000, 20(6): 416?418. DOI: 10.3760/cma.j.issn.0254-5098.2000.06. 013.

17 黃洲. 不同劑量姜辣素對(duì)輻射損傷小鼠的抗氧化保護(hù)作用的研究[D]. 成都: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué), 2010.

HUANG Zhou. Protective effects of different doses of ginger on antioxidant function in radiation-injured mice[D]. Chengdu: Sichuan Agricultural University, 2010.

18 Susan L. Evaluation of the role of xanthine oxidase in myocardial reperfusion injury[J]. Journal of Biological Chemistry, 1990, 265(12): 6656?6661.

19 段麗梅, 孫紅梅. 不同劑量茶多糖補(bǔ)充對(duì)運(yùn)動(dòng)大鼠心肌、血清自由基代謝的影響[J]. 山東體育學(xué)院學(xué)報(bào), 2011, 27(8): 52?56. DOI: 10.3969/j.issn.1006-2076.2011. 08.012.

DUAN Limei, SUN Hongmei. Influence of different dose polysaccharide isolated from tea on free radical in exercise rats’ cardiac muscle and blood serum[J]. Journal of Shandong Institute of Physical Education and Sports, 2011, 27(8): 52?56. DOI: 10.3969/j.issn.1006-2076.2011. 08.012.

20 王光義, 蔣乃昌, 賀志光. 頭針對(duì)腦梗塞患者血漿ET-1、MDA、NO的影響[J]. 中國針灸, 2001, 21(4): 241?242.

WANG Guangyi, JIANG Naichang, HE Zhiguang. Effects of scalp acupuncture on plasma ET-1, MDA and NO contents in the patient of cerebral infarction[J]. Chinese Acupuncture amp; Moxibustion, 2001, 21(4): 241?242.

21 關(guān)晨霞, 高希布, 梁杰. 針灸對(duì)亞急性衰老小鼠腦組織中一氧化氮、丙二醛、超氧化物歧化酶的影響[J]. 針刺研究, 2001, 26(2): 111?113. DOI: 10.3969/j.issn. 1000-0607.2001.02.007.

GUAN Chenxia, GAO Xibu, LIANG Jie. Effect of acupuncture on NO, MDA and SOD levels in cerebral tissues of sub-acutely aging mice[J]. Acupuncture Research, 2001, 26(2): 111?113. DOI: 10.3969/j.issn. 1000-0607.2001.02.007.

22 馬作峰, 姜瑞雪, 張六通, 等. 復(fù)合刺激對(duì)亞健康大鼠模型耐疲勞能力及血清SOD、MDA的影響[J]. 云南中醫(yī)中藥雜志, 2011, 32(8): 54?55.

MA Zuofeng, JIANG Ruixue, ZHANG Liutong, et al. Effects of compound stimulation on fatigue resistance and serum SOD and MDA in subhealthy rats[J]. Yunnan Journal of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica, 2011, 32(8): 54?55.

23 王東曉, 劉屏, 陳宜鴻, 等. 雞血藤活性成分SS8對(duì)骨髓抑制小鼠造血祖細(xì)胞增殖的作用[J]. 中國臨床康復(fù)雜志, 2005, 9(30): 254?257.

WANG Dongxiao, LIU Ping, CHEN Yihong, et al. Effect of SS8, an active component extracted from spatholobus suberectus Dunn, on the proliferation of hemopoeitic progenitor cells in marrow-depressed mice[J]. Chinese Journal of Clinical Rehabilitation, 2005, 9(30): 254?257.

24 秦誼, 龔加順, 張惠芳, 等. 普洱茶茶褐素提取工藝及理化性質(zhì)的初步研究[J]. 林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè), 2009, 29(5): 95?98.

QIN Yi, GONG Jiashun, ZHANG Huifang, et al. Extraction technology of theabrownine from Pu-erh tea and its physico-chemical properties[J]. Chemistry and Industry of Forest Products, 2009, 29(5): 95?98.

25 Chika N, Chen W, David O K. Protective effect of green

tea extract and tea polyphenols against the cytotoxicity of 1,4-naphthoquinone in isolated rat hepatocytes[J]. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry, 1997, 61(11): 1901?1905.

26 Chakravarty T N, Sopory S K. Blue light stimulation of cell proliferation and glyoxalase I activity in callus cultures of Amaranthus paniculatus[J]. Plant Science, 1998, 132(1): 63?69. DOI: 10.1016/S0168-9452(97)00 264-1.

Protective effect of extracted theabrownines from Ya’an Tibetan tea on radiation damage
in mice caused by60Co γ-ray

XU Jingyi1,2,3LI Xianglong1,2LI Jie1,2WU Jiale1,2TANG Lei1,2GUO Chengyi4HE Chunlei1,2,3
1(Horticulture College of Sichuan Agricultural University, Chengdu 611830, China)
2(Laboratory of Tea Science and Engineering, Chengdu 611830, China)
3(Research Center of Tibetan Tea Engineering Technology, Ya’an 625014, China)
4(Yi-xing Tibetan Tea Co., Ltd., Ya’an 625014, China)

XU Jingyi, female, born in 1980, graduated from Zhejiang University with a doctoral degree in 2011, associate professor, focusing on the

HE Chunlei, E-mail: 502927016@qq.com

Background: Ya’an Tibetan tea is one of the earliest dark teas in China. It has been drunk for more than a thousand years in the border, and has become a life tea and the main prescription for disease prevention of the ethnic minority. Purpose: The aim is to investigate the protective effect of the theabrownines (TB) of Ya’an Tibetan tea on the damage of60Co γ-ray radiation by establishing injury mice model caused by60Co γ radiation. Methods: 48 male SPF mice were randomly divided into normal control group, radiation model group, and positive control group, low, medium and high-dose groups of the TB of Ya’an Tibetan tea. The mice were continuously fed for 15 d. On the 6th day of intragastric administration, all of the mice except for the normal group were subjected to60Co γ-ray irradiation with a dose of 5 Gy. On the 16th day after weighing, the mice were taken for blood from eyeballs and anatomy. The related indicators of the number of peripheral blood cells, deoxyribonucleic acid (DNA) content of bone marrow, chest spleen index, and total antioxidant capacity of liver tissues were determined. Results: Compared with radiation control group, the TB of Ya’an Tibetan tea could significantly improve the number of white blood cells, platelets and lymphocytes in the blood of radiation-injured mice, and significantly enhance cell activity of blood superoxide dismutase and catalase (p＜0.01), and could significantly increase total antioxidant capacity (T-AOC), total superoxide dismutase (T-SOD) activity of liver tissue of the mice (p＜0.01) and bone marrow DNA content of the femur. At the same time, the content of malondialdehyde (MDA) in liver was significantly decreased (p＜0.01). TB could significantly relieve the atrophy of thymus and spleen gland of the immune organs of the mice, and the effect increases with the increase of TB concentration. The effect of high dose group is comparable to or better than the effect of positive drug. Conclusion: The TB of Ya’an Tibetan tea has a good protective effect on the antioxidant system and hematopoietic system of the mice irradiated with60Co γ-ray, where high-dose group has the most obvious effect.

TB, Ya’an Tibetan tea,60Co γ radiation, Antioxidant system, Hematopoietic system, Protection

TS272

10.11889/j.0253-3219.2017.hjs.40.040301

雅安市市校合作項(xiàng)目、雅安藏茶保健功能研究及成果應(yīng)用示范推廣(No.2016/09-2018/09)、四川省教育廳青年基金項(xiàng)目、四川邊銷茶的抗輻射作用研究(No.12ZA125)資助

許靖逸，女，1980年出生，2011年于浙江大學(xué)獲博士學(xué)位，副教授，主要從事茶葉生物化學(xué)和保健功效研究

何春雷，E-mail: 502927016@qq.com

2016-11-15，

2017-01-11

Supported by Municipal School Cooperation Projects of Ya’an City, Research on Healthy Function of Ya’an Tibetan Tea and Demonstration and Extension of Its Application (No.2016/09-2018/09), and Youth Fund Project of Department of Education of Sichuan Province, Study on the Anti-Radiation Effect of Sichuan Tea (No.12ZA125)

research on healthy function of Ya’an Tibetan tea

Received date: 2016-11-15, accepted date: 2017-01-11