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    斜生柵藻對重金屬離子的耐受性研究

    2019-11-22 14:33朱美玲孫玉帥張雪張玉苗
    綠色科技 2019年18期
    關(guān)鍵詞:蒸餾水恒溫培養(yǎng)基

    朱美玲 孫玉帥 張雪 張玉苗

    摘要:選取斜生柵藻作為研究對象,將其接種于含有低濃度無機鋅(Zn2+)(O~16mg/L)、六價鉻(Cr6+)(O~2mg/L)、無機銅(Cu2+)(0~4mg/L)的培養(yǎng)基中,研究了斜生柵藻的對不同重金屬離子的耐受性。結(jié)果表明:斜生柵藻對重金屬Zn2的生長耐受程度不超過8mg/L,并且O~4mg/L的添加量對斜生柵藻的生長沒有抑制作用,反而有促進生長的作用;斜生柵藻能耐重金屬Cr6+的濃度范圍是O~1.5mg/L;斜生柵藻能耐重金屬Cu2+的濃度范圍是O~2mg/L。

    關(guān)鍵詞:斜生柵藻;重金屬離子;Zn2+Cr6+;CU2+;生長耐受性

    中圖分類號:X52 文獻標識碼:A 文章編號:1674-9944(2019)18-0120-03

    1引言

    近年來,由于部分使用和生產(chǎn)重金屬工廠的違法排放以及農(nóng)民過量施用含重金屬的化肥和農(nóng)藥等,使大量含重金屬的污染物被排放到自然環(huán)境中,最終進入水環(huán)境,使重金屬含量遠高于環(huán)境容納量而造成污染。重金屬污染物通過各種途徑進入海洋后,最先對海洋中的微藻造成危害,微藻對重金屬離子極其敏感,其光合作用尤為敏感。微藻作為水體中食物鏈的初級生產(chǎn)者,在食物鏈的傳遞過程中極為重要。重金屬污染物對微藻的毒害作用可通過食物鏈進而對魚、蝦、貝等的健康造成威脅并在體內(nèi)對重金屬離子進一步積累,最終會影響人類的健康。因此研究重金屬離子對藻類生長代謝的影響可為環(huán)境污染的預防、控制和治理提供理論依據(jù)。

    斜生柵藻隸屬于綠藻門、綠藻綱、綠球藻目。細胞扁平,通常由4個細胞組成定形群體,也有的為4或8個組成,群體細胞排列成直線或略交互排列;細胞紡錘形,上下兩端逐漸尖細,群體兩側(cè)細胞的游離面有時凹人,有時突出,細胞壁平滑,4個細胞的群體寬12~34um,細胞長10~21um,寬3~9um。廣泛分布于湖泊、池塘、沼澤等靜水生境,以似親抱子繁殖。細胞內(nèi)含豐富的蛋白質(zhì),大量培養(yǎng)可作為蛋白質(zhì)的來源,近年來被人們廣泛研究。

    本研究選取重金屬Zn2+、Cr6+、Cu2+作為研究對象,采用水體培養(yǎng)方式,研究比較3種不同濃度重金屬對斜生柵藻生長的影響,為斜生柵藻的重金屬耐受性以及水污染生物監(jiān)測提供參考。

    2材料與方法

    2.1試劑與儀器

    斜生柵藻藻液;重鉻酸鉀;氯化鋅;氯化銅;氯化銨;二水氯化鈣;七水硫酸鎂;無水磷酸氫二鉀;無水磷酸二氫鉀;Tris;冰醋酸;土壤懸液;瓊脂粉;WFJ7200可見分光光度計;恒溫搖床;高壓滅菌鍋;pH計;電子分析天平。

    2.2實驗方法

    2.2.1TAP培養(yǎng)基的配置

    本實驗采用TAP培養(yǎng)基,分別量取10mL TAP鹽(稱取0.5g CaCI2·2H2O于小燒杯中,加入適量蒸餾水單獨溶解;稱取4g NHCI4、1g MgSO4·7H2O,加適量水溶解;將溶解好的兩種溶液混合后定容至100 mL)、8.33mL磷酸鹽(分別稱取1.879g K2HPO4.3H2O、0.726g KH2PO4,加適量水溶解,定容至100 mL)、10mL Tris(稱取24.2g Tris,加入適量蒸餾水溶解后,加入10mL冰醋酸,最后用蒸餾水定容至100mL)、5mL土壤懸液置于1000mL容量瓶中,用蒸餾水定容,調(diào)制pH值為7.1,配置為1L液體培養(yǎng)基;固體培養(yǎng)基按上述配置好后,向其中加入1.5%的瓊脂粉,置于高壓滅菌鍋中滅菌(121℃高壓滅菌21min)。

    2.2.2重金屬離子母液的配置

    稱取14.2mg重鉻酸鉀,溶于500mL蒸餾水中,配制成含六價鉻離子的母液,然后分別配制成鉻離子質(zhì)量濃度為0.5、1.0、1.5、2.0mg/L梯度系列。每種濃度各3瓶,每瓶含培養(yǎng)液100mL、處于對數(shù)生長期的藻液10mL,置于恒溫搖床23℃、120r/min、光暗比12h:12h培養(yǎng),并測定初始OD540值。

    稱取350mg硫酸鋅,溶于500mL蒸餾水中,配制成鋅離子的母液,然后分別配制成鋅離子質(zhì)量濃度為2.0、4.0、8.0、16.0mg/L梯度系列。每種濃度各三瓶,每瓶含培養(yǎng)液100mL,處于對數(shù)生長期的藻液10mL,置于恒溫搖床23℃、120r/rain、光暗比12h:12h培養(yǎng)。并測定初始ODs4。值。

    稱取78.5mg硫酸銅,溶于500mL蒸餾水中,配制成銅離子的母液,然后分別配制成鉻離子質(zhì)量濃度為1.0、2.0、3.0、4.0mg/L梯度系列。每種濃度各三瓶,每瓶含培養(yǎng)液100mL,處于對數(shù)生長期的藻液10mL,置于恒溫搖床23℃、120r/min、光暗比12h:12h培養(yǎng),并測定初始ODs4。值。

    2.2.3斜生柵藻的培養(yǎng)

    本次實驗采用TAP培養(yǎng)基,培養(yǎng)容器為250mL三角瓶,平行樣3個,重復3次。藻液按照l:10于超凈工作臺接種,置于恒溫搖床23℃、120r/min、光暗比12h:12h培養(yǎng)至對數(shù)期。所有培養(yǎng)液及培養(yǎng)容器均須在高壓滅菌鍋中121℃高壓滅菌20min后使用。具體參照陶梅平的方法。

    2.2.4斜生柵藻在重金屬Zn2+、Cr2+、Cu2+脅迫下生長十

    通過預實驗將此次實驗周期定為8d,用光密度OD540值來反映重金屬Zn2+、Cr2+、Cu2+對斜生柵藻生長的影響。分別在0、2、4、6、8d對不同濃度的重金屬zn2+、Cr2+、Cu2+濃度脅迫下斜生柵藻的OD540值進行測定,具體參照代雅楠的方法。

    3結(jié)果與討論

    3.1斜生柵藻在重金屬Zn2+脅迫下的生長情況

    如圖1所示,與對照組相比,重金屬Zn2+濃度在O~4mg/L時,光密度值隨著培養(yǎng)時間的延長與對照同步增長,甚至培養(yǎng)8d后,光密度值超過對照;重金屬Zn2+濃度在4~8mg/L時,光密度值隨著培養(yǎng)時間的延長而增長較為緩慢;重金屬Zn2+濃度在16mg/L時,光密度值隨著培養(yǎng)時間的延長而變小;說明當重金屬Zn2+濃度在4mg/L以內(nèi)時,一定程度的重金屬Zn2+對斜生柵藻的生長有促進作用;當重金屬Zn2+濃度4~8mg/L范圍內(nèi)時,斜生柵藻仍有生長,但生長速率有一定程度的抑制;當重金屬Zn2+濃度8~16mg/L范圍內(nèi),斜生柵藻的生長遭到明顯抑制。說明斜生柵藻對重金屬Zn2+的生長耐受程度不超過8mg/L,并且0~4mg/L的添加量對斜生柵藻的生長沒有抑制作用,反而有促進生長的作用。

    3.2 斜生柵藻在重金屬Cr6+脅迫下的生長情況分析

    如圖2所示,與對照組相比,重金屬Cr6+濃度在0~1.5mg/L時,光密度值隨著培養(yǎng)時間的延長而緩慢增大;重金屬Cr6+濃度在2mg/L時,光密度值隨著培養(yǎng)時間的延長而減小;說明斜生柵藻在重金屬Cr6+濃度為O~1.5mg/L的脅迫下能正常生長,重金屬對其抑制作用不明顯,而Cr6+濃度為1.5~2mg/L的脅迫下,斜生柵藻的生長受到明顯抑制;因此斜生柵藻能耐重金屬Cr6+的濃度范圍是O~1.5mg/L。

    3.3斜生柵藻在重金屬Cu2+脅迫下的生生長情況分析

    如圖3所示,與對照組相比,重金屬Cu2+濃度在O~2mg/L時,光密度值隨著培養(yǎng)時間的延長而增長,重金屬Cu2+濃度在2~4mg/L時,光密度值隨著培養(yǎng)時間的延長而減小;說明說明斜生柵藻在重金屬Cu2+濃度為O~2mg/L的脅迫下能正常生長,重金屬對其抑制作用不明顯,而Cu2+濃度為2~4mg/L的脅迫下,斜生柵藻的生長受到明顯抑制;因此斜生柵藻能耐重金屬Cu2+的濃度范圍是O~2mg/L。

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