胃癌組織中microRNA-144-3p水平及與臨床病理特點(diǎn)和預(yù)后的關(guān)系

（義烏市中心醫(yī)院 病理科，浙江 義烏322000）

胃癌是胃黏膜上皮發(fā)生的惡性腫瘤，預(yù)后較差，對(duì)患者的生命健康造成嚴(yán)重威脅。近年來(lái)，隨著胃癌診療技術(shù)的不斷提高，胃癌的預(yù)后改善明顯，但胃癌早期診斷率比較低，使部分胃癌患者未能得到及時(shí)診治，導(dǎo)致胃癌的生存率不容樂(lè)觀[1]。探索影響胃癌發(fā)生、發(fā)展的標(biāo)志物，并對(duì)其進(jìn)行調(diào)控和干預(yù)，對(duì)早期防治胃癌和改善患者預(yù)后具有重要意義。MicroRNA（miRNA）在動(dòng)植物中廣泛存在，可與mRNA特異性結(jié)合發(fā)揮轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作用；miRNA在惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用[2-3]。miR-144-3p為miRNA的一種，在多種惡性腫瘤中呈低表達(dá)，其與惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、遷移及侵襲等關(guān)系密切[4-5]。本文對(duì)胃癌組織中miR-144-3p水平進(jìn)行研究，探討其與臨床病理特點(diǎn)和預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月—2013年12月在義烏市中心醫(yī)院進(jìn)行手術(shù)切除的100例胃癌患者的胃癌組織及其癌旁組織標(biāo)本。其中，男性59例，女性41例；年齡（63.24±5.26）歲；臨床分期：Ⅰ期32例，Ⅱ期24例，Ⅲ其33例，Ⅳ期11例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移49例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移51例；低分化28例，中分化38例，高分化34例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理證實(shí)為胃癌；②手術(shù)前未進(jìn)行放化療及其他治療；③患者簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他惡性腫瘤；②重要臟器功能不全；③圍手術(shù)期死亡；④術(shù)后無(wú)法接受隨訪及中途退出；⑤臨床資料及隨訪資料不全。本研究通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

胃癌組織和癌旁組織中miR-144-3p水平測(cè)定：取患者胃癌組織及癌旁組織標(biāo)本（距離腫瘤組織邊緣≥5 cm），置于冰上用生理鹽水沖洗干凈，取部分組織標(biāo)本在冰上研磨提取總RNA，測(cè)定總RNA的完整性和濃度。取總RNA 1μg逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR）測(cè)定組織中miR-144-3p水平。以U6為內(nèi)參照，qTR-PCR反應(yīng)條件：56℃預(yù)變性2 min，95℃變性 10 min，95℃退火 15 s，60℃延伸 60 s，共42個(gè)循環(huán)，用2-ΔΔCT法計(jì)算miR-144-3p相對(duì)表達(dá)量。Hsa-miR-144-3p正向引物：5'-ACACTCCAGCTG GGTACAGTATAGATGATGTA-3'，長(zhǎng)度32 bp；反向引物 ：5'-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3'，長(zhǎng)度 18 bp。U6反向引物：5'-CTGCTTCGGCAGCACA-3'，長(zhǎng)度16 bp；反向引物：5'-TGGTGTCGTGGAGTCG-3'，長(zhǎng)度16 bp。miR-144-3p引物及PCR試劑盒購(gòu)自美國(guó)ABI公司。

1.3 隨訪

胃癌患者術(shù)后通過(guò)電話或門(mén)診隨訪，隨訪時(shí)間從手術(shù)時(shí)間開(kāi)始至術(shù)后死亡時(shí)間或截止時(shí)間，截至?xí)r間為2018年12月31日。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用t檢驗(yàn)；Kaplan-Meier法繪制生存曲線，比較用Log-rank χ2檢驗(yàn)；影響因素的分析采用Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織和癌旁組織中miR-144-3p水平比較

胃癌組織與癌旁組織中miR-144-3p分別為（0.53±0.12）和（1.00±0.11），經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=28.872，P=0.000）；胃癌組織中miR-144-3p水平低于癌旁組織。見(jiàn)圖1。

2.2 胃癌組織中miR-144-3p水平與胃癌臨床病理特點(diǎn)的關(guān)系

不同臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度胃癌組織中miR-144-3p水平比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Ⅲ和Ⅳ期、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、中和低分化胃癌組織中miR-144-3p水平低于Ⅰ和Ⅱ期、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及高分化胃癌組織（P＜0.05）。不同年齡和性別胃癌患者miR-144-3p水平比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見(jiàn)表1。

2.3 胃癌組織中miR-144-3p水平與胃癌預(yù)后的關(guān)系

100例患者術(shù)后隨訪5年，以miR-144-3p在胃癌組織中水平的中位數(shù)為界，分為低表達(dá)46例和高表達(dá)54例。miR-144-3p高表達(dá)者5年總生存率和無(wú)病生存率分別高于低表達(dá)者（77.8% VS 52.2%）（68.5%VS 45.7%）。miR-144-3p高表達(dá)者與低表達(dá)者5年總生存率和無(wú)病生存率比較，經(jīng)χ2檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.257和5.332，P=0.007和0.021）。見(jiàn)圖2、3。

2.4 影響胃癌預(yù)后因素的Cox比例風(fēng)險(xiǎn)模型分析

以胃癌組織miR-144-3p表達(dá)、年齡、性別、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度為自變量進(jìn)行胃癌預(yù)后的Cox多因素分析，結(jié)果顯示：miR-144-3p低表達(dá)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度為影響胃癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

圖2 胃癌組織中miR-144-3p高低表達(dá)患者生存曲線

圖3 胃癌組織中miR-144-3p高低表達(dá)患者5年無(wú)病生存率

表2 影響胃癌預(yù)后因素的多因素Cox風(fēng)險(xiǎn)模型參數(shù)

3 討論

胃癌作為消化系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤，早期癥狀缺乏特異性，致使大多數(shù)患者確診時(shí)已為中晚期，嚴(yán)重影響患者的預(yù)后。隨著外科手術(shù)水平和放化療技術(shù)的不斷提高，胃癌的預(yù)后得到一定改善，但仍具有易轉(zhuǎn)移、高復(fù)發(fā)及預(yù)后差等惡性生物學(xué)特點(diǎn)[6-7]。因此，探索胃癌的早期診斷和預(yù)后標(biāo)志物具有重要意義。

miRNA是在真核生物體內(nèi)廣泛存在的一種微小RNA，與細(xì)胞增殖、分化、生長(zhǎng)、凋亡及應(yīng)激等多種生命活動(dòng)關(guān)系密切，在維持機(jī)體生理平衡中具有重要作用[8]。miRNA雖然只占人類基因庫(kù)的2%，但可調(diào)控體內(nèi)約30%基因表達(dá)，在不同組織和器官中的表達(dá)存在大量差異[9]。miRNA在惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中也具有重要作用，miRNA表達(dá)異常可引起靶基因表達(dá)異常，從而導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[10]。多種miRNA在胃癌的發(fā)生、發(fā)展及診治和預(yù)后中具有重要價(jià)值。如SHI等[11]研究發(fā)現(xiàn)，miR-373通過(guò)下調(diào)波形蛋白抑制胃癌轉(zhuǎn)移。WANG等[12]研究發(fā)現(xiàn)，miR-21抑制劑通過(guò)PTEN/PI3K/mTOR途徑調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞的生物學(xué)功能。ZHAO等[13]研究發(fā)現(xiàn)，miR-194和miR-29在胃癌診斷和預(yù)后中具有重要價(jià)值。DONG等[14]發(fā)現(xiàn)，miR-133a可直接靶向USP39抑制細(xì)胞增殖，并可預(yù)測(cè)胃癌的預(yù)后。

miR-144-3p具有多種生理和病理功能，在脂代謝尤其膽固醇逆行轉(zhuǎn)運(yùn)中具有重要作用[15]。miR-144-3p在多種惡性腫瘤中表達(dá)異常，在多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及診斷和預(yù)后預(yù)測(cè)中具有重要價(jià)值[16]。如miR-144-3p可通過(guò)下調(diào)ARID1A促進(jìn)腎透明細(xì)胞癌細(xì)胞增殖、轉(zhuǎn)移及舒尼替尼耐藥[17]；上調(diào)人肺癌細(xì)胞系H292中miR-144-3p引起細(xì)胞凋亡[18]；miR-144-3p通過(guò)絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路靶向富含脯氨酸蛋白11的表達(dá)，誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞的細(xì)胞周期阻滯和凋亡[19]；miR-144-3p在上皮性卵巢癌組織中低表達(dá)，與上皮性卵巢癌的直徑、病理分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切。miR-144-3p可能參與上皮性卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程，有望成為上皮性卵巢癌治療和預(yù)后的新靶點(diǎn)[20]。miR-144-3p在宮頸癌組織中低表達(dá)，與宮頸癌的臨床分期、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，miR-144-3p低表達(dá)可促進(jìn)宮頸癌的發(fā)生、發(fā)展[21]。

miR-144-3p與胃癌的關(guān)系也受到大家關(guān)注，如LI等[22]研究發(fā)現(xiàn)，miR-144-3p通過(guò)靶向前白血病轉(zhuǎn)錄因子3，抑制上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化來(lái)抑制胃癌細(xì)胞的增殖、遷移及侵襲。呂弢等[23]研究發(fā)現(xiàn)，miR-144-3p靶向調(diào)控ABCG2信號(hào)通路影響胃癌細(xì)胞侵襲和遷移。但目前關(guān)于miR-144-3p和胃癌的研究主要集中在細(xì)胞水平。本文對(duì)胃癌組織中miR-144-3p水平研究發(fā)現(xiàn)，胃癌組織中miR-144-3p水平降低，miR-144-3p水平與胃癌的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及分化程度關(guān)系密切。miR-144-3p低表達(dá)者的5年累積生存率和無(wú)病生存率較低，miR-144-3p低表達(dá)是影響胃癌預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，表明miR-144-3p可能在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用，與胃癌患者的臨床病理特點(diǎn)和預(yù)后關(guān)系密切。

綜上所述，胃癌組織中miR-144-3p水平降低，miR-144-3p在胃癌的診斷和預(yù)后評(píng)價(jià)中具有一定的價(jià)值。